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1. (WO1998053098) METHOD AND KIT FOR DETECTING DNA MUTATIONS USING RESTRICTION ENZYMES
Latest bibliographic data on file with the International Bureau   

Pub. No.:    WO/1998/053098    International Application No.:    PCT/EP1997/004955
Publication Date: 26.11.1998 International Filing Date: 10.09.1997
Chapter 2 Demand Filed:    21.12.1998    
IPC:
C12Q 1/68 (2006.01)
Applicants: GESELLSCHAFT FÜR BIOTECHNOLOGISCHE FORSCHUNG MBH (GBF) [DE/DE]; Mascheroder Weg 1, D-38124 Braunschweig (DE) (For All Designated States Except US).
BILITEWSKI, Ursula [DE/DE]; (DE) (For US Only).
KUHLMEIER, Dirk [DE/DE]; (DE) (For US Only)
Inventors: BILITEWSKI, Ursula; (DE).
KUHLMEIER, Dirk; (DE)
Agent: BOETERS, Hans, D.; Boeters & Bauer, Bereiteranger 15, D-81541 München (DE)
Priority Data:
197 21 327.8 21.05.1997 DE
197 39 612.7 09.09.1997 DE
Title (DE) VERFAHREN UND KIT ZUR DETEKTION VON MUTATIONEN IN DNA'S MIT HILFE VON RESTRIKTIONSENZYMEN
(EN) METHOD AND KIT FOR DETECTING DNA MUTATIONS USING RESTRICTION ENZYMES
(FR) PROCEDE ET TROUSSE POUR LA DETECTION DE MUTATIONS DANS DES ADN A L'AIDE D'ENZYMES DE RESTRICTION
Abstract: front page image
(DE)Es wird ein Verfahren beschrieben, das die Möglichkeit bietet, Mutationen in DNA's mit Hilfe von Restriktionsenzymen zu detektieren. Dabei ist Vorraussetzung, daß sich durch die Mutation das Schneideverhalten des gewählten Restriktionsenzyms verändert. Das relevante DNA-Segment im Genom, das die Mutation enthält, wird mittels Polymerase-Kettenreaktion (PCR) vervielfältigt, wobei die verwendeten Primer jeweils gelabelt eingesetzt werden. Der erste Primer ermöglicht die Bindung des Segments an eine Trägeroberfläche; das Label des zweiten Primers wird genutzt, um die Detektion zu ermöglichen. Ein Restriktionsenzym wird mit dem PCR-Amplikon inkubiert, wobei das mutierte Segment nicht geschnitten wird, wenn durch die Mutation die Schnittstelle entfällt. Nach der Bindung der Segmente an eine Trägeroberfläche erfolgt eine Detektionsreaktion, wobei der Markierungslabel des zweiten Primers beim Wildtyp entfernt ist, während man ihn bei der Mutante nachweisen kann. Dabei ist eine Vielzahl von Labeln möglich, die eine direkte oder indirekte Detektion erlauben. Damit steht ein schnelles Verfahren zum Nachweis von bestimmten Mutationen im Genom zur Verfügung, ohne auf aufwendige herkömmliche Methoden zurückgreifen zu müssen.
(EN)The invention relates to a method for detecting DNA mutations using restriction enzymes. One condition to implement said method is that the cleaving performance of the selected restriction enzyme changes due to mutation. The relevant DNA segment in the genome containing the mutation is multiplied by means of polymerase chain reaction (PCR), wherein the primers used can each be labeled. The first primer enables the segment to be bonded to the surface of the carrier; the label of the second primer is used to enable detection. A restriction enzyme is incubated with the PCR amplicon, wherein the mutated segment is not cleaved if the cleavage site is suppressed by mutation. After the segments are bonded to the surface of the carrier, a detection reaction takes place, wherein the marking label of the second primer is removed in the wild type, insofar as it can be identified in the mutant. A plurality of labels enabling direct or indirect detection is possible. This provides a rapid method for detecting specific mutations in the genome without resorting to complex conventional methods.
(FR)L'invention concerne un procédé offrant la possibilité de détecter des mutations dans des ADN à l'aide d'enzymes de restriction, l'hypothèse étant qu'à cette occasion, la tenue à la coupure de l'enzyme de restriction choisie se modifie en raison de la mutation. Le segment d'ADN correspondant dans le génome, qui contient la mutation, est dupliqué par amplification en chaîne par polymérase (ACP), les amorces utilisées étant respectivement marquées. La première amorce permet la fixation du segment sur une surface porteuse, le marqueur de la deuxième amorce étant utilisé pour permettre la détection. Une enzyme de restriction est incubée avec l'amplicon obtenu par ACP, le segment muté n'étant pas coupé si le site de coupure est supprimé par la mutation. Une réaction de détection intervient après la fixation des segments sur une surface porteuse, et le marqueur de la deuxième amorce est éliminé dans le type sauvage, tandis qu'on peut l'identifier chez le mutant. On peut donc avoir une pluralité de marqueurs qui permettent une détection directe ou indirecte. On dispose ainsi d'un procédé rapide pour déceler certaines mutations dans le génome sans devoir recourir à des méthodes traditionnelles dispendieuses.
Designated States: AU, CA, JP, RU, US.
European Patent Office (AT, BE, CH, DE, DK, ES, FI, FR, GB, GR, IE, IT, LU, MC, NL, PT, SE).
Publication Language: German (DE)
Filing Language: German (DE)