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1. WO2002021126 - METHOD FOR DETECTING THE ACTIVITY OF ACTIVE INGREDIENTS

Publication Number WO/2002/021126
Publication Date 14.03.2002
International Application No. PCT/EP2001/010291
International Filing Date 06.09.2001
Chapter 2 Demand Filed 04.04.2002
IPC
C12Q 1/34 2006.01
CCHEMISTRY; METALLURGY
12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
1Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
34involving hydrolase
CPC
C12Q 1/34
CCHEMISTRY; METALLURGY
12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS
1Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms
34involving hydrolase
Applicants
  • IMB INSTITUT FÜR MOLEKULARE BIOTECHNOLOGIE E.V. [DE]/[DE] (AllExceptUS)
  • BÖHM, Konrad [DE]/[DE] (UsOnly)
  • NEUMANN, Tobias [DE]/[DE] (UsOnly)
  • UNGER, Eberhard [DE]/[DE] (UsOnly)
Inventors
  • BÖHM, Konrad
  • NEUMANN, Tobias
  • UNGER, Eberhard
Agents
  • PFEIFFER, Rolf-Gerd
Priority Data
100 45 808.407.09.2000DE
Publication Language German (DE)
Filing Language German (DE)
Designated States
Title
(DE) VERFAHREN ZUR DETEKTION DER AKTIVITÄT VON WIRKSTOFFEN
(EN) METHOD FOR DETECTING THE ACTIVITY OF ACTIVE INGREDIENTS
(FR) PROCEDE DE DETECTION DE L'ACTIVITE DE SUBSTANCES ACTIVES
Abstract
(DE)
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Detektion der Aktivität von Wirkstoffen, das insbesondere bei der Suche nach Inhibitoren der Kinesin-Last- und Kinesin-Mikrotubulus-Bindungen Verwendung findet.Die Aufgabe der Erfindung, ein Verfahren zur Detektion der Aktivität von Wirkstoffen, insbesondere für die Suche nach Inhibitoren der Kinesin-Last- und Kinesin-Mikrotubulus-Bindungen anzugeben, das ein schnelles, kostengünstiges Wirkstoffscreening mit hohem Probendurchsatz und einfach zu erlangenden Aussagen über den inhibitorischen Einfluß der getesteten Wirkstoffe ermöglicht, wird dadurch gelöst, daß ein Träger, mit einer Vielzahl adressierbar beschick-, wasch- und auslesbarer Probenaufnahmebereiche vorgesehen wird, wobei die Probenaufnahmebereiche zumindest in Teilbereichen mit einer Affinitätsschicht versehen werden, anschließend die Affinitätsschichten mit einer Lösung aus einem Wirkstoff und Kinesinmolekülen beschickt werden, wobei die Kinesinmolekülen mit einem physikalisch, chemisch oder biologisch nachweisbaren Marker versehen werdenoder anschließend die Affinitätsschichten mit Kinesinmolekülen beschichtet und nach einem Waschschritt mit einer Lösung aus einem Wirkstoff und Mikrotubuli beschickt werden, wobei die Mikrotubuli mit einem physikalisch, chemisch oder biologisch nachweisbaren Marker versehen werden,ein Waschschritt durchgeführt wird und im Ergebnis der Verlust oder das Vorhandensein der mit dem Marker versehenen Kinesinmoleküle nachgewiesen wird oder der Verlust oder das Vorhandensein der mit dem Marker versehenen Mikrotubuli nachgewiesen wird.
(EN)
The invention relates to a method for detecting the activity of active ingredients. Said method is especially used for finding inhibitors of the kinesin-load and kinesin-microtubule linkages. The aim of the invention is to provide one such method which enables rapid, cost-effective active ingredient screening having a high sample throughput and providing easy-to-obtain information about the inhibitory influence of the tested active ingredients. In order to achieve this, a carrier having a plurality of sampling areas which can be addressed, loaded, washed and sorted is provided; the sampling areas are provided with an affinity layer at least in partial areas; the affinity layers are then loaded with a solution of an active ingredient and kinesin molecules; the kinesin molecules are provided with a physically, chemically or biologically detectable marker, or the affinity layers are then coated with kinesin molecules and, after a washing, are loaded with a solution of an active ingredient and microtubules, the microtubules being provided with a physically, chemically or biologically detectable marker; and a washing is carried out and the loss or presence of kinesin molecules provided with the marker is detected from the result, or the loss or presence of the microtubules provided with the marker is detected.
(FR)
L'invention concerne un procédé de détection de l'activité de substances actives, utilisable en particulier dans la recherche d'inhibiteurs des liaisons kinésine-charge et kinésine-microtubule. L'invention a pour but de fournir un procédé du type précité permettant un dépistage rapide et économique des susbtances actives, avec un débit d'essai élevé, tout en fournissant des indications faciles à obtenir relatives à l'influence inhibitoire des substances actives testées. A cet effet, l'invention est caractérisée en ce qu'il est prévu un support présentant une pluralité de zones de prélèvement d'échantillons adressables, chargeables, lavables et triables, en ce que lesdites zones de prélèvement d'échantillons sont munies, au moins dans des zones partielles, d'une couche d'affinité, en ce que les couches d'affinité sont ensuite chargées d'une solution formée d'une substance active et de molécules de kinésine, et les molécules de kinésine sont pourvues d'un marqueur identifiable physiquement, chimiquement ou biologiquement, ou bien, en ce qu'ensuite, les couches d'affinité sont garnies de molécules de kinésine et sont chargées, après une étape de lavage, avec une solution de substance active et de microtubules, en ce que les microtubules sont pourvus d'un marqueur identifiable physiquement, chimiquement ou biologiquement, en ce qu'on effectue un lavage et en ce qu'on décèle, dans le résultat, la perte ou la présence des molécules de kinésine porteuses du marqueur, ou en ce qu'on décèle la perte ou la présence des microtubules porteurs du marqueur.
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