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1. (WO1991006645) PROCESS FOR MUTAGENESIS OF DOUBLE-STRAND CIRCULAR DNA
Latest bibliographic data on file with the International Bureau

Pub. No.: WO/1991/006645 International Application No.: PCT/EP1990/001939
Publication Date: 16.05.1991 International Filing Date: 30.10.1990
Chapter 2 Demand Filed: 23.04.1991
IPC:
C12N 15/10 (2006.01)
C CHEMISTRY; METALLURGY
12
BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
N
MICRO-ORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICRO-ORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
15
Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
09
Recombinant DNA-technology
10
Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
Applicants:
MAX-PLANCK-GESELLSCHAFT ZUR FÖRDERUNG DER WISSENSCHAFTEN E.V. [DE/DE]; Bunsenstraße 10 D-3400 Göttingen, DE (AllExceptUS)
ECKSTEIN, Fritz [DE/DE]; DE (UsOnly)
OLSEN, David [US/DE]; DE (UsOnly)
Inventors:
ECKSTEIN, Fritz; DE
OLSEN, David; DE
Agent:
WEICKMANN, H. ; Möhlstraße 22 D-8000 München 80, DE
Priority Data:
P 39 36 258.231.10.1989DE
Title (DE) VERFAHREN ZUR MUTAGENESE VON DOPPELSTRÄNGIGER ZIRKULÄRER DNA
(EN) PROCESS FOR MUTAGENESIS OF DOUBLE-STRAND CIRCULAR DNA
(FR) PROCEDE POUR LA MUTAGENESE D'ADN CIRCULAIRE BICATENAIRE
Abstract:
(DE) Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Mutagenese von doppelsträngiger zirkulärer DNA, bei dem die Wildtyp-DNA selektiv zerstört werden kann. Ein DNA-Strang wird dazu spezifisch genickt und mit Exonuklease partiell abgebaut. Dann erfolgt die Hybridisierung eines Mutagenese-Primers. Anschließend wird die DNA in einer Polymerase-Reaktion wieder aufgefüllt, wobei der mutierte DNA-Strang mindestens ein modifiziertes Nukleotid enthalten muß. Dabei entsteht eine mutierte Heteroduplex-DNA, deren nicht-mutierter Strang spezifisch genickt wird. Nach Abbau der Wildtyp-Sequenzen an der Mutagenese-Stelle durch eine weitere Exonuklease-Behandlung kann man durch eine zweite Polymerase-Reaktion eine mutierte Homoduplex-DNA erzeugen.
(EN) The invention relates to a process for mutagenesis of double-strand circular DNA in which the wild-type DNA can be selectively destroyed. To this end, a DNA strand is specifically nicked and partially decomposed with exonuclease. A mutagenesis primer is then hybridized. The DNA is then introduced into a polymerase reaction; the mutated DNA strand must contain at least one modified nucleotide. A mutated heteroduplex DNA is produced the non-mutated strand of which is specifically nicked. Following decomposition of the wild-type sequences at the mutagenesis site by further treatment with exonuclease, a mutated homoduplex DNA can be produced by a second polymerase reaction.
(FR) Est décrit un procédé pour la mutagénèse d'ADN circulaire bicaténaire, dans lequel peut être sélectivement détruit l'ADN de type sauvage. A cet effet une chaîne d'ADN est spécifiquement fragmentée et partiellement décomposée avec une exonucléase. Une amorce de mutagénèse est ensuite hybridée. L'ADN est alors regarni dans une réaction de polymérase, la chaîne d'ADN ayant subi une mutation devant contenir au moins un nucléotide modifié. Un ADN hétéroduplex ayant subi une mutation est produit, dont la chaîne n'ayant pas subi de mutation est spécifiquement fragmentée. Après décomposition des séquences de type sauvage au niveau du site de mutagénèse grâce à un traitement ultérieur avec une exonucléase, un ADN homoduplex ayant subi une mutation peut être produit par une deuxième réaction de polymérase.
Designated States: JP, US
European Patent Office (AT, BE, CH, DE, DK, ES, FR, GB, GR, IT, LU, NL, SE)
Publication Language: German (DE)
Filing Language: German (DE)