(EN) A micro-analytical platform for performing electrophoresis-based immunoassays was developed by integrating photopolymerized cross-linked polyacrylamide gels within a microfluidic device. The microfluidic immunoassays are performed by gel electrophoretic separation and quantifying analyte concentration based upon conventional polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE). To retain biological activity of proteins and maintain intact immune complexes, native PAGE conditions were employed. Both direct (non-competitive) and competitive immunoassay formats are demonstrated in microchips for detecting toxins and biomarkers (cytokines, c-reactive protein) in bodily fluids (serum, saliva, oral fluids). Further, a description of gradient gels fabrication is included, in an effort to describe methods we have developed for further optimization of on-chip PAGE immunoassays. The described chip-based PAGE immunoassay method enables immunoassays are fast (minutes) and require very small amounts of sample (less than a few microliters). Use of microfabricated chips as a platfo&pgr;n enables integration, parallel assays, automation and development of portable devices.
(FR) Une plate-forme micro-analytique de réalisation d'immunodosages basés sur une électrophorèse a été développée par intégration de gels de polyacrylamide réticulés photopolymérisés au sein d'un dispositif microfluidique. Ces immunodosages microfluidiques sont obtenus par séparation électrophorétique sur gel et quantification d'une concentration d'analytes basée sur une électrophorèse traditionnelle sur gel de polyacrylamide (PAGE). Pour retenir une activité biologique de protéines et maintenir des complexes immuns intacts, des conditions PAGE natives sont utilisées. Des formats d'immunodosages directs (non compétitifs) et compétitifs sont démontrés dans des micropuces de manière à détecter des toxines et des biomarqueurs (cytokines, protéine c-réactive) dans des fluides corporels (sérum, salive, liquides buccaux). En outre, cette invention a aussi pour objet une description de la fabrication de gels de gradient dans un souci de décrire des méthodes développées pour l'optimisation d'immunodosages PAGE sur puce. Cette méthode d'immunodosage PAGE basée sur une puce permet d'activer des immunodosages qui sont rapides (agissant en quelques minutes) et nécessitent de très petites quantités d'échantillon (moins de quelques microlitres). L'utilisation de puces microfabriquées en tant que plate-forme permet une intégration, des dosages parallèles, l'automatisation et le développement de dispositifs portables.