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1. (WO1997021804) NOVEL THERMOLYSIN-LIKE PROTEASE AND USE THEREOF
Latest bibliographic data on file with the International Bureau   

Pub. No.:    WO/1997/021804    International Application No.:    PCT/JP1996/003617
Publication Date: 19.06.1997 International Filing Date: 11.12.1996
Chapter 2 Demand Filed:    27.05.1997    
IPC:
C07K 5/072 (2006.01), C12N 9/54 (2006.01)
Applicants: SAGAMI CHEMICAL RESEARCH CENTER [JP/JP]; 4-1, Nishi-Ohnuma 4-chome, Sagamihara-shi, Kanagawa 229 (JP) (For All Designated States Except US).
HOLLAND SWEETENER COMPANY V.O.F. [NL/NL]; Blekerij 52, NL-6212 XW Maastricht (NL) (For All Designated States Except US).
HANZAWA, Satoshi [JP/JP]; (JP) (For US Only).
OHE, Seigo [JP/JP]; (JP) (For US Only).
MIYAKE, Toshio [JP/JP]; (JP) (For US Only).
KIDOKORO, Shun-ichi [JP/JP]; (JP) (For US Only).
ENDO, Kimiko [JP/JP]; (JP) (For US Only).
WADA, Akiyoshi [JP/JP]; (JP) (For US Only)
Inventors: HANZAWA, Satoshi; (JP).
OHE, Seigo; (JP).
MIYAKE, Toshio; (JP).
KIDOKORO, Shun-ichi; (JP).
ENDO, Kimiko; (JP).
WADA, Akiyoshi; (JP)
Agent: HAGINO, Taira; Eikoh Patent Office, ARK Mori Building, 28th floor, 12-32, Akasaka 1-chome, Minato-ku, Tokyo 107 (JP)
Priority Data:
7/321814 11.12.1995 JP
Title (EN) NOVEL THERMOLYSIN-LIKE PROTEASE AND USE THEREOF
(FR) NOUVELLE PROTEASE ANALOGUE A LA THERMOLYSINE ET SON UTILISATION
Abstract: front page image
(EN)A novel thermolysin-like protease having an improved stability and a method wherein this protease is used in a coupling reaction with phenylalanine methyl ester so as to elevate the efficiency of the reaction. The novel thermolysin-like protease is one which is to be used in the coupling of N-benzyloxycarbonylaspartic acid with phenylalanine methyl ester in a water soluble medium in a process for synthesizing benzyloxycarbonyl-$g(a)-L-aspartyl-L-phenylalanine methyl ester via the enzymatic reaction and characterized in that the volume of a void in electron density existing in the thermolysin having the amino acid sequence of SEQ ID NO:1 in the Sequence Listing and surrounded at least by Leu at the 144-position, Thr at the 149-position, Ala at the 240-position, Ala at the 270-position and Ala at the 288-position has been at least partly made up for by substituting at least one of these amino acid residues by amino acid residue(s) having larger hydrophobicity and bulkiness, or by affecting the amino acid residues surrounding the void in electron density so as to reduce the volume of the void, and a method wherein the protease is used in the coupling reaction of N-benzyloxycarbonylaspartic acid with phenylalanine methyl ester.
(FR)La présente invention concerne une nouvelle protéase analogue à la thermolysine, qui possède une stabilité améliorée, ainsi qu'un procédé dans lequel cette protéase est utilisée dans une réaction de couplage avec du phénylalanine méthyle ester afin d'augmenter le rendement de la réaction. Cette nouvelle protéase analogue à la thermolysine s'utilise dans le couplage d'acide N-benzyloxycarbonylaspartique et de phénylalanine méthyle ester en un milieu soluble dans l'eau, dans un processus de synthèse du benzyloxycarbonyl-$g(a)-L-aspartyl-L-phénylalanine méthyle ester par l'intermédiaire de la réaction enzymatique. Elle est caractérisée en ce qu'on a compensé au moins partiellement le volume d'un vide dans la densité d'électrons existant dans la thermolysine ayant la séquence d'acides aminés SEQ ID NO: 1 dans la liste de séquences, et entourée au moins par Leu à la position 144, Thr à 149, Ala à 240, 270 et 288, en substituant au moins l'un de ces résidus d'acides aminés par un ou plusieurs restes acides aminés ayant une hydrophobie et un encombrement supérieurs ou en influant sur les restes acides aminés qui entourent le vide dans la densité d'électrons de manière à réduire le volume de ce vide. L'invention concerne également un procédé selon lequel la protéase est utilisée dans la réaction de couplage d'acide N-benzyloxycarbonylaspartique et de phénylalanine méthyle ester.
Designated States: KR, US.
European Patent Office (AT, BE, CH, DE, DK, ES, FI, FR, GB, GR, IE, IT, LU, MC, NL, PT, SE).
Publication Language: Japanese (JA)
Filing Language: Japanese (JA)