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1. (WO1999010503) ZYMOGENIC PROTEASE PRECURSORS THAT CAN BE AUTOCATALYTICALLY ACTIVATED AND THEIR USE
Latest bibliographic data on file with the International Bureau   

Pub. No.:    WO/1999/010503    International Application No.:    PCT/EP1998/005094
Publication Date: 04.03.1999 International Filing Date: 12.08.1998
Chapter 2 Demand Filed:    08.12.1998    
IPC:
C12N 9/50 (2006.01), C12N 9/64 (2006.01), C12N 9/76 (2006.01)
Applicants: ROCHE DIAGNOSTICS GMBH [DE/DE]; Sandhorfer Strasse 116, D-68305 Mannheim (DE) (For All Designated States Except US).
KOPETZKI, Erhard [DE/DE]; (DE) (For US Only).
HOPFNER, Karl-Peter [DE/DE]; (DE) (For US Only).
BODE, Wolfram [DE/DE]; (DE) (For US Only).
HUBER, Robert [DE/DE]; (DE) (For US Only)
Inventors: KOPETZKI, Erhard; (DE).
HOPFNER, Karl-Peter; (DE).
BODE, Wolfram; (DE).
HUBER, Robert; (DE)
Common
Representative:
ROCHE DIAGNOSTICS GMBH; Werk Penzberg, Patentabteilung (RE-TB), Postfach 11 52, D-82377 Penzberg (DE)
Priority Data:
971 14 513.1 22.08.1997 EP
971 17 816.5 15.10.1997 EP
Title (DE) AUTOKATALYTISCH AKTIVIERBARE ZYMOGENE VORSTUFEN VON PROTEASEN UND DEREN VERWENDUNG
(EN) ZYMOGENIC PROTEASE PRECURSORS THAT CAN BE AUTOCATALYTICALLY ACTIVATED AND THEIR USE
(FR) PRECURSEURS ZYMOGENES DE PROTEASES ACTIVABLES PAR VOIE AUTOCATALYTIQUE ET LEUR UTILISATION
Abstract: front page image
(DE)Ein Verfahren zur rekombinanten Herstellung einer Protease, gekennzeichnet durch a) Transformation einer Wirtszelle mit einer rekombinanten Nukleinsäure, welche für eine zymogene Vorstufe einer Protease codiert, die eine natürlicherweise nicht vorkommende autokatalytische Spaltstelle enthält, wobei diese Spaltstelle von der aktiven Form der genannten Protease erkannt und dabei die Vorstufe zur aktiven Protease gespalten wird, b) Kultivierung der Wirtszelle in der Weise, daß die zymogene Vorstufe der Protease in Form von inclusion bodies in der Wirtszelle entsteht, c) Isolierung der inclusion bodies und Naturierung unter Bedingungen, bei denen der Proteaseteil der zymogenen Vorstufe in seiner natürlichen Konformation entsteht und d) autokatalytische Spaltung der naturierten, zymogenen Vorstufe in die aktive Protease, ist geeignet, auf einfache Weise und in großen Mengen rekombinante Proteasen zur Verfügung zu stellen.
(EN)A process for the recombinant production of a protease is characterised by (a) transformation of a host cell with a recombinant nucleic acid which codes for a zymogenic protease precursor containing an autocatalytic cleavage site which does not occur naturally, this cleavage site being recognised by the active form of said protease, cleaving the zymogenic precursor into the active protease; (b) cultivation of the host cell such that the zymogenic protease precursor is created in the host cell in the form of inclusion bodies; (c) isolation and naturalisation of the inclusion bodies in such conditions that the protease part of the zymogenic precursor is produced with its natural conformation; and (d) autocatalytic cleavage of the naturalised zymogenic precursor to produce the active protease. This process is suitable to produce recombinant proteases in a simple manner and with high yields.
(FR)L'invention concerne un procédé de préparation recombinée de protéase, qui se caractérise par a) la transformation d'une cellule hôte avec un acide nucléique recombiné codant un précurseur zymogène d'une protéase contenant un site de coupure autocatalytique qui n'apparaît pas naturellement. Ce site de coupure est identifié par la forme active de la protéase citée et le précurseur est alors coupé pour donner lieu à la protéase active; b) mise en culture de la cellule hôte de manière que le précurseur zymogène de la protéase figure sous forme de corps d'inclusion dans la cellule hôte; c) par isolement desdits corps d'inclusion et par retour à l'état naturel dans des conditions où la partie de protéase du précurseur zymogène apparaît dans sa conformation naturelle et d) par séparation par voie autocatalytique du précurseur zymogène revenu à l'état naturel, pour donner lieu à la protéase active. Ce procédé s'utilise pour préparer de manière simple des quantités importantes de protéases recombinées.
Designated States: AL, AM, AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BR, BY, CA, CH, CN, CU, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, GB, GE, GH, GM, HR, HU, ID, IL, IS, JP, KE, KG, KP, KR, KZ, LC, LK, LR, LS, LT, LU, LV, MD, MG, MK, MN, MW, MX, NO, NZ, PL, PT, RO, RU, SD, SE, SG, SI, SK, SL, TJ, TM, TR, TT, UA, UG, US, UZ, VN, YU, ZW.
African Regional Intellectual Property Organization (GH, GM, KE, LS, MW, SD, SZ, UG, ZW)
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European Patent Office (AT, BE, CH, CY, DE, DK, ES, FI, FR, GB, GR, IE, IT, LU, MC, NL, PT, SE)
African Intellectual Property Organization (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, GW, ML, MR, NE, SN, TD, TG).
Publication Language: German (DE)
Filing Language: German (DE)