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1. (WO1996003525) METHOD AND REAGENTS FOR THE DETECTION OF TARGET NUCLEIC ACID SEQUENCES
Latest bibliographic data on file with the International Bureau   

Pub. No.:    WO/1996/003525    International Application No.:    PCT/EP1995/002944
Publication Date: 08.02.1996 International Filing Date: 25.07.1995
Chapter 2 Demand Filed:    22.02.1996    
IPC:
C12Q 1/68 (2006.01)
Applicants: RAGGIO-ITALGENE S.P.A. [IT/IT]; Via Delle Antille, 29, I-00040 Pomezia (IT) (For All Designated States Except US).
MARCOLINI, Stanislavo [IT/IT]; (IT) (For US Only).
MARTINAZZO, Giorgio [IT/IT]; (IT) (For US Only)
Inventors: MARCOLINI, Stanislavo; (IT).
MARTINAZZO, Giorgio; (IT)
Agent: SILVESTON, Judith; Abel & Imray, Northumberland House, 303-306 High Holborn, London WC1V 7LH (GB)
Priority Data:
9414934.1 25.07.1994 GB
Title (EN) METHOD AND REAGENTS FOR THE DETECTION OF TARGET NUCLEIC ACID SEQUENCES
(FR) PROCEDE ET REACTIFS PERMETTANT DE DETECTER DES SEQUENCES NUCLEOTIDIQUES CIBLES
Abstract: front page image
(EN)A method for the detection of a target nucleic acid sequence in a sample, which comprises: (i) contacting the sample, which has been treated to bring any nucleic acids present into single-stranded form, (a) with a linear single stranded vector-probe capable of transforming competent bacteria when in circular form, said vector-probe comprising a nucleic acid sequence complementary to the target nucleic acid sequence, said nucleic acid sequence being present in two parts, one part of said nucleic acid being present at the 5'-end of the vector-probe, the other part being present at the 3'-end, said vector-probe also comprising a region encoding a selectable or detectable marker, under conditions that permit hybridisation of any target sequence present in the sample to the complementary sequence, and (b) with an enzyme capable of repairing a single-stranded break in a double-stranded nucleic acid structure; (ii) inactivating the repair enzyme; (iii) separating any resulting circularized single stranded linear vector-probe from the annealed target; (iv) contacting the circularized single stranded linear vector-probe, optionally in the form of the reaction mixture resulting from step (ii), with competent host bacteria that lack the marker present in the vector-probe under transformation conditions; (v) culturing the resulting transformed bacteria and investigating the presence of the marker; and a vector for use in the method. The method may also be used for the detection and/or identification of mutations in a target nucleic acid sequence.
(FR)Procédé de détection d'une séquence nucléotidique cible consistant à: (i) mettre en contact l'échantillon qui a été traité pour que les acides nucléiques présents adoptent une forme à brin unique, (a) avec une sonde-vecteur à brin unique linéaire capable de transformer des bactéries compétentes lorsqu'elle présente une forme circulaire, ladite sonde-vecteur comprenant une séquence nucléotidique complémentaire à la séquence nucléotidique cible, ladite séquence nucléotidique étant présente en deux parties qui sont respectivement présentes à l'extrémité 5' et à l'extrémité 3' de la sonde-vecteur, ladite sonde-vecteur comprenant également une région codant un marqueur pouvant être sélectionné ou détecté, dans des conditions permettant à toute séquence cible présente dans l'échantillon de s'hybrider avec la séquence complémentaire, et (b) avec une enzyme capable de réparer une rupture à brin unique dans une structure d'acide nucléique à deux brins; (ii) inactiver l'enzyme réparatrice; (iii) séparer toute sonde-vecteur linéaire à brin unique circularisée résultante de la cible cyclisée; (iv) mettre en contact la sonde-vecteur linéaire à brin unique circularisée, éventuellement sous forme du mélange réactionnel résultant de l'étape (ii) avec des bactéries compétentes ne possédant pas le marqueur présent dans la sonde-vecteur dans des conditions de transformation; (v) mettre en culture les bactéries transformées résultantes et rechercher la présence du marqueur; et vecteur utilisé dans ce procédé. On peut également employer ce procédé pour détecter et/ou identifier des mutations dans une séquence nucléotidique cible.
Designated States: AM, AT, AU, BB, BG, BR, BY, CA, CH, CN, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, GB, GE, HU, IS, JP, KE, KG, KP, KR, KZ, LK, LR, LT, LU, LV, MD, MG, MN, MW, MX, NO, NZ, PL, PT, RO, RU, SD, SE, SG, SI, SK, TJ, TM, TT, UA, UG, US, UZ, VN.
African Regional Intellectual Property Organization (KE, MW, SD, SZ, UG)
European Patent Office (AT, BE, CH, DE, DK, ES, FR, GB, GR, IE, IT, LU, MC, NL, PT, SE)
African Intellectual Property Organization (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, ML, MR, NE, SN, TD, TG).
Publication Language: English (EN)
Filing Language: English (EN)