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1. (WO2005123925) RNAI-BASED METHOD FOR SELECTING TRANSFECTED EUKARYOTIC CELLS
Latest bibliographic data on file with the International Bureau   

Pub. No.:    WO/2005/123925    International Application No.:    PCT/EP2005/006488
Publication Date: 29.12.2005 International Filing Date: 16.06.2005
IPC:
C12N 15/82 (2006.01), C12N 15/64 (2006.01), C12N 15/65 (2006.01)
Applicants: HELMHOLTZ-ZENTRUM FÜR INFEKTIONSFORSCHUNG GMBH [DE/DE]; Inhoffenstrasse 7, 38124 Braunschweig (DE) (For All Designated States Except US).
HAFNER, Martin [DE/DE]; (DE) (For US Only).
NAWRATH, Karina [DE/DE]; (DE) (For US Only).
MÜLLER, Werner [DE/DE]; (DE) (For US Only)
Inventors: HAFNER, Martin; (DE).
NAWRATH, Karina; (DE).
MÜLLER, Werner; (DE)
Agent: VOSSIUS & PARTNER; Siebertstrasse 4, 81675 München (DE)
Priority Data:
04014124.4 16.06.2004 EP
Title (DE) RNAi-BASIERTE VERFAHREN ZUR SELEKTION VON TRANSFIZIERTEN EUKARYONTISCHEN ZELLEN
(EN) RNAI-BASED METHOD FOR SELECTING TRANSFECTED EUKARYOTIC CELLS
(FR) PROCEDES BASES SUR L'INTERFERENCE ARN POUR LA SELECTION DE CELLULES EUCARYOTES TRANSFECTEES
Abstract: front page image
(DE)Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung einer durch Inaktivierung oder Reduzierung einer endogenen Genfunktion selektionierbaren eukaryontischen Zelle, umfassend die Schritte (a) der Einführung einer oder mehrerer Vektoren in die Zelle und (b) der Expression einer von dem einen oder den mehreren Vektoren kodierten siRNA und vorzugsweise shRNA, die gegen ein endogenes selektionierbares Gen gerichtet ist und dieses inaktiviert, wobei die siRNA oder shRNA das Transkriptionsprodukt einer RNAi-Selektionskassette ist, wobei die Selektionskassette einen zumindest 19 Nukleotide langen Abschnitt der transkribierten Region des Gens umfasst, der funktionell mit einem Promoter und einem Transkriptionsterminationssignal verbunden ist. Darüber hinaus betrifft die Erfindung eine eukaryontische Zelle, umfassend eine RNAi-Selektionskassette die gegen ein endogenes selektionierbares Gen gerichtet ist, und dessen Funktion inaktiviert; wobei die RNAi-Selektionskassette einen zumindest 19 Nukleotide langen Abschnitt des Gens umfasst, der funktionell mit einem Promotor und einem Transkriptionsterminationssignal verbunden ist. Weiterhin betrifft die Erfindung Verfahren zur Herstellung eines transgenen Säugers, umfassend die Schritte: (a) Injektion der erfindungsgemäßen embryonalen Stammzelle oder einer nach dem erfindungsgemäßen Verfahren selektionierten embryonalen Stammzelle in Blastocysten eines Säugers, (b) Übertragen der Blastocysten in die Gebärmutter eines Säugers, und (c) Austragen des transgenen Säugers. Schliesslich betrifft die Erfindung ein Verfahren zur Herstellung einer transgenen Pflanze.
(EN)The invention relates to a method for producing a eukaryotic cell that can be selected by the inactivation or reduction of an endogenic genetic function, comprising the following steps: (a) introduction of one or more vectors into the cell; and (b) the expression of siRNA or preferably shRNA that is coded by the one or more vectors, is directed against an endogenic, selectable gene and inactivates the latter, the siRNA or shRNA being the transcription product of an RNAi selection cassette and said selection cassette comprising a section of the transcribed region of the gene, containing at least 19 nucleotides, whereby the section is functionally connected to a promoter and a transcription termination signal. The invention also relates to a eukaryotic cell comprising an RNAi selection cassette that is directed against an endogenic selectable gene and inactivates the function of the latter, said RNAi selection cassette comprising a section of the gene containing at least 19 nucleotides, whereby the section is functionally connected to a promoter and a transcription termination signal. The invention further relates to a method for producing a transgenic mammal, comprising the following steps: (a) injection of the inventive embryonic stem cell or an embryonic stem cell that has been selected according to the inventive method into blastocysts of a mammal; (b) transfer of the blastocysts into the womb of a mammal; and (c) delivery of the transgenic mammal. The invention also relates to a method for producing a transgenic plant.
(FR)L'invention concerne un procédé servant à produire une cellule eucaryote sélectionnable par inactivation ou réduction d'une fonction génétique endogène et comprenant les étapes suivantes : (a) introduction d'un ou de plusieurs vecteurs dans la cellule et (b) expression d'un siRNA (ARN interférant court), et de préférence d'un shRNA (ARN en épingle à cheveux), qui est codé par le ou les vecteurs, qui est dirigé contre un gène sélectionnable endogène et qui l'inactive. Le siRNA ou le shRNA est le produit de transcription d'une cassette de sélection RNAi (interférence ARN) qui comprend un segment, long d'au moins 19 nucléotides, de la région transcrite du gène, ce segment étant relié fonctionnellement à un promoteur et à un signal de terminaison de transcription. L'invention concerne également une cellule eucaryote qui comprend une cassette de sélection RNAi qui est dirigée contre un gène sélectionnable endogène et qui inactive la fonction de ce dernier. Cette cassette de sélection RNAi comprend un segment long d'au moins 19 nucléotides du gène, ce segment étant relié fonctionnellement à un promoteur et à un signal de terminaison de transcription. L'invention concerne en outre des procédés servant à produire un mammifère transgénique et comprenant les étapes suivantes : (a) injection de la cellule souche embryonnaire selon l'invention ou d'une cellule souche embryonnaire sélectionnée selon le procédé de l'invention dans des blastocystes d'un mammifère ; (b) transfert des blastocystes dans l'utérus d'un mammifère ; (c) développement et naissance du mammifère transgénique. L'invention concerne enfin un procédé pour la production d'une plante transgénique.
Designated States: AE, AG, AL, AM, AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BR, BW, BY, BZ, CA, CH, CN, CO, CR, CU, CZ, DE, DK, DM, DZ, EC, EE, EG, ES, FI, GB, GD, GE, GH, GM, HR, HU, ID, IL, IN, IS, JP, KE, KG, KM, KP, KR, KZ, LC, LK, LR, LS, LT, LU, LV, MA, MD, MG, MK, MN, MW, MX, MZ, NA, NG, NI, NO, NZ, OM, PG, PH, PL, PT, RO, RU, SC, SD, SE, SG, SK, SL, SM, SY, TJ, TM, TN, TR, TT, TZ, UA, UG, US, UZ, VC, VN, YU, ZA, ZM, ZW.
African Regional Intellectual Property Organization (BW, GH, GM, KE, LS, MW, MZ, NA, SD, SL, SZ, TZ, UG, ZM, ZW)
Eurasian Patent Organization (AM, AZ, BY, KG, KZ, MD, RU, TJ, TM)
European Patent Office (AT, BE, BG, CH, CY, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, FR, GB, GR, HU, IE, IS, IT, LT, LU, MC, NL, PL, PT, RO, SE, SI, SK, TR)
African Intellectual Property Organization (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, GQ, GW, ML, MR, NE, SN, TD, TG).
Publication Language: German (DE)
Filing Language: German (DE)