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1. (WO1997038006) EXTRACTION AND PURIFICATION OF HYALURONIDASE FROM CRUSTACEAN WASTE
Latest bibliographic data on file with the International Bureau   

Pub. No.:    WO/1997/038006    International Application No.:    PCT/EP1996/001523
Publication Date: 16.10.1997 International Filing Date: 09.04.1996
Chapter 2 Demand Filed:    06.11.1997    
IPC:
C12N 9/26 (2006.01)
Applicants: WILCHAP I LIMITED [GB/GB]; New Oxford House, Town Hall Square, Grimsby DN31 1HE (GB) (For All Designated States Except US).
KRISHNAPILLAI, Ashok, Meluttukezhakethiel [IN/GB]; (GB) (For US Only)
Inventors: KRISHNAPILLAI, Ashok, Meluttukezhakethiel; (GB)
Agent: GOWSHALL, Jon, V.; Forrester Ketley & Co., Forrester House, 52 Bounds Green Road, London N11 2EY (GB)
Priority Data:
Title (EN) EXTRACTION AND PURIFICATION OF HYALURONIDASE FROM CRUSTACEAN WASTE
(FR) EXTRACTION ET PURIFICATION DE HYALURONIDASE DE DECHETS DE CRUSTACES
Abstract: front page image
(EN)The invention relates to a method for the extraction and purification of proteins, such as $g(b)(1$m(7)4) glycanohydrolase (hyaluronidase) particularly from the solid waste generated during the processing of marine crustaceans, such as Decapods, which include the Natantian and Reptantian groups such as stomatopods, shrimps, lobsters and crabs. The enzyme is extracted into solution by homogenising the head-waste with 0.25 M sucrose and then precipitating it by the addition of an organic solvent such as acetone or other precipitating agents such as high molecular weight polyethylene glycol. This enzyme extract dissolved in a suitable volume of 10 mM sodium-acetate buffer, pH 5.4 containing 10 mM potassium chloride (or sodium chloride) is chromatographed on Amberlite?TM¿ IRA 420 anion exchange resin and selectively eluted by subjecting the loaded column to a continuously increasing gradient of chloride ions. The eluent is 10 mM sodium acetate buffer at pH 5.4, containing a starting concentration of 10 mM potassium chloride (or sodium chloride) and rising continuously to 500 mM. Eluted fractions from the column showing enzyme activity are pooled and concentrated by anti-dialysis to yield a highly purified and concentrated form of hyaluronidase suitable for food and/or biomedical applications. This purified enzyme preparation is then subjected to a final polishing stage on Sephacryl?TM¿ S-300-HR size exclusion column with 10 mM sodium-acetate buffer at pH 5.4 containing 10 mM potassium chloride (or sodium chloride) and 1 % glycerol. The resulting eluate containing the enzyme is pooled and concentrated by anti-dialysis against 50 % polyethylene glycol (PEG) 6000 in deionised water to yield a highly purified and concentrated form of the enzyme suitable for therapeutic or food application.
(FR)Procédé d'extraction et de purification de protéines, telles que la $g(b)(1$m(7)4)glycanohydrolase (hyaluronidase), en particulier à partir des déchets solides issus du traitement de crustacés marins tels que les décapodes qui comprennent les groupes Natantia et Reptantia tels que les stomatopodes, les crevettes, les homards et les crabes. Ladite enzyme est extraite en solution par homogénéisation des déchets de têtes avec du sucrose 0,25 M et ensuite par précipitation de ladite solution par ajout d'un solvant organique tel que l'acétone ou d'autres agents de précipitation tels que du polyéthylène glycol à poids moléculaire élevé. Cet extrait d'enzyme dissous dans un volume approprié de tampon d'acétate de sodium 10 mM à un pH de 5,4, contenant du chlorure de potassium 10 mM (ou du chlorure de sodium) est soumis à la chromatographie sur résine échangeuse d'anions Amberlite?TM¿ IRA 420 et éluée sélectivement par le fait que la colonne chargée est soumise à un gradient en augmentation constante d'ions de chlorure. L'éluant est un tampon d'acétate de sodium 10 mM à un pH de 4,5, qui contient une concentration de départ de chlorure de potassium 10 mM (ou de chlorure de sodium) augmentant de manière constante jusqu'à 500 mM. Les fractions éluées de la colonne qui présentent une activité enzymatique sont réunies et concentrées par anti-dialyse pour produire une forme hautement purifiée et concentrée de hyaluronidase convenant aux applications alimentaires et/ou biomédicales. Cette préparation enzymatique purifiée est ensuite soumise à une phase finale de polissage sur une colonne de chromatographie sur gel Sephacryl?TM¿ S-300-HR avec un tampon acétate de sodium 10 mM à un pH de 4,5, contenant du chlorure de potassium 10 mM (ou du chlorure de sodium) et 1 % de glycérol. Le produit élué résultant contenant l'enzyme est rassemblé et concentré par anti-dialyse contre 50 % de polyéthylène glycol (PEG) 6000 dans de l'eau désionisée pour produire une forme hautement purifiée et concentrée de ladite enzyme convenant à des applications thérapeutiques ou alimentaires.
Designated States: AM, AT, AU, BB, BG, BR, BY, CA, CH, CN, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, GB, GE, HU, IS, JP, KE, KG, KP, KR, KZ, LK, LR, LT, LU, LV, MD, MG, MN, MW, MX, NO, NZ, PL, PT, RO, RU, SD, SE, SG, SI, SK, TJ, TM, TT, UA, UG, US, UZ, VN.
African Regional Intellectual Property Organization (KE, LS, MW, SD, SZ, UG)
European Patent Office (AT, BE, CH, DE, DK, ES, FI, FR, GB, GR, IE, IT, LU, MC, NL, PT, SE)
African Intellectual Property Organization (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, ML, MR, NE, SN, TD, TG).
Publication Language: English (EN)
Filing Language: English (EN)