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Pub. No.:    WO/2005/103074    International Application No.:    PCT/US2005/009190
Publication Date: 03.11.2005 International Filing Date: 18.03.2005
C07K 14/195 (2006.01)
Applicants: BOARD OF REGENTS, THE UNIVERSITY OF TEXAS SYSTEM [US/US]; 201 W. 7th Street, Austin, TX 78701 (US) (For All Designated States Except US).
GEORGIOU, George [US/US]; (US) (For US Only).
JEONG, Ki Jun [KR/US]; (US) (For US Only).
IVERSON, Brent, L. [US/US]; (US) (For US Only)
Inventors: GEORGIOU, George; (US).
JEONG, Ki Jun; (US).
IVERSON, Brent, L.; (US)
Agent: HANSON, Robert, E.; Fulbright & Jaworski L.L.P., 600 Congress Avenue, Suite 2400, Austin, TX 78701 (US)
Priority Data:
60/554,260 18.03.2004 US
Abstract: front page image
(EN)The invention overcomes the deficiencies of the prior art by providing a rapid approach for isolating binding proteins capable of binding small molecules and peptides. In the technique, libraries of candidate binding proteins, such as antibody sequences, may be expressed in the periplasm of gram negative bacteria with at least one target ligand. In clones expressing recombinant polypeptides with affinity for the ligand, the ligand becomes bound and retained by the cell even after removal of the outer membrane, allowing the cell to be isolated from cells not expressing a binding polypeptide with affinity for the target ligand. The target ligand may be detected in numerous ways, including use of direct fluorescence or secondary antibodies that are fluorescently labeled, allowing use of efficient screening techniques such as fluorescence activated cell sorting (FACS). The approach is more rapid and robust than prior art methods and avoids problems associated with the outer surface­ expression of ligand fusion proteins employed with phage display.
(FR)L'invention permet de pallier les insuffisantes de l'art antérieur, en fournissant une approche rapide pour isoler des protéines de liaison, aptes à lier de petites molécules et des peptides. Selon la technique, des bibliothèques de protéines de liaison candidates, telles que des séquences d'anticorps, peuvent être exprimées dans le périplasme de bactéries gram négatif avec au moins un ligand cible. Dans des clones exprimant des polypeptides recombinés à affinité pour le ligand, ledit ligand se trouve lié et retenu par la cellule, même après élimination de la membrane extérieure, ce qui permet à la cellule d'être isolée des cellules qui n'expriment pas de polypeptide de liaison à affinité avec le ligand cible. Le ligand cible peut être détecté de nombreuses manières, y compris par fluorescence directe ou par anticorps secondaires, marqués par fluorescence, ce qui permet d'utiliser des techniques de criblage efficaces, comme le tri de cellules activé par fluorescence (FACS). Cette approche est plus rapide et plus robuste que les procédés de l'art antérieur et évite les problèmes associés à l'expression en surface extérieure de protéines hybrides à ligand, liés à l'expression en surface extérieure de protéines hybrides à ligand utilisées avec la méthode d'expression phagique.
Designated States: AE, AG, AL, AM, AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BR, BW, BY, BZ, CA, CH, CN, CO, CR, CU, CZ, DE, DK, DM, DZ, EC, EE, EG, ES, FI, GB, GD, GE, GH, GM, HR, HU, ID, IL, IN, IS, JP, KE, KG, KP, KR, KZ, LC, LK, LR, LS, LT, LU, LV, MA, MD, MG, MK, MN, MW, MX, MZ, NA, NI, NO, NZ, OM, PG, PH, PL, PT, RO, RU, SC, SD, SE, SG, SK, SL, SM, SY, TJ, TM, TN, TR, TT, TZ, UA, UG, US, UZ, VC, VN, YU, ZA, ZM, ZW.
African Regional Intellectual Property Organization (BW, GH, GM, KE, LS, MW, MZ, NA, SD, SL, SZ, TZ, UG, ZM, ZW)
Eurasian Patent Organization (AM, AZ, BY, KG, KZ, MD, RU, TJ, TM)
European Patent Office (AT, BE, BG, CH, CY, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, FR, GB, GR, HU, IE, IS, IT, LT, LU, MC, NL, PL, PT, RO, SE, SI, SK, TR)
African Intellectual Property Organization (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, GQ, GW, ML, MR, NE, SN, TD, TG).
Publication Language: English (EN)
Filing Language: English (EN)