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1. (WO1998028440) METHOD OF SEQUENCING DNA BASED ON THE DETECTION OF THE RELEASE OF PYROPHOSPHATE
Latest bibliographic data on file with the International Bureau   

Pub. No.:    WO/1998/028440    International Application No.:    PCT/GB1997/003518
Publication Date: 02.07.1998 International Filing Date: 22.12.1997
Chapter 2 Demand Filed:    19.06.1998    
IPC:
C12Q 1/68 (2006.01)
Applicants: PYROSEQUENCING AB [SE/SE]; Kungsängsvägen 31, S-753 23 Uppsala (SE) (For All Designated States Except US).
NYRÉN, Pål [SE/SE]; (SE) (For US Only)
Inventors: NYRÉN, Pål; (SE)
Agent: DZIEGLEWSKA, Hanna; Frank B. Dehn & Co., 179 Queen Victoria Street, London EC4V 4EL (GB)
Priority Data:
9626815.6 23.12.1996 GB
Title (EN) METHOD OF SEQUENCING DNA BASED ON THE DETECTION OF THE RELEASE OF PYROPHOSPHATE
(FR) METHODE DE SEQUENÇAGE D'ADN SUR LA BASE DE LA DETECTION D'UNE LIBERATION DE PYROPHOSPHATE
Abstract: front page image
(EN)The present invention provides a method of identifying a base at a target position in a sample DNA sequence wherein an extension primer, which hybridises to the sample DNA immediately adjacent to the target position is provided and the sample DNA and extension primer are subjected to a polymerase reaction in the presence of a deoxynucleotide or dideoxynucleotide whereby the deoxynucleotide or dideoxynucleotide will only become incorporated and release pyroposphate (PPi) if it is complementary to the base in the target position, any release of PPi being detected enzymically, different deoxynucleotides or dideoxynucleotides being added either to separate aliquots of sample-primer mixture or successively to the same sample-primer mixture and subjected to the polymerase reaction to indicate which deoxynucleotide or dideoxynucleotide is incorporated, characterised in that, a nucleotide-degrading enzyme is included during the polymerase reaction step, such that unincorporated nucleotides are degraded.
(FR)La présente invention concerne une méthode d'identification d'une base au niveau d'une position cible dans une séquence d'ADN échantillon, une amorce d'extension s'hybridant à l'ADN échantillon immédiatement contigu à la position cible; l'ADN échantillon et l'amorce d'extension sont soumis à une amplification en chaîne par polymérase en présence de désoxynucléotide ou de didésoxynucléotide, le désoxynucléotide ou le didésoxynucléotide ne s'incorporant et ne libérant le pyrophosphate (PPi) que s'il est complémentaire à la base dans la position cible, toute libération de PPi étant détectée de manière enzymatique; différents désoxynucléotides ou didésoxynucléotides sont ajoutés soit à des aliquotes séparées d'un mélange amorce-échantillon, soit de manière successive au mélange amorce-échantillon, et sont soumis à l'amplification en chaîne par polymérase destinée à indiquer le désoxynucléotide ou didésoxynucléotide incorporé; la méthode est caractérisée par le fait qu'une enzyme de dégradation de nucléotide est ajoutée pendant l'amplification en chaîne par polymérase de sorte que les nucléotides non incorporés sont dégradés.
Designated States: AL, AM, AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BR, BY, CA, CH, CN, CU, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, GB, GE, GH, HU, ID, IL, IS, JP, KE, KG, KP, KR, KZ, LC, LK, LR, LS, LT, LU, LV, MD, MG, MK, MN, MW, MX, NO, NZ, PL, PT, RO, RU, SD, SE, SG, SI, SK, SL, TJ, TM, TR, TT, UA, UG, US, UZ, VN, YU, ZW.
African Regional Intellectual Property Organization (GH, GM, KE, LS, MW, SD, SZ, UG, ZW)
Eurasian Patent Organization (AM, AZ, BY, KG, KZ, MD, RU, TJ, TM)
European Patent Office (AT, BE, CH, DE, DK, ES, FI, FR, GB, GR, IE, IT, LU, MC, NL, PT, SE)
African Intellectual Property Organization (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, ML, MR, NE, SN, TD, TG).
Publication Language: English (EN)
Filing Language: English (EN)