1. WO2006122443 - THE METHOD FOR KNOCKING-OUT THE FISH GENE

The present invention disclosed a method for knocking-out the fish gene, comprising the steps of: 1) isolating the fish's substituting gene sequence, target gene sequence and flaking sequence thereof; 2) providing the target gene sequence of fish as the target DNA fragment for the homologous recombination; 3) constructing the homologous recombination vectors; 4) introducing the homologous recombination vectors into the fish oosperms by using micro-injections after artificial fertilization and before the first cleavage, and then incubating; 5) selecting the embryo carrying the markers with positive direction only to obtain the chimera with homologous recombination; 6) cross breeding the chimera to obtain homozygote. The method would avoid the random integration of the exogenous gene, and eliminate people's suspicion about the safety for transgenic organism, due to the fish gene knock-out by using homologous recombination. The present invention also established effective gene homologous recombination technology by constructing homologous recombination vectors, and made it possible to introduce site-directed and quantified mutagenesis into the genetic structure of fish as designed, thereby to modify directionally the genetic structure and properties of the cell and the organism per se.

L'invention concerne un procédé d'élimination du gène des poissons comprenant les étapes: 1) isolation de la séquence génétique de substitution du poisson, de la séquence génétique cible et la séquence d'arrachage; 2) apport de la séquence génétique cible du poisson comme fragment ADN cible pour la recombinaison homologue; 3) construction des vecteurs de recombinaison homologues; 4) introduction des vecteurs de recombinaison homologues dans le sperme du poisson en utilisant des microinjections après fécondation artificielle et avant la premier clivage, suivie de l'incubation; 5) sélection de l'embryon portant les marqueurs à direction positives afin d'obtenir uniquement le chimère à recombinaison analogue; 6) croisement entre races des chimères afin d'obtenir un homozygote. Le procédé permet d'éviter l'intégration aléatoire du gène exogène et de rassurer les gens quant à son innocuité pour l'organisme transgénique en raison de l'élimination du gène des poissons par utilisation de la recombinaison homologue. L'invention concerne également la technologie efficace de recombinaison homologue génétique par construction de vecteurs de recombinaisons homologues et rend possible l'introduction d'une mutagenèse orientée sur le site et quantifiée dans la structure génétique du poisson tel quel, avec pour effet de modifier directionnellement la structure génétique et les propriétés de la cellule et de l'organisme à proprement parlé.