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1. (WO1994025609) METHOD FOR CREATING OPTIMIZED REGULATORY REGIONS AFFECTING PROTEIN EXPRESSION AND PROTEIN TRAFFICKING
Latest bibliographic data on file with the International Bureau   

Pub. No.:    WO/1994/025609    International Application No.:    PCT/US1994/004651
Publication Date: 10.11.1994 International Filing Date: 28.04.1994
Chapter 2 Demand Filed:    20.10.1994    
IPC:
C07K 16/00 (2006.01), C12N 15/62 (2006.01), C12N 15/63 (2006.01), C12N 15/67 (2006.01)
Applicants: HYBRITECH INCORPORATED [US/US]; 11095 Torreyana Drive, San Diego, CA 92121 (US)
Inventors: ANTELMAN, Douglas, Evan; (US).
WILSON, Barry, S.; (US)
Agent: LAMMERT, Steven, R.; Barnes & Thornburg, 1313 Merchants Bank Building, 11 South Meridian Street, Indianapolis, IN 46204 (US)
Priority Data:
08/054,730 28.04.1993 US
Title (EN) METHOD FOR CREATING OPTIMIZED REGULATORY REGIONS AFFECTING PROTEIN EXPRESSION AND PROTEIN TRAFFICKING
(FR) PROCEDE DE PRODUCTION DE REGIONS REGULATRICES OPTIMALISEES AFFECTANT L'EXPRESSION ET LE CIBLAGE DES PROTEINES
Abstract: front page image
(EN)This invention discloses a method for optimizing the production of a polypeptide in a cell comprising the steps of identifying a regulatory region within a nucleic acid sequence to be mutagenized; preparing a nucleic acid vector comprising that region and encoding at least one polypeptide regulated by said regulatory region; deleting that region from the vector; producing a pool of random oligonucleotides; using PCR to introduce one random oligonucleotide into the position previously occupied by the regulatory region into each of a plurality of vectors to generate a pool of mutagenized vectors; introducing the mutagenized vectors into a cell sample; assaying for the expression of the polypeptide in that sample; and selecting and isolating those cells exhibiting optimized polypeptide expression. The regulatory regions contemplated within the scope of this invention include signal and protein trafficking sequences, ribosome binding sites, promoters, and translational regulatory sequences.
(FR)L'invention se rapporte à un procédé permettant d'optimaliser la production d'un polypeptide dans une cellule, et consistant à identifier une région régulatrice dans une séquence d'acide nucléique devant subir une mutagenèse; à préparer un vecteur d'acide nucléique comprenant cette région et codant au moins un polypeptide régulé par ladite région régulatrice; à effectuer la délétion de cette région à partir du vecteur; à produire un fonds d'oligonucléotides aléatoires; à utiliser le procédé d'amplification PCR pour introduire un oligonucléotide aléatoire au niveau de la position précédemment occupée par la région régulatrice dans chaque vecteur faisant partie d'une pluralité de vecteurs afin de générer un fonds de vecteurs à mutagenèse; à introduire les vecteurs à mutagenèse dans un échantillon cellulaire; à effectuer un dosage afin de détecter l'expression du polypeptide dans cet échantillon; à sélectionner et isoler les cellules présentant une expression de polypeptide optimalisée. Les régions régulatrices décrites dans le cadre de cette invention comprennent des séquences de ciblage de protéines et des séquences-signaux, des sites de liaison de ribosome, des promoteurs et des séquences régulatrices de traduction.
Designated States: AT, AU, BB, BG, BR, BY, CA, CH, CN, CZ, DE, DK, ES, FI, GB, HU, JP, KG, KP, KR, KZ, LK, LU, LV, MD, MG, MN, MW, NL, NO, NZ, PL, PT, RO, RU, SD, SE, SI, SK, TJ, TT, UA, UZ, VN.
European Patent Office (AT, BE, CH, DE, DK, ES, FR, GB, GR, IE, IT, LU, MC, NL, PT, SE)
African Intellectual Property Organization (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, ML, MR, NE, SN, TD, TG).
Publication Language: English (EN)
Filing Language: English (EN)