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1. (WO2010072834) NUCLEIC ACID PURIFICATION METHOD
Latest bibliographic data on file with the International Bureau

Pub. No.: WO/2010/072834 International Application No.: PCT/EP2009/067909
Publication Date: 01.07.2010 International Filing Date: 23.12.2009
IPC:
C12N 15/10 (2006.01) ,C12Q 1/68 (2006.01)
C CHEMISTRY; METALLURGY
12
BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
N
MICRO-ORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICRO-ORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
15
Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
09
Recombinant DNA-technology
10
Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
C CHEMISTRY; METALLURGY
12
BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
Q
MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES OR MICRO-ORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
1
Measuring or testing processes involving enzymes or micro-organisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
68
involving nucleic acids
Applicants:
QIAGEN GmbH [DE/DE]; QIAGEN Str. 1 40724 Hilden, DE (AllExceptUS)
ERBACHER, Christoph [DE/DE]; DE (UsOnly)
FABIS, Roland [DE/DE]; DE (UsOnly)
Inventors:
ERBACHER, Christoph; DE
FABIS, Roland; DE
Priority Data:
102008063001.223.12.2008DE
Title (DE) NUKLEINSÄUREAUFREINIGUNGSVERFAHREN
(EN) NUCLEIC ACID PURIFICATION METHOD
(FR) PROCÉDÉ DE PURIFICATION D'ACIDES NUCLÉIQUES
Abstract:
(DE) Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Aufreinigung von Nukleinsäuren mit einer nukleinsäurebindenden Phase, die mit nukleinsäurebindenden Gruppen A mit einem pK von 8 bis 13 im Unterschuss ausgestattet ist oder die Gruppen A und bindungshemmende Gruppen N, die bei der Bindung und vorzugsweise bei der Elution neutral geladen sind, aufweist, und das Verfahren die folgenden Schritte aufweist: (a) Bindung der Nukleinsäuren an die nukleinsäurebindende Phase bei einem pH- Wert, der unterhalb des pK - Wertes der nukleinsäurebindenden Gruppen A liegt (Bindungs-pH Wert); (b) Elution der Nukleinsäuren bei einem pH-Wert, der oberhalb des Bindungs-pH Wertes liegt (Elutions-pH Wert). Darüber hinaus werden entsprechende Kits sowie nukleinsäurebindende Phasen, die zur Aufreinigung von Nukleinsäuren eingesetzt werden können, offenbart. Die erfindungsgemäße Technologie erlaubt die Aufreinigung der Nukleinsäuren und insbesondere die Elution unter Einsatz geringer Salzkonzentrationen, so dass die aufgereinigten Nukleinsäuren direkt weiterverarbeitet, bspw. in einer PCR eingesetzt werden können.
(EN) The present invention relates to a method for purifying nucleic acids using a nucleic acid-binding phase which is furnished with a deficit of nucleic acid-binding groups A having a pK of 8 to 13, or which has groups A and binding-inhibiting groups N which are neutrally charged during the binding, and preferably during the elution, and the method comprises the following steps: (a) binding the nucleic acids to the nucleic acid-binding phase at a pH which is below the pH of the pK of the nucleic acid-binding groups A (binding pH); (b) eluting the nucleic acids at a pH which is above the binding pH (elution pH). In addition, corresponding kits and also nucleic acid-binding phases which can be used for purifying nucleic acids are disclosed. The technology according to the invention permits the purification of nucleic acids and, in particular, elution, with use of low salt concentrations, and so the purified nucleic acids can be directly processed, for example used in a PCR.
(FR) La présente invention porte sur un procédé de purification d'acides nucléiques comprenant une phase de liaison aux acides nucléiques, qui comprend des groupes A de liaison aux acides nucléiques en déficit avec un pK de 8 à 13 ou comprend les groupes A et des groupes N empêchant la liaison, qui ont une charge neutre lors de la liaison et, de préférence, lors de l'élution. Le procédé comprend les étapes suivantes : (a) liaison des acides nucléiques à la phase de liaison aux acides nucléiques pour une valeur de pH qui se situe au-dessous de la valeur de pK des groupes A de liaison aux acides nucléiques (valeur de pH de liaison) ; (b) élution des acides nucléiques pour une valeur de pH qui se situe au-dessus de la valeur de pH de liaison (valeur de pH d'élution). L'invention porte également sur des kits correspondants ainsi que sur des phases de liaison aux acides nucléiques, qui peuvent être utilisées pour la purification d'acides nucléiques. La technologie selon l'invention permet la purification d'acides nucléiques et, en particulier, l'élution en présence de faibles concentrations de sel, si bien que les acides nucléiques purifiés peuvent directement subir un traitement ultérieur, par exemple peuvent être utilisés dans une PCR.
Designated States: AE, AG, AL, AM, AO, AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BH, BR, BW, BY, BZ, CA, CH, CL, CN, CO, CR, CU, CZ, DK, DM, DO, DZ, EC, EE, EG, ES, FI, GB, GD, GE, GH, GM, GT, HN, HR, HU, ID, IL, IN, IS, JP, KE, KG, KM, KN, KP, KR, KZ, LA, LC, LK, LR, LS, LT, LU, LY, MA, MD, ME, MG, MK, MN, MW, MX, MY, MZ, NA, NG, NI, NO, NZ, OM, PE, PG, PH, PL, PT, RO, RS, RU, SC, SD, SE, SG, SK, SL, SM, ST, SV, SY, TJ, TM, TN, TR, TT, TZ, UA, UG, US, UZ, VC, VN, ZA, ZM, ZW
African Regional Intellectual Property Organization (ARIPO) (BW, GH, GM, KE, LS, MW, MZ, NA, SD, SL, SZ, TZ, UG, ZM, ZW)
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European Patent Office (AT, BE, BG, CH, CY, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, FR, GB, GR, HR, HU, IE, IS, IT, LT, LU, LV, MC, MK, MT, NL, NO, PL, PT, RO, SE, SI, SK, SM, TR)
African Intellectual Property Organization (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, GQ, GW, ML, MR, NE, SN, TD, TG)
Publication Language: German (DE)
Filing Language: German (DE)
Also published as:
EP2382315JP2012513386US20110319506CN102264902AU2009332900JP6072945