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Pub. No.:    WO/2009/124296    International Application No.:    PCT/US2009/039558
Publication Date: 08.10.2009 International Filing Date: 03.04.2009
C40B 30/00 (2006.01)
Applicants: ALLOPARTIS BIOTECHNOLOGIES, INC. [US/US]; UCSF Mail Code 2522 Byers Hall, Room 218C 1700 4th Street San Francisco, CA 94158 (US) (For All Designated States Except US).
THE SCRIPPS RESEARCH INSTITUTE [US/US]; 10550 North Torrey Pines Road La Jolla, CA 92037 (US) (For All Designated States Except US).
BLAZEJ, Robert, G. [US/US]; (US) (For US Only).
PAEGEL, Brian, M. [US/US]; (US) (For US Only)
Inventors: BLAZEJ, Robert, G.; (US).
PAEGEL, Brian, M.; (US)
Agent: HALIDAY, Emily, M.; (US)
Priority Data:
61/042,637 04.04.2008 US
Abstract: front page image
(EN)Described are methods and means for enhancing enzyme activity toward insoluble substrates. This is achieved by means of in vitro compartmentalization in which an insoluble microparticle functions both as the enzyme substrate and as a structure for negative selection. Enhanced enzymes expressed from a microparticle-linked polynucleotide library preferentially degrade the microparticle releasing specific gene variants into solution. Gene variants encoding less active enzyme variants remain linked to the microparticle and may be removed through centrifugation, thus enriching the polynucleotide library for more active enzyme variants. These methods may be used to enhance cellulase and ligninase activity toward insoluble cellulosic biomass.
(FR)L’invention concerne des procédés et des moyens d’amélioration de l’activité enzymatique envers des substrats insolubles. Ceci est réalisé par une compartimentation in vitro selon laquelle une microparticule insoluble fonctionne à la fois en tant que substrat enzymatique et en tant que structure pour la sélection négative. Les enzymes améliorées exprimées à partir d’une bibliothèque de polynucléotides reliés à des microparticules dégradent préférentiellement la microparticule en libérant des variantes géniques spécifiques dans la solution. Les variantes géniques qui codent pour des variantes enzymatiques moins actives restent liées à la microparticule et peuvent être éliminées par centrifugation, enrichissant ainsi la bibliothèque de polynucléotides avec davantage de variantes enzymatiques actives. Ces procédés peuvent être utilisés pour améliorer l’activité de la cellulase et de la ligninase envers la biomasse cellulosique insoluble.
Designated States: AE, AG, AL, AM, AO, AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BH, BR, BW, BY, BZ, CA, CH, CN, CO, CR, CU, CZ, DE, DK, DM, DO, DZ, EC, EE, EG, ES, FI, GB, GD, GE, GH, GM, GT, HN, HR, HU, ID, IL, IN, IS, JP, KE, KG, KM, KN, KP, KR, KZ, LA, LC, LK, LR, LS, LT, LU, LY, MA, MD, ME, MG, MK, MN, MW, MX, MY, MZ, NA, NG, NI, NO, NZ, OM, PG, PH, PL, PT, RO, RS, RU, SC, SD, SE, SG, SK, SL, SM, ST, SV, SY, TJ, TM, TN, TR, TT, TZ, UA, UG, US, UZ, VC, VN, ZA, ZM, ZW.
African Regional Intellectual Property Organization (BW, GH, GM, KE, LS, MW, MZ, NA, SD, SL, SZ, TZ, UG, ZM, ZW)
Eurasian Patent Organization (AM, AZ, BY, KG, KZ, MD, RU, TJ, TM)
European Patent Office (AT, BE, BG, CH, CY, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, FR, GB, GR, HR, HU, IE, IS, IT, LT, LU, LV, MC, MK, MT, NL, NO, PL, PT, RO, SE, SI, SK, TR)
African Intellectual Property Organization (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, GQ, GW, ML, MR, NE, SN, TD, TG).
Publication Language: English (EN)
Filing Language: English (EN)