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1. (WO1998050566) IMPROVED CLONING VECTOR CONTAINING MARKER INACTIVATION SYSTEM
Latest bibliographic data on file with the International Bureau   

Pub. No.: WO/1998/050566 International Application No.: PCT/US1998/008854
Publication Date: 12.11.1998 International Filing Date: 01.05.1998
Chapter 2 Demand Filed: 04.12.1998
IPC:
C12N 15/72 (2006.01)
C CHEMISTRY; METALLURGY
12
BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
N
MICRO-ORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICRO-ORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
15
Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
09
Recombinant DNA-technology
63
Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
70
Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
72
Expression systems using regulatory sequences derived from the lac-operon
Applicants: SLILATY, Steve, N.[US/CA]; CA
LEBEL, Suzanne[CA/CA]; CA
Inventors: SLILATY, Steve, N.; CA
LEBEL, Suzanne; CA
Agent: KADLE, Ranjana ; Hodgson, Russ, Andrews, Woods & Goodyear 1800 One M & T Plaza Buffalo, NY 14203-2391, US
Priority Data:
08/852,83407.05.1997US
Title (EN) IMPROVED CLONING VECTOR CONTAINING MARKER INACTIVATION SYSTEM
(FR) SYSTEME AMELIORE DE CLONAGE PAR INACTIVATION D'UN MARQUEUR CONTENANT UN VECTEUR
Abstract:
(EN) Provided are $i(lacZ)$g(a) gene fragments which have been modified to introduce multiple restriction enzyme sites. Vectors according to the present invention include at least one promoter operatively linked to a DNA sequence encoding $i(lacZ)$g(a) ($g(a)-peptide); multiple cloning sites cleavable by distinct restriction enzymes which have been introduced within a $i(lacZ) coding sequence from and including the codon for amino acid (8), and in the $i(lacZ) coding sequence downstream of the codon for amino acid (8), in forming the modified $i(lacZ)$g(a) coding sequence; and a replicon. The vector may further comprise one or more additional features useful for protein expression and other molecular manipulations. Also provided are methods of using the vectors wherein a DNA molelcule is cloned into at least one restriction enzyme site in the modified $i(lacZ)$g(a) coding sequence, in forming recombinant vectors; introducing the recombinant vectors into competent host cells; growing the host cells in the presence of a chromogenic substrate cleavable by $g(b)-galactosidase; and screening for indicia of $i(lac) operon marker inactivation. The high accuracy of color selection afforded by the modified $i(lacZ)$g(a) coding sequence of the present invention provides a first opportunity at performing gap-free shotgun sequencing and development of ordered genomic libraries.
(FR) L'invention concerne des fragments de gènes lacZ$g(a) qui ont été modifiés pour introduire des sites multiples d'enzyme de restriction. Les vecteurs de la présente invention comprennent au moins un promoteur fonctionnellement lié à une séquence ADN codant le fragment lacZ$g(a) ($g(a)-peptide); des sites de clonage multiples susceptibles d'être coupés par des enzymes de restriction distincts qui ont été introduits dans une séquence codant un fragment lacZ$g(a) à partir du et comprenant le codon de l'acide aminé 8, et dans la séquence codant lacZ$g(a) en aval du codon de l'acide aminé 8, en formant la séquence codant lacZ$g(a) modifiée; et un répliquon. Le vecteur peut également comprendre au moins un élément supplémentaire utile pour l'expression des protéines et autres manipulations moléculaires. L'invention concerne également des procédés utilisant les vecteurs, selon lesquels une molécule ADN est clonée dans au moins un site d'enzyme de restriction dans la séquence codant lacZ$g(a) modifiée, en formant des vecteurs recombinants; introduction des vecteurs recombinants dans des cellules hôtes compétentes; croissance des cellules hôtes en présence d'un substrat chromogénique pouvant être coupé par $g(b)-galactosidase; dépistage d'indices de l'inactivation de marqueur opéron lactose. La grande précision de sélection de couleur exigée par la séquence codant lacZ$g(a) modifiée de la présente invention, permet pour la première fois de réaliser un séquençage au hasard sans brèche et constitue un développement de librairies de gènes classées.
Designated States: AL, AM, AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BR, BY, CA, CH, CN, CU, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, GB, GE, GH, HU, IL, IS, JP, KE, KG, KP, KR, KZ, LC, LK, LR, LS, LT, LU, LV, MD, MG, MK, MN, MW, MX, NO, NZ, PL, PT, RO, RU, SD, SE, SG, SI, SK, SL, TJ, TM, TR, TT, UA, UG, UZ, VN, YU, ZW
African Regional Intellectual Property Organization (ARIPO) (GH, GM, KE, LS, MW, SD, SZ, UG, ZW)
Eurasian Patent Office (AM, AZ, BY, KG, KZ, MD, RU, TJ, TM)
European Patent Office (EPO) (AT, BE, CH, CY, DE, DK, ES, FI, FR, GB, GR, IE, IT, LU, MC, NL, PT, SE)
African Intellectual Property Organization (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, ML, MR, NE, SN, TD, TG)
Publication Language: English (EN)
Filing Language: English (EN)