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Pub. No.: WO/1998/051809 International Application No.: PCT/US1998/009553
Publication Date: 19.11.1998 International Filing Date: 11.05.1998
Chapter 2 Demand Filed: 10.12.1998
IPC:
C12N 15/869 (2006.01)
C CHEMISTRY; METALLURGY
12
BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
N
MICRO-ORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICRO-ORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
15
Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
09
Recombinant DNA-technology
63
Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
79
Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
85
for animal cells
86
Viral vectors
869
Herpesviral vectors
Applicants: UNIVERSITY OF PITTSBURGH OF THE COMMONWEALTH SYSTEM OF HIGHER EDUCATION[US/US]; 911 William Pitt Union Pittsburgh, PA 15260, US
Inventors: GLORIOSO, Joseph, C.; US
KRISKY, David; US
Agent: KILYK, John, Jr. ; Leydig, Voit & Mayer, Ltd. Suite 4900 Two Prudential Plaza 180 North Stetson Chicago, IL 60601-6780, US
Priority Data:
08/854,60112.05.1997US
Title (EN) MULTIGENE VECTORS DERIVED FROM HSV
(FR) VECTEURS MULTIGENES DERIVES DE HSV
Abstract:
(EN) The present invention provides a method for preparing viral vectors. The method comprises co-transfecting a source vector and a mutating cassette together into a population of appropriate host cells, such that homologous recombination occurs between the mutating cassette and the source vector whereby the mutating cassette replaces a region of the HSV genome. The mutating cassette has a unique restriction site not present in the sequence of the vector. The method further comprises plaquing the co-transfected host cells, selecting plaques in which recombination has occurred between the source vector and the mutating cassette, and isolating the viral DNA from the plaques. The isolated viral DNA is digested with a restriction endonuclease appropriate for cleaving the viral DNA at the unique restriction site within the mutating cassette to produce two viral polynucleotides. Following purification, the two viral polynucleotides can be joined to form a viral vector comprising the two viral polynucleotides. Alternatively, the two isolated viral polynucleotides can be joined with an insertion cassette to form a viral vector comprising the insertion cassette at the former locus of the unique restriction site. The present invention further provides a mutant vector, particularly an HSV vector constructed in accordance with the method for the present invention. The present invention further provides a multigene HSV vector, particularly a multigene HSV vector for cancer therapy.
(FR) La présente invention concerne un procédé permettant de préparer des vecteurs viraux. Ce procédé consiste à transfecter à la fois un vecteur source et une cassette mutante dans une population de cellules hôtes appropriée, de telle manière que la recombinaison homologue se produise entre la cassette mutante et le vecteur source et grâce à quoi, la cassette mutante remplace une région du génome du virus de l'herpès simplex (HSV). La cassette mutante présente un seul site de restriction absent dans la séquence du vecteur. Ce procédé consiste en outre à former des plaques de lyse dans les cellules hôtes co-transfectées, à sélectionner des plaques de lyse dans lesquelles une recombinaison s'est produite entre le vecteur source et la cassette mutante, et à isoler l'ADN viral des plaques de lyse. L'ADN viral isolé est digéré par une endonucléase de restriction pouvant couper de l'ADN viral au niveau du seul site de restriction de la cassette mutante et ce, dans le but de produire deux polynucléotides viraux. A la suite de cette purification, ces deux polynucléotides viraux peuvent être réunis en vue de former un vecteur viral contenant les deux polynucléotides viraux. Selon un autre mode de réalisation, les deux polynucléotides viraux peuvent être réunis dans une cassette d'insertion dans le but de former un vecteur viral, contenant la cassette d'insertion, au niveau de l'ancien locus du seul site de restriction. La présente invention concerne en outre un vecteur mutant, en particulier un vecteur du HSV construit conformément au procédé selon la présente invention, ainsi qu'un vecteur de HSV multigène, en particulier un vecteur de HSV multigène destiné à la thérapie anticancéreuse.
Designated States: AL, AM, AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BR, BY, CA, CH, CN, CU, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, GB, GE, GH, GM, GW, HU, ID, IL, IS, JP, KE, KG, KP, KR, KZ, LC, LK, LR, LS, LT, LU, LV, MD, MG, MK, MN, MW, MX, NO, NZ, PL, PT, RO, RU, SD, SE, SG, SI, SK, SL, TJ, TM, TR, TT, UA, UG, UZ, VN, YU, ZW
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African Intellectual Property Organization (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, ML, MR, NE, SN, TD, TG)
Publication Language: English (EN)
Filing Language: English (EN)