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1. (WO1999014231) BIFIDUS STIMULATING PEPTIDES AND ITS USES
Latest bibliographic data on file with the International Bureau   

Pub. No.:    WO/1999/014231    International Application No.:    PCT/EP1998/005899
Publication Date: 25.03.1999 International Filing Date: 16.09.1998
Chapter 2 Demand Filed:    04.12.1998    
IPC:
A23L 1/305 (2006.01), A61K 38/00 (2006.01), C07K 5/103 (2006.01), C07K 7/06 (2006.01), C07K 14/47 (2006.01), C07K 14/705 (2006.01), C07K 14/765 (2006.01), C07K 14/79 (2006.01), C12N 9/36 (2006.01)
Applicants: FORSSMANN, Wolf-Georg [DE/DE]; (DE).
ZUCHT, Hans-Dieter [DE/DE]; (DE) (For US Only).
LIEPKE, Cornelia [DE/DE]; (DE) (For US Only)
Inventors: FORSSMANN, Wolf-Georg; (DE).
ZUCHT, Hans-Dieter; (DE).
LIEPKE, Cornelia; (DE)
Agent: MEYERS, Hans-Wilhelm; Postfach 10 22 41, D-50462 Köln (DE)
Priority Data:
197 40 604.1 16.09.1997 DE
198 05 385.1 11.02.1998 DE
Title (DE) BIFIDOGENE PEPTIDE UND DEREN VERWENDUNG
(EN) BIFIDUS STIMULATING PEPTIDES AND ITS USES
(FR) PEPTIDES BIFIDIGENES
Abstract: front page image
(DE)Peptide erhältlich durch Versetzen von Kuhmilch oder Humanmilch mit Proteasen und anschließender Inkubation für zwei Stunden, Zentrifugation, um Michfett zu entfernen, Ansäuern auf einen pH von 2,0 durch starke Säuren, Abtrennung der ausgefallenen Proteine, Anwendung mindestens eines Reverse-Phase-HPLC-Schrittes, Anwendung eines Kationenaustauscher-HPLC-Schrittes, Sammeln von Fraktionen, Einstellen der Fraktion auf einen Salzgehalt < 25 mM für die Durchführung von Aktivitätstests durch Dialyse oder Reverse-Phase-HPLC, Kultivierung von Bifidobakterium Bifidum und E. coli in Gegenwart der Fraktionen und Auswahl von Fraktionen, die der Bedingung: BW/B0 - EW/E0$m(G)0,15 (bifidogen) genügen, worin BW die Keimzahl bezeichnet, die bei 16-stündiger Inkubation von Bifidobakterium Bifidum in 50 % Elliker Broth in Gegenwart der Peptide in einer Konzentration von 200 $g(m)g/ml erhalten wird, B0 die Keimzahl bezeichnet, die bei der wirkstofffreien Kontrollinkubation erhalten wird, EW die Keimzahl bezeichnet, die bei 16-stündiger Inkubation von E. coli in 3 g/l Tryptic Soy Broth in Gegenwart der Peptide in einer Konzentration von 200 $g(m)g/l erhalten wird, E0 die Keimzahl bezeichnet, die bei der wirkstofffreien Kontrollinkubation erhalten wird, Isolierung des in dieser Fraktion vorhandenen Peptids sowie die amidierten, acetylierten, sulfatierten, phosphorylierten, glycosylierten, oxydierten Derivate oder Fragmente mit bifidogenen Eigenschaften und Peptide, die durch Kombination der Peptide, Fragmente oder Derivate mittels chemischer Verknüpfung erhältlich sind.
(EN)The invention relates to peptides which are obtainable by mixing cow milk or human milk with proteases followed by a two hour incubation; centrifugation in order to remove milk fat; acidification to a pH of 2.0 by strong acidulation; separating the precipitated proteins; applying at least one reverse phase high pressure liquid chromatography (HPLC) step; applying a cationic exchanger HPLC step; collecting fractions; adjusting the fractions to a salt content < 25 mM for executing an activity test by means of dialysis or reverse phase HPLC; cultivating bifidobacterium and e coli in the presence of the fractions and selection of fractions which satisfy condition BW/B0 - EW/E0$m(G)0,15, wherein BW denotes the bacterial count which is obtained during a16-hour incubation of bifidobacterium in 50 % elliker broth in the presence of peptides in a concentration of 200 $g(m)g/ml, B0 denotes the bacterial count which is obtained during the agent-free control incubation, EW denotes the bacterial count which is obtained during 16 hour incubation of e coli in 3 g/l tryptic soy broth in the presence of the peptides in a concentration of 200 $g(m)g/ml, E0 denotes the bacterial count which is obtained during the agent-free control incubation; and isolating the available peptide in said fraction. In addition, the amidated, acetylized, sulphatized, phosphorylated, glycosylized, oxidized derivatives or fragments with bifidus stimulating characteristics and peptides are obtainable by combining the peptides, fragments or derivatives by means of chemical bonding.
(FR)L'invention concerne des peptides que l'on obtient par: mélange de lait de vache ou de lait humain avec des protéases, suivi d'une incubation de 2 heures; centrifugation, dont le but est d'éliminer la graisse du lait; acidification à un pH de 2,0 au moyen d'acides forts; séparation des protéines précipitées; mise en oeuvre d'au moins une étape de HPLC en phase inversée; mise en oeuvre d'une étape de HPLC avec échangeur de cations; collecte de fractions; ajustement de la fraction à une teneur en sel < 25 mM pour l'exécution d'un test d'activité par dialyse ou HPLC en phase inversée; mise en culture de la bactérie bifidus et de E. coli en présence des fractions et sélection de fractions satisfaisant à la condition BW/B0 - EW/E0$m(G)0,15, où BW représente l'indice de germination que l'on obtient lors d'une incubation de 16 heures de la bactérie bifidus dans 50 % de bouillon Elliker, en présence des peptides en une concentration de 200 $g(m)g/ml, BO représente l'indice de germination que l'on obtient lors de l'incubation d'un témoin sans principe actif, EW représente l'indice de germination que l'on obtient lors de l'incubation de 16 heures de E. coli dans 3 g/l de bouillon trypticase soy, en présence des peptides en une concentration de 200 $g(m)g/l; et isolement du peptide présent dans cette fraction. L'invention concerne également les dérivés ou fragments amidifiés, acétylés, sulfatés, phosphorylés, glycosylés et oxydés présentant des propriétés bifidigènes, et des peptides que l'on peut obtenir par combinaison desdits peptides, fragments ou dérivés par liaison chimique.
Designated States: JP, US.
European Patent Office (AT, BE, CH, CY, DE, DK, ES, FI, FR, GB, GR, IE, IT, LU, MC, NL, PT, SE).
Publication Language: German (DE)
Filing Language: German (DE)