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1. WO2005066347 - PROTEINS

Publication Number WO/2005/066347
Publication Date 21.07.2005
International Application No. PCT/IB2004/004378
International Filing Date 23.12.2004
IPC
C CHEMISTRY; METALLURGY
12
BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
N
MICRO-ORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICRO-ORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
9
Enzymes, e.g. ligases (6.); Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating, or purifying enzymes
10
Transferases (2.)
C CHEMISTRY; METALLURGY
12
BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
N
MICRO-ORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICRO-ORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
9
Enzymes, e.g. ligases (6.); Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating, or purifying enzymes
14
Hydrolases (3.)
C CHEMISTRY; METALLURGY
12
BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
P
FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
7
Preparation of oxygen-containing organic compounds
64
Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
C12N 9/10 (2006.01)
C12N 9/14 (2006.01)
C12P 7/64 (2006.01)
CPC
C12N 9/1029
C12Y 203/01085
Applicants
  • DANISCO A/S [DK/DK]; Langebrogade 1 P.O. Box 17, DK (AllExceptUS)
  • KELLET-SMITH, Anja Hemmingsen [DK/DK]; DK (UsOnly)
  • LORENTSEN, Rikke, Høegh [DK/DK]; DK (UsOnly)
  • SØE, jørn, Borch [DK/DK]; DK (UsOnly)
  • MIKKELSON, Jørn, Dalgaard [DK/DK]; DK (UsOnly)
  • KREIJ, Arno de [NL/NL]; NL (UsOnly)
Inventors
  • KELLET-SMITH, Anja Hemmingsen; DK
  • LORENTSEN, Rikke, Høegh; DK
  • SØE, jørn, Borch; DK
  • MIKKELSON, Jørn, Dalgaard; DK
  • KREIJ, Arno de; NL
Agents
  • WILLIAMS, Aylsa; D. Young & Co. 120 Holborn London EC1N 2DY, GB
Priority Data
0330016724.12.2003GB
0415999.216.07.2004GB
10/911,16002.08.2004US
PCT/IB2004/00065515.01.2004IB
Publication Language English (EN)
Filing Language English (EN)
Designated States
Title
(EN) PROTEINS
(FR) PROTEINES
Abstract
(EN)
The present invention relates to a method of producing a variant glycolipid acyltransferase enzyme comprising: (a) selecting a parent enzyme which is a glycolipid acyltransferase enzyme characterised in that the enzyme comprises the amino acid sequence motif GDSX, wherein X is one or more of the following amino acid residues L, A, V, I, F, Y, H, Q, T, N, M or S; (b) modifying one or more amino acids to produce a variant glycolipid acyltransferase; (c) testing the variant glycolipid acyltransferase for transferase activity, an optionally hydrolytic activity, on a galactolipid substrate, and optionally a phospholipid substrate and/or optionally a triglyceride substrate; (d) selecting a variant enzyme with an enhanced activity towards galactolipids compared with the parent enzyme; and optionally (e) preparing a quantity of the variant enzyme. The present invention further relates to variant lipid acyltransferase enzyme characterised in that the enzyme comprises the amino acid sequence motif GDSX, wherein X is one or more of the following amino acid residues L, A, V, I, F, Y, H, Q, T, N, M or S, and wherein the variant enzyme comprises one or more amino acid modifications compared with a parent sequence at any one or more of the amino acid residues defined in set 2, set 4, set 6 or set 7.
(FR)
La présente invention concerne un procédé permettant de produire une variante de l'enzyme acyltransférase glycolipidique et consistant: (a) à sélectionner une enzyme parente qui est une enzyme acyltransférase glycolipidique qui se caractérise en ce qu'elle comprend le motif de séquence d'acides aminés GDSX, X désignant un ou plusieurs des résidus d'acides aminés suivants: L, A, V, I, F, Y, H, Q, T, N, M ou S; (b) à modifier un ou plusieurs acides aminés pour produire une variante de l'acyltransférase glycolipidique; (c) à tester la variante de l'acyltransférase glycolipidique pour connaître son activité transférase, éventuellement une activité hydrolytique, sur un substrat galactolipidique et éventuellement un substrat phospholipidique et/ou éventuellement un substrat de triglycérides; (d) à sélectionner une variante d'une enzyme présentant une activité accrue à l'égard des galactolipides comparée à celle de l'enzyme parente; et éventuellement (e) à préparer une certaine quantité de la variante de l'enzyme. Cette invention concerne également une variante de l'enzyme acyltransférase lipidique qui se caractérise en ce que l'enzyme comprend le motif de séquence d'acides aminés GDSX, X désignant un ou plusieurs des résidus d'acides aminés suivants: L, A, V, I, F, Y, H, Q, T, N, M ou S, laquelle variante de l'enzyme comprend une ou plusieurs modifications d'acides aminés comparée à une séquence parente au niveau d'un ou plusieurs des résidus d'acides aminés définis dans l'ensemble 2, l'ensemble 4, l'ensemble 6 ou l'ensemble 7.
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