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1. WO2002004924 - METHOD FOR THE EXAMINATION OF CELLS IN A CULTURE MEDIUM

Publication Number WO/2002/004924
Publication Date 17.01.2002
International Application No. PCT/EP2001/007814
International Filing Date 07.07.2001
Chapter 2 Demand Filed 05.01.2002
IPC
C12M 1/34 2006.1
CCHEMISTRY; METALLURGY
12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
MAPPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY
1Apparatus for enzymology or microbiology
34Measuring or testing with condition measuring or sensing means, e.g. colony counters
G01N 15/14 2006.1
GPHYSICS
01MEASURING; TESTING
NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
15Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
10Investigating individual particles
14Electro-optical investigation
CPC
C12M 41/36
CCHEMISTRY; METALLURGY
12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
MAPPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
41Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation
30of concentration
36of biomass, e.g. colony counters or by turbidity measurements
G01N 15/1459
GPHYSICS
01MEASURING; TESTING
NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
15Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume, or surface-area of porous materials
10Investigating individual particles
14Electro-optical investigation, e.g. flow cytometers
1456without spatial resolution of the texture or inner structure of the particle, e.g. processing of pulse signals
1459the analysis being performed on a sample stream
G01N 15/1463
GPHYSICS
01MEASURING; TESTING
NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
15Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume, or surface-area of porous materials
10Investigating individual particles
14Electro-optical investigation, e.g. flow cytometers
1456without spatial resolution of the texture or inner structure of the particle, e.g. processing of pulse signals
1463using image analysis for extracting features of the particle
G01N 2015/1493
GPHYSICS
01MEASURING; TESTING
NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
15Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume, or surface-area of porous materials
10Investigating individual particles
14Electro-optical investigation, e.g. flow cytometers
1493Particle size
Applicants
  • INNOVATIS AG. [DE]/[DE] (AllExceptUS)
  • BITTNER, Christoph [DE]/[DE] (UsOnly)
Inventors
  • BITTNER, Christoph
Agents
  • HEILAND, Karsten
Priority Data
100 33 268.410.07.2000DE
Publication Language German (de)
Filing Language German (DE)
Designated States
Title
(DE) VERFAHREN ZUR UNTERSUCHUNG VON ZELLEN IN EINER KULTURFLÜSSIGKEIT
(EN) METHOD FOR THE EXAMINATION OF CELLS IN A CULTURE MEDIUM
(FR) PROCEDE POUR L'EXAMEN DE CELLULES DANS UN LIQUIDE DE CULTURE
Abstract
(DE) Bei einem Verfahren zur Untersuchung von Zellen (20, 38) in einer Kulturflüssigkeit, insbesondere zur In-situ-Mikroskopie in einem Bioreaktor, werden Zellen innerhalb eines Probenvolumens (12), dessen Dicke (d) in Richtung der optischen Achse des Mikroskops (18) durch Fenster (14, 16) begrenzt ist, mikroskopisch abgebildet und durch ein Bildverarbeitungssystem (30) automatisch erfasst und verarbeitet. Das erfindungsgemässe Verfahren ist dadurch gekennzeichnet, dass die Dicke (d) des Probenvolumens (12) der Grösse der Zellen (20, 38) angepasst wird, indem der Abstand (d) der Fenster (14, 16) sukzessive verringert wird und gleichzeitig die Abbildungsgrösse (G) der Zellen (20, 38) durch das Bildverarbeitungssystem (30) kontrolliert wird, so dass ein Abstandswert (D) bestimmt wird, bei dem die Abbildungsgrösse (G) der Zellen (20, 38) entsprechend der durch den Berührungsdruck der Fenster (14, 16) bewirkten Abplattung anzuwachsen beginnt, und dass der Abstand (d) der Fenster (14, 16) zur Untersuchung auf diesen Abstandswert (D) eingestellt wird.
(EN) The invention relates to a method for the examination of cells (20, 38) in a culture medium, in particular for in-situ microscopy in a bio-reactor, whereby cells in a sample volume (12), the depth (d) of which is defined by windows (14, 16) in the direction of the optical axis of the microscope (18), are microscopically imaged and are automatically recorded and processed, by means of an image processing system (30). Said method is characterised in that the depth (d) of the sample volume (12) is suitable for the size of the cells (20, 38), whereby the separation (d) of the windows (14, 16) is successively reduced and the image size (G) of the cells (20, 38) is simultaneously verified by the image processing system (30), such that a separation value (D) is determined, whereby the image size (G) of the cells (20, 38) corresponds to that where the flattening due to the contact pressure of the windows (14, 16) begins to grow and the separation (d) of the windows (14, 16) is set to said separation (D) for the examination.
(FR) L'invention concerne un procédé pour l'examen de cellules (20, 38) dans un liquide de culture, notamment pour la microscopie in situ dans un bioréacteur. Selon ce procédé, des cellules à l'intérieur d'un volume d'échantillon (12) dont l'épaisseur (d) est limitée par des fenêtres (14, 16) dans le sens de l'axe optique du microscope (18) sont représentées microscopiquement et sont enregistrées et traitées automatiquement par un système de traitement d'image (30). Le procédé selon l'invention est caractérisé en ce que l'épaisseur (d) du volume d'échantillon (12) est adaptée à la taille des cellules (20, 38) par diminution successive de l'écart (d) des fenêtres (14, 16) et contrôle simultané de la taille de représentation (G) des cellules (20, 38) par le système de traitement d'image (30). Ainsi, une valeur d'écart (D) est déterminée pour laquelle la taille de représentation (G) des cellules (20, 38) commence à croître en fonction de l'aplatissement provoqué par la pression de contact des fenêtres (14, 16). L'écart (d) des fenêtres (14, 16) est réglé à cette valeur d'écart (D) pour l'examen.
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