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1. (WO2001032831) SCREENING AND USE OF AGENTS WHICH BLOCK OR ACTIVATE INTEIN SPLICING UTILIZING NATURAL OR HOMOLOGOUS EXTEINS
Latest bibliographic data on file with the International Bureau   

Pub. No.:    WO/2001/032831    International Application No.:    PCT/US2000/029596
Publication Date: 10.05.2001 International Filing Date: 27.10.2000
Chapter 2 Demand Filed:    18.04.2001    
IPC:
C12N 9/90 (2006.01), C12N 15/10 (2006.01), C12N 15/63 (2006.01), C12N 15/64 (2006.01)
Applicants: NEW ENGLAND BIOLABS, INC. [US/US]; 32 Tozer Road, Beverly, MA 01915 (US)
Inventors: PERLER, Francine, B.; (US).
ADAM, Eric, E.; (US)
Agent: WILLIAMS, Gregory, D.; New England Biolabs, Inc., 32 Tozer Road, Beverly, MA 01915 (US)
Priority Data:
09/430,221 29.10.1999 US
Title (EN) SCREENING AND USE OF AGENTS WHICH BLOCK OR ACTIVATE INTEIN SPLICING UTILIZING NATURAL OR HOMOLOGOUS EXTEINS
(FR) CRIBLAGE ET UTILISATION D'AGENTS BLOQUANT OU ACTIVANT L'EPISSAGE D'INTEINES PAR DES EXTEINES NATURELLES OU HOMOLOGUES
Abstract: front page image
(EN)Positive genetic selection systems are provided with methods for screening agents that control intein-mediated protein splicing innative host proteins - exteins - or in homologous exteins. Agents inhibiting or activating protein splicing are detected by eithercell viability or cell death where a positive genetic selection system uses a cell comprising, as in Figure 9, a first gene encoding a wild type enzyme, or a drug-resistant enzyme, and a second gene encoding a dominant cytotoxic form of the enzyme comprising an intein, or a drug-susceptible cytotoxic form of the enzyme comprising an intein. Non-lethal selection systems and assays are further provided as well as exemplary mycobacterial gyrase- and helicase-associated inteins. Also provided are controllable inteins and methods for in vivo control of drug delivery and methods for in vivo control of protein expression wherein protein splicing is modulated.
(FR)L'invention concerne des systèmes de sélection et des méthodes de criblage destinés à des agents commandant l'épissage des intéines dans leur protéine hôte d'origine (extéine) ou dans des extéines homologues. Plus particulièrement, l'invention concerne des systèmes de sélection génétique positifs destinés au criblage d'agents inhibant ou activant l'épissage protéique. Cet agent comprend: une cellule hôte contenant un gène chromosomique codant soit pour une forme pharmacorésistante d'une enzyme cible soit pour une enzyme cible de type sauvage; et un gène plasmidique codant soit pour une forme pharmacosensible d'une enzyme cible, essentiellement cytotoxique lorsqu'elle est en contact avec le médicament, soit pour une forme cytotoxique de l'enzyme cible. Dans ces systèmes, le gène plasmidique contient une intéine. L'inhibition ou l'activation de l'épissage de la forme cytotoxique dominante de l'enzyme cible par un réactif donné entraîne la survie ou la mort de la cellule hôte. Plus particulièrement, l'invention concerne des systèmes de sélection génétique positifs utilisant l'intéine M. xenopi GyrA ou l'intéine M. tuberculosis DnaB helicase. L'invention concerne également des systèmes rapporteurs similaires utilisant des intéines pouvant être commandées, ainsi que des méthodes permettant de commander l'expression in vivo des protéines par modulation de l'épissage protéique par des agents inhibiteurs ou activants, et des méthodes permettant de commander l'administration de médicaments protéiques in vivo par modulation de l'épissage protéique.
Designated States: CA, JP.
European Patent Office (AT, BE, CH, CY, DE, DK, ES, FI, FR, GB, GR, IE, IT, LU, MC, NL, PT, SE).
Publication Language: English (EN)
Filing Language: English (EN)