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1. (WO1997008299) OVERPRODUCTION OF NEURONAL NITRIC OXIDE SYNTHASE
Latest bibliographic data on file with the International Bureau   

Pub. No.:    WO/1997/008299    International Application No.:    PCT/US1996/014045
Publication Date: 06.03.1997 International Filing Date: 23.08.1996
Chapter 2 Demand Filed:    24.03.1997    
IPC:
C07K 14/245 (2006.01), C12N 9/02 (2006.01)
Applicants: BOARD OF REGENTS, THE UNIVERSITY OF TEXAS SYSTEM [US/US]; 201 West 7th Street, Austin, TX 78701 (US) (For All Designated States Except US).
MASTERS, Bettie, Sue [--/US]; (US) (For US Only).
ROMAN, Linda, J. [--/US]; (US) (For US Only).
SHETA, Essam, A. [--/EG]; (EG) (For US Only)
Inventors: MASTERS, Bettie, Sue; (US).
ROMAN, Linda, J.; (US).
SHETA, Essam, A.; (EG)
Agent: SERTICH, Gary, J.; Arnold, White & Durkee, P.O. Box 4433, Houston, TX 77210 (US)
Priority Data:
08/519,105 24.08.1995 US
Title (EN) OVERPRODUCTION OF NEURONAL NITRIC OXIDE SYNTHASE
(FR) PRODUCTION EXCESSIVE DE LA SYNTHETASE DU MONOXYDE D'AZOTE NEURONALE
Abstract: front page image
(EN)The present invention is directed to overproduction of nitric oxide synthase (NOS) in a prokaryote. More particularly, the invention involves overexpression of functional neuronal NOS in a protease-deficient strain of $i(Escherichia coli), utilizing a pCW vector under the control of the $i(tac) promotor. The invention further involves co-expression of the protein with folding agonists, or chaperonins. The enzyme produced is complete with heme and flavins, and may be activated by incubation with tetrahydrobiopterin. It may be isolated as a predominantly high spin heme protein that demonstrates spectral properties which are identical to those of nNOS isolated from human kidney 293 cells. The methods disclosed are contemplated to be useful in expressing large amounts of other nitric oxide synthases, as well as other proteins that are difficult to produce correctly folded in prokaryotes.
(FR)Cette invention porte sur une production excessive de la synthétase du monoxyde d'azote (NOS) dans une cellule procaryote. Elle a trait, plus précisément, à une surexpression de la NOS neuronale fonctionnelle dans une souche déficitaire en protéase d'$i(Escherichia coli), utilisant un vecteur de la protéine pCW sous l'égide du promoteur du polypeptide responsable de l'activation des antigènes T. L'invention concerne, de surcroît, une co-expression de la protéine avec des agonistes de repliement des chaînes ou chaperonines. L'enzyme produite, qui est complète avec hème et flavine, peut être activée par incubation avec une tétrahydrobioptérine. Elle peut être isolée comme protéine d'hème à dominante de spin élevé faisant montre de propriétés spectrales identiques à celles de la nNOS isolée des cellules 293 du rein humain. On considère que les procédés selon l'invention se révéleront utiles pour l'expression de grande quantités d'autres synthétases du monoxyde d'azote ainsi que de celle d'autres protéines difficiles à produire correctement pliées dans des cellules procaryotes.
Designated States: AL, AM, AT, AU, BB, BG, CA, CH, CN, CU, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, GB, GE, HU, IL, IS, JP, KE, KG, KP, KR, KZ, LK, LR, LS, LT, LU, LV, MD, MG, MK, MN, MW, MX, NO, NZ, PL, PT, RO, RU, SD, SE, SG, SI, SK, TJ, TM, TR, TT, UA, UG, US, UZ, VN.
African Regional Intellectual Property Organization (KE, LS, MW, SD, SZ, UG)
Eurasian Patent Organization (AM, AZ, BY, KG, KZ, MD, RU, TJ, TM)
European Patent Office (AT, BE, CH, DE, DK, ES, FI, FR, GB, GR, IE, IT, LU, MC, NL, PT, SE)
African Intellectual Property Organization (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, ML, MR, NE, SN, TD, TG).
Publication Language: English (EN)
Filing Language: English (EN)