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1. (WO1997035985) HOST CELLS EXPRESSING MUTANTS OF A NATURAL G-PROTEIN COUPLED RECEPTOR (GPCR); SACCHAROMYCES CEREVISIAE STE2 GENE, AND THEIR USE AS BIOSENSORS
Latest bibliographic data on file with the International Bureau   

Pub. No.:    WO/1997/035985    International Application No.:    PCT/GB1997/000746
Publication Date: 02.10.1997 International Filing Date: 19.03.1997
IPC:
C07K 14/395 (2006.01)
Applicants: BRITISH BIOTECH PHARMACEUTICALS LIMITED [GB/GB]; Watlington Road, Cowley, Oxford OX4 5LY (GB)
Inventors: EDWARDS, Richard, Mark; (GB)
Agent: WALLS, Alan, J.; British Biotech Pharmaceuticals Limited, Watlington Road, Cowley, Oxford OX4 5LY (GB)
Priority Data:
9606126.2 22.03.1996 GB
Title (EN) HOST CELLS EXPRESSING MUTANTS OF A NATURAL G-PROTEIN COUPLED RECEPTOR (GPCR); SACCHAROMYCES CEREVISIAE STE2 GENE, AND THEIR USE AS BIOSENSORS
(FR) MUTANTS D'EXPRESSION DE CELLULES HOTES D'UN RECEPTEUR NATUREL COUPLE A LA PROTEINE G (GPCR); GENE STE2 SACCHAROMYCES CEREVISIAE, ET LEUR UTILISATION EN TANT QUE BIODETECTEURS
Abstract: front page image
(EN)A method for the preparation of cells (useful as biosensors) which present on their surface a mutant of a natural G-protein coupled receptor (GPCR), said mutant being capable of binding a desired ligand which the natural receptor cannot, which method comprises: generating a diverse collection of replicable expression plasmids which comprise (i) a coding sequence coding for a mutated form of a natural GPCR, wherein the mutation is of one or more amino acids in the transmembrane and/or extracellular domains of the natural GPCR, and (ii) expression control sequences operatively linked to said coding sequence to control expression of the mutant GPCR; transforming cells of a host organism with said diverse collection of plasmids; culturing the resultant collection of transformed cells for a sufficient time to permit expression of mutant GPCR from plasmids replicating within such cells; contacting the cultured cells with the desired ligand; and isolating cells wherein the surface presented mutant GPCR expressed by such cells binds to the desired ligand.
(FR)L'invention concerne un procédé de préparation de cellules (utilisées comme biodétecteurs) qui présentent à leur surface un mutant d'un récepteur naturel couplé à la protéine G (GPCR), ce mutant étant capable de fixer un ligand désiré alors que ne peut le faire le récepteur naturel. Ce procédé consiste à: obtenir un jeu diversifié de plasmides d'expression pouvant se répliquer et qui comprennent: (i) une séquence codante codant pour une forme mutée d'un récepteur naturel couplé à la protéine G, la mutation étant constituée d'un ou plusieurs acides aminés dans la transmembrane et/ou les domaines extracellulaires du récepteur naturel couplé à la protéine G, et (ii) des séquences de régulation d'expression liées de manière fonctionnelle aux séquences codantes afin de réguler l'expression du récepteur mutant couplé à la protéine G. Ce procédé consiste à transformer des cellules d'un organisme hôte avec le jeu diversifié de plasmides; mettre en culture le jeu obtenu de cellules transformées sur une durée suffisante pour permettre l'expression du récepteur mutant couplé à la protéine G à partir des plasmides se répliquant dans ces cellules; mettre en contact les cellules cultivées avec le ligand désiré; et isoler des cellules, le récepteur mutant couplé à la protéine G présent en surface et exprimé par ces cellules se fixant au ligand désiré.
Designated States: GB.
Publication Language: English (EN)
Filing Language: English (EN)