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1. (WO2004099392) TRANSFECTION METHOD FOR MAMMALIAN CELLS
Latest bibliographic data on file with the International Bureau   

Pub. No.:    WO/2004/099392    International Application No.:    PCT/EP2004/004840
Publication Date: 18.11.2004 International Filing Date: 06.05.2004
IPC:
C12N 5/00 (2006.01)
Applicants: GBF-GESELLSCHAFT FÜR BIOTECHNOLOGISCHE FORSCHUNG MbH [DE/DE]; Mascheroder Weg 1, 38124 Braunschweig (DE) (For All Designated States Except US).
WAGNER, Roland [DE/DE]; (DE) (For US Only).
BEER, Christiane [DE/DE]; (DE) (For US Only).
BASSANI MOLINAS, Maria de los Milagros [AR/DE]; (DE) (For US Only).
WIRTH, Manfred [DE/DE]; (DE) (For US Only)
Inventors: WAGNER, Roland; (DE).
BEER, Christiane; (DE).
BASSANI MOLINAS, Maria de los Milagros; (DE).
WIRTH, Manfred; (DE)
Agent: VOSSIUS & PARTNER; Siebertsrasse 4, 81675 München (DE)
Priority Data:
03010206.5 06.05.2003 EP
Title (DE) TRANFEKTIONSVERFAHREN FÜR SÄUGERZELLEN
(EN) TRANSFECTION METHOD FOR MAMMALIAN CELLS
(FR) METHODE DE TRANSFECTION POUR CELLULES DE MAMMIFERE
Abstract: front page image
(DE)Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur transienten Expression von (Poly)peptiden in Säugerzellen, wobei man die folgenden Schritte durchführt: (a) Züchtung von Säugerzellen in einem Medium, das aus Calcium-freiem, mit Vitaminen und Aminosäuren supplementiertem DMEM und FreestyleTM Medium in einem Volumenverhältnis von 30:70 bis 70:30 besteht; (b) Transfektion der in Schritt (a) genannten Säugerzellen mit einem das (Poly)peptid kodierenden und exprimierbaren Nucleinsäuremolekül in Calcium-freiem DMEM unter Verwendung von Polyethylenimin; und (c) Züchtung der in Schritt (b) transfizierten Säugerzellen. Bevorzugt ist dabei, dass die Transfektion in Schritt (b) in einem Pilot- oder Produktionsbioreaktor durchgeführt wird. Ferner betrifft die Erfindung ein Kulturmedium, das das aus Calcium-freiem, mit Vitaminen und Aminosäuren supplementiertern DMEM und FreestyleTM Medium in einem Volumenverhältnis von 30:70 bis 70:30 besteht.
(EN)The invention relates to a method for the transient expression of (poly)peptides in mammalian cells, comprising the following steps: (a) mammalian cells are cultured in a medium consisting of calcium-free DMEM that is supplemented with vitamins and amino acids, and FreestyleTM medium at a proportion by volume of 30:70 to 70:30; (b) the mammalian cells mentioned in step (a) are transfected with an expressible nucleic acid molecule which codes the (poly)peptide in calcium-free DMEM by using polyethyleneimine; and (c) the mammalian cells transfected in step (b) are cultured. Preferably, the transfection in step (b) is carried out in a pilot bioreactor or production bioreactor. The invention further relates to a culture medium comprising calcium-free DMEM that is supplemented with vitamins and amino acids, and FreestyleTM medium at a proportion by volume of 30:70 to 70:30.
(FR)Méthode d'expression transitoire de (poly)peptides dans des cellules de mammifère, qui consiste (a) à cultiver des cellules de mammifère dans un milieu constitué d'un milieu DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium) exempt de calcium et enrichi en vitamines et en acides aminés et d'un milieu FreestyleTM dans un rapport volumique de 30 / 70 à 70 / 30, (b) à transfecter les cellules de mammifère mentionnées à l'étape (a) avec une molécule d'acide nucléique codant le (poly)peptide et pouvant être exprimée dans un DMEM exempt de calcium en présence d'une polyéthylènimine et (c) à cultiver les cellules de mammifère transfectées à l'étape (b). De préférence, la transfection à l'étape (b) est effectuée dans un bioréacteur pilote ou de production. La présente invention concerne en outre un milieu de culture qui est constitué d'un milieu DMEM exempt de calcium et enrichi en vitamines et en acides aminés et d'un milieu FreestyleTM dans un rapport volumique de 30 / 70 à 70 / 30.
Designated States: AE, AG, AL, AM, AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BR, BW, BY, BZ, CA, CH, CN, CO, CR, CU, CZ, DE, DK, DM, DZ, EC, EE, EG, ES, FI, GB, GD, GE, GH, GM, HR, HU, ID, IL, IN, IS, JP, KE, KG, KP, KR, KZ, LC, LK, LR, LS, LT, LU, LV, MA, MD, MG, MK, MN, MW, MX, MZ, NA, NI, NO, NZ, OM, PG, PH, PL, PT, RO, RU, SC, SD, SE, SG, SK, SL, SY, TJ, TM, TN, TR, TT, TZ, UA, UG, US, UZ, VC, VN, YU, ZA, ZM, ZW.
African Regional Intellectual Property Organization (BW, GH, GM, KE, LS, MW, MZ, NA, SD, SL, SZ, TZ, UG, ZM, ZW)
Eurasian Patent Organization (AM, AZ, BY, KG, KZ, MD, RU, TJ, TM)
European Patent Office (AT, BE, BG, CH, CY, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, FR, GB, GR, HU, IE, IT, LU, MC, NL, PL, PT, RO, SE, SI, SK, TR)
African Intellectual Property Organization (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, GQ, GW, ML, MR, NE, SN, TD, TG).
Publication Language: German (DE)
Filing Language: German (DE)