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1. WO1996040994 - DNA POLYMERASE EXTENSION ASSAY

Publication Number WO/1996/040994
Publication Date 19.12.1996
International Application No. PCT/US1996/008330
International Filing Date 03.06.1996
Chapter 2 Demand Filed 30.12.1996
IPC
C12Q 1/68 2006.01
CCHEMISTRY; METALLURGY
12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
1Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
68involving nucleic acids
CPC
C12Q 1/6813
CCHEMISTRY; METALLURGY
12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS
1Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms
68involving nucleic acids
6813Hybridisation assays
Applicants
  • MERCK & CO., INC. [US]/[US] (AllExceptUS)
  • COLE, James, L. [US]/[US] (UsOnly)
  • KUO, Lawrence, C. [US]/[US] (UsOnly)
  • OLSEN, David, B. [US]/[US] (UsOnly)
Inventors
  • COLE, James, L.
  • KUO, Lawrence, C.
  • OLSEN, David, B.
Common Representative
  • MERCK & CO., INC.
Priority Data
08/487,76007.06.1995US
Publication Language English (EN)
Filing Language English (EN)
Designated States
Title
(EN) DNA POLYMERASE EXTENSION ASSAY
(FR) PROCEDE DE DETECTION PAR EXTENSION CATALYSEE PAR L'ADN POLYMERASE
Abstract
(EN)
An assay for enzymes which act on substrates to produce a single-stranded oligonucleotide product has been developed which involves the DNA polymerase-catalyzed extension of the oligonucleotide cleavage product using labeled nucleotides and a DNA template containing a 3' region complementary to the oligonucleotide product joined to a 5' region consisting of repeated nucleotide residues. The DNA polymerase extension assay does not involve gel electrophoretic separation and is amenable to high volume screening of potential inhibitors. Other key features of the assay are that it monitors the substrate cleavage reaction only at the correct position in the sequence, thereby discriminating against nonspecific cleavage products, and that it is sensitive enough to detect 200 attomoles of product.
(FR)
Procédé de détection d'enzymes exerçant une action sur des substrats, pour produire un produit oligonucléotide monocaténaire, procédé qui consiste en l'extension catalysée par ADN polymérase du produit de clivage d'oligonucléotide au moyen de nucléotides marqués et d'une matrice d'ADN contenant une région 3' complémentaire du produit d'oligonucléotide liée à une région 5' constituée par des résidus répétés de nucléotides. Ce procédé ne nécessite pas de séparation par électrophorèse sur gel et permet d'obtenir un criblage d'un volume important d'inhibiteurs potentiels. De plus, le procédé se caractérise en ce qu'il exerce un contrôle sur la réaction de clivage du substrat uniquement à la position correcte dans la séquence, ce qui permet de distinguer des produits de clivage non spécifiques, qu'il est suffisamment sensible pour détecter 200 attomoles de produit.
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