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1. (WO1999040198) IDENTIFICATION, PRODUCTION AND USE OF STAPHYLOKINASE DERIVATIVES WITH REDUCED IMMUNOGENICITY AND/OR REDUCED CLEARANCE
Latest bibliographic data on file with the International Bureau   

Pub. No.:    WO/1999/040198    International Application No.:    PCT/EP1999/000748
Publication Date: 12.08.1999 International Filing Date: 04.02.1999
Chapter 2 Demand Filed:    02.09.1999    
IPC:
A61K 38/00 (2006.01), C07K 14/31 (2006.01)
Applicants: THROMB-X N.V. [BE/BE]; Leopold I straat 1 bus 21, B-3000 Leuven (BE) (For All Designated States Except US).
COLLEN, Désiré, José [BE/BE]; (BE)
Inventors: COLLEN, Désiré, José; (BE)
Agent: VAN SOMEREN, Petronella, Francisca, Hendrika, Maria; Arnold & Siedsma, Sweelinckplein 1, NL-2517 GK The Hague (NL)
Priority Data:
98200323.8 04.02.1998 EP
98200365.9 06.02.1998 EP
Title (EN) IDENTIFICATION, PRODUCTION AND USE OF STAPHYLOKINASE DERIVATIVES WITH REDUCED IMMUNOGENICITY AND/OR REDUCED CLEARANCE
(FR) IDENTIFICATION, PRODUCTION ET UTILISATION DE DERIVES DE LA STAPHYLOKINASE AVEC IMMUNOGENECITE ET/OU CLEARANCE REDUITES
Abstract: front page image
(EN)Methods for the identification, production and use of staphylokinase derivatives characterized by a reduced immunogenicity after administration in patients and that can be administered by single intravenous bolus injection. The derivatives of the invention are obtained by preparing a DNA fragment comprising at least the part of the coding sequence of staphylokinase that provides for its biological activity; performing $i(in vitro) site-directed mutagenesis on the DNA fragment to replace one or more codons for wild-type amino acids by a codon for another amino acid; cloning the mutated DNA fragment in a suitable vector; transforming or transfecting a suitable host cell with the vector; culturing the host cell under conditions suitable for expressing the DNA fragment; purifying the expressed staphylokinase derivative to homogeneity and chemically modifying substituted Cys residues with thiol-directed polyethylene glycol; preferably the DNA fragment is a 453 bp EcoRI-HindIII fragment of the plasmid pMEX602sakB, (pMEX.SakSTAR), the $i(in vitro) site-directed mutagenesis is performed by spliced overlap extension polymerase chain reaction and the mutated DNA fragment is expressed in $i(E. coli) strain TG1 or WK6. The invention also relates to pharmaceutical compositions comprising at least one of the staphylokinase derivatives according to the invention together with a suitable excipient, for treatment of arterial thrombosis.
(FR)L'invention concerne des techniques d'identification, de production et d'utilisation de dérivés de la staphylokinase, caractérisées par une antigénicité réduite après administration à des patients. Ces dérivés peuvent être administrés en une seule injection d'embol intraveineux. Pour obtenir ces dérivés, on prépare un fragment d'ADN comprenant au moins la partie de la séquence codante de la staphylokinase responsable de son activité biologique; on exécute $i(in vitro) la mutagénèse dirigée du fragment d'ADN de manière à remplacer un ou plusieurs codons des acides aminés de type sauvage par un codon d'un autre acide aminé; on clone le fragment d'ADN muté en un vecteur approprié; on transforme ou on transfecte une cellule hôte appropriée avec le vecteur; on cultive la cellule hôte dans des conditions qui permettent l'expression du fragment d'ADN; on purifie le dérivé de staphylokinase exprimé de manière à le rendre homogène et on modifie chimiquement des résidus Cys substitués par un polyéthylène glycol orienté thiol. Le fragment d'ADN est de préférence un fragment EcoRI-HindIII de 453 bp du plasmide pMEX602sakB, (pMEX.SakSTAR). La mutagénèse dirigée $i(in vitro) se fait par réaction de chaîne polymérase PCR avec extension par épissage des zones de chevauchement et le fragment d'ADN muté est exprimé dans la souche TG1 ou WK6 d'$i(E. coli). L'invention concerne également des compositions pharmaceutiques comprenant au moins l'un des dérivés de la staphylokinase et un excipient qui permet de traiter la thrombose artérielle.
Designated States: AL, AM, AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BR, BY, CA, CH, CN, CU, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, GB, GD, GE, GH, GM, HR, HU, ID, IL, IN, IS, JP, KE, KG, KP, KR, KZ, LC, LK, LR, LS, LT, LU, LV, MD, MG, MK, MN, MW, MX, NO, NZ, PL, PT, RO, RU, SD, SE, SG, SI, SK, SL, TJ, TM, TR, TT, UA, UG, US, UZ, VN, YU, ZW.
African Regional Intellectual Property Organization (GH, GM, KE, LS, MW, SD, SZ, UG, ZW)
Eurasian Patent Organization (AM, AZ, BY, KG, KZ, MD, RU, TJ, TM)
European Patent Office (AT, BE, CH, CY, DE, DK, ES, FI, FR, GB, GR, IE, IT, LU, MC, NL, PT, SE)
African Intellectual Property Organization (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, GW, ML, MR, NE, SN, TD, TG).
Publication Language: English (EN)
Filing Language: English (EN)