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1. (WO2007011091) MONOCLONAL ANTIBODY FOR HIPPURIC ACID ANTIGEN
Latest bibliographic data on file with the International Bureau   

Pub. No.:    WO/2007/011091    International Application No.:    PCT/KR2005/002493
Publication Date: 25.01.2007 International Filing Date: 30.07.2005
IPC:
C07K 16/44 (2006.01), G01N 33/53 (2006.01), G01N 33/577 (2006.01)
Applicants: TAE, Gun, Sik [KR/KR]; (KR).
CHUNG, Hee, Sun [KR/KR]; (KR) (For US Only).
KWON, Oh, Hyep [KR/KR]; (KR) (For US Only).
LEE, Seung, Hwa [KR/KR]; (KR) (For US Only)
Inventors: TAE, Gun, Sik; (KR).
CHUNG, Hee, Sun; (KR).
KWON, Oh, Hyep; (KR).
LEE, Seung, Hwa; (KR)
Agent: HYUN, Jong Cheol; Dooji Bldg 4F, 353-18, Sindang 2-dong, Jung-gu, Seoul 100-828 (KR)
Priority Data:
10-2005-0067033 22.07.2005 KR
Title (EN) MONOCLONAL ANTIBODY FOR HIPPURIC ACID ANTIGEN
(FR) ANTICORPS MONOCLONAL POUR ANTIGENE D'ACIDE HIPPURIQUE
Abstract: front page image
(EN)Provided is a monoclonal antibody specific for hippuric acid which is one of the representative harmful hallucinogenic substances and is the major metabolite of toluene. In the present invention, a hippuric acid-carrier protein conjugate is prepared from hippuric acid and BSA or OVA as a carrier protein, using a coupling reagent and a cross-linker, mice are immunized by injection of the resulting conjugate, splenocytes are collected from animals and fused with myeloma cells, fused cells are cultured in HAT medium, a cell line producing a hippuric acid-directed monoclonal antibody is screened using a detection conjugate, a gene coding for variable regions of the screened monoclonal antibody is amplified by RT-PCR and then amplified by SOE-PCR using a linker DNA to thereby prepare a single chain variable fragment (scFV) which is cloned into a vector, thereby sequencing the base sequence and deducing amino acid sequences of the variable regions. The monoclonal antibody screened according to the present invention has a titer having a standard curve in the concentration range of mg/mL meeting requirements for the permissible exposure limit (PEL) of toluene, exhibits no cross-reactivity with carrier proteins, exhibits higher competitive inhibition in response to an increasing concentration of hippuric acid and exhibits no cross-reactivity with other proteins contained in the urine, and therefore can be usefully employed in a diagnostic kit for detection of hippuric acid which is capable of diagnosing toluene exposure.
(FR)L'invention concerne un anticorps monoclonal spécifique à l'acide hippurique, une substance hallucinogène dangereuse et constituant le métabolite principal du toluène. Dans la présente invention, un conjugué acide hippurique-protéine de support est préparé à partir de l'acide hippurique et de BSA ou OVA comme protéine de support, à l'aide d'un réactif de couplage et d'un agent de réticulation. Des souris sont immunisées par injection du conjugué obtenu, des splénocytes sont prélevés chez des animaux et fusionnés avec des cellules myélomateuses, les cellules fusionnées sont mises en culture dans un milieu HAT, une lignée cellulaire générant un anticorps monoclonal dirigé contre l'acide hippurique est criblée à l'aide d'un conjugué de détection, un gène codant pour des zones variables de l'anticorps monoclonal criblé est amplifié par RT-PCR, puis amplifié par SOE-PCR à l'aide d'un ADN de liaison afin d'obtenir un fragment variable monocaténaire (scFV) qui est cloné dans un vecteur, permettant ainsi le séquençage de la séquence de base et déduisant des séquences d'acides aminés des zones variables. L'anticorps monoclonal criblé selon la présente invention présente un titre avec une courbe standard dans la gamme de concentration requise de mg/mL pour la limite d'exposition autorisée (PEL) du toluène, ne présente aucune réactivité croisée avec les protéines de support, présente une inhibition supérieure en réponse à une concentration supérieure d'acide hippurique, ne présente aucune réactivité croisée avec d'autres protéines contenues dans l'urine, et peut être ainsi avantageusemennt utilisé dans un kit de diagnostic pour la détection de l'acide hippurique pouvant diagnostiquer l'exposition au toluène.
Designated States: AE, AG, AL, AM, AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BR, BW, BY, BZ, CA, CH, CN, CO, CR, CU, CZ, DE, DK, DM, DZ, EC, EE, EG, ES, FI, GB, GD, GE, GH, GM, HR, HU, ID, IL, IN, IS, JP, KE, KG, KM, KP, KZ, LC, LK, LR, LS, LT, LU, LV, MA, MD, MG, MK, MN, MW, MX, MZ, NA, NG, NI, NO, NZ, OM, PG, PH, PL, PT, RO, RU, SC, SD, SE, SG, SK, SL, SM, SY, TJ, TM, TN, TR, TT, TZ, UA, UG, US, UZ, VC, VN, YU, ZA, ZM, ZW.
African Regional Intellectual Property Organization (BW, GH, GM, KE, LS, MW, MZ, NA, SD, SL, SZ, TZ, UG, ZM, ZW)
Eurasian Patent Organization (AM, AZ, BY, KG, KZ, MD, RU, TJ, TM)
European Patent Office (AT, BE, BG, CH, CY, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, FR, GB, GR, HU, IE, IS, IT, LT, LU, LV, MC, NL, PL, PT, RO, SE, SI, SK, TR)
African Intellectual Property Organization (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, GQ, GW, ML, MR, NE, SN, TD, TG).
Publication Language: English (EN)
Filing Language: Korean (KO)