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1. (WO1996002660) POSITIONAL CONTROL OF SELENIUM INSERTION IN POLYPEPTIDES FOR X-RAY CRYSTALLOGRAPHY
Latest bibliographic data on file with the International Bureau   

Pub. No.:    WO/1996/002660    International Application No.:    PCT/US1995/009121
Publication Date: 01.02.1996 International Filing Date: 19.07.1995
Chapter 2 Demand Filed:    20.02.1996    
IPC:
C12N 9/08 (2006.01), C12N 15/10 (2006.01), C12P 21/00 (2006.01), G01N 23/20 (2006.01)
Applicants: UNIVERSITY OF MASSACHUSETTS MEDICAL CENTER [US/US]; 55 Lake Avenue, North Worcester, MA 01655 (US)
Inventors: LEONARD, Jack, L.; (US).
NEWBURGER, Peter, E.; (US)
Agent: CLARK, Paul, T.; Fish & Richardson P.C., 225 Franklin Street, Boston, MA 02110-2804 (US).
FASSE, J., Peter; Fish and Richardson P.C., 225 Franklin Street, Boston, MA 02110-2804 (US)
Priority Data:
08/277,492 19.07.1994 US
08/473,496 07.06.1995 US
Title (EN) POSITIONAL CONTROL OF SELENIUM INSERTION IN POLYPEPTIDES FOR X-RAY CRYSTALLOGRAPHY
(FR) COMMANDE DE POSITION DE L'INSERTION DE SELENIUM DANS DES POLYPEPTIDES POUR LA CRISTALLOGRAPHIE AUX RAYONS X
Abstract: front page image
(EN)The invention provides methods for determining the structure of a polypeptide by a) transfecting a cell with (i) a first nucleic acid encoding the polypeptide, wherein at least one, specific codon of mRNA transcribed from the first nucleic acid is replaced by the codon UGA, and (ii) a second nucleic acid, operably linked to the first nucleic acid, that directs the translation of the UGA codon as selenocysteine only when the cell can obtain selenium from the medium in which it is grown; b) growing the cell in selenium-containing growth medium under conditions in which the cell incorporates at least one selenocysteine residue into the polypeptide at a specific location; c) isolating the polypeptide from the cell or the growth medium; d) forming a crystal of the polypeptide; and e) performing X-ray crystallography on the crystal, wherein the selenocysteine residue is used to determine the structure of the polypeptide.
(FR)Cette invention se rapporte à des procédés qui permettent de déterminer la structure d'un polypeptide, (a) en transfectant une cellule avec (i) un premier acide nucléique codant ledit polypeptide, dans lequel au moins un codon spécifique d'ARNm transcrit à partir dudit premier acide nucléique est remplacé par le codon UGA, et (ii) un second acide nucléique, lié fonctionnellement au premier acide nucléique, qui dirige la traduction du codon UGA en tant que sélénocystéine, uniquement lorsque la cellule en question peut obtenir du sélénium à partir du milieu dans lequel s'est faite sa croissance; (b) en faisant croître ladite cellule dans un milieu de croissance contenant du sélénium, dans des conditions dans lesquelles la cellule en question incorpore au moins un reste de sélénocystéine dans le polypeptide à un endroit spécifique; (c) en isolant ledit polypeptide de la cellule en question ou de son milieu de croissance; (d) en formant un cristal dudit polypeptide; et (e) en effectuant une cristallographie aux rayons X sur ledit cristal, opération dans laquelle le reste de sélénocystéine est utilisé pour déterminer la structure du polypeptide.
Designated States: AU, CN, JP, KR.
European Patent Office (AT, BE, CH, DE, DK, ES, FR, GB, GR, IE, IT, LU, MC, NL, PT, SE).
Publication Language: English (EN)
Filing Language: English (EN)