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1. (WO1990003431) MIXED FEED RECOMBINANT YEAST FERMENTATION
Latest bibliographic data on file with the International Bureau   

Pub. No.:    WO/1990/003431    International Application No.:    PCT/US1989/004164
Publication Date: 05.04.1990 International Filing Date: 25.09.1989
Chapter 2 Demand Filed:    24.04.1990    
IPC:
C07K 14/485 (2006.01), C12N 9/02 (2006.01), C12N 9/36 (2006.01), C12N 15/81 (2006.01)
Applicants: THE SALK INSTITUTE BIOTECHNOLOGY/INDUSTRIAL ASSOCIATES, INC. [US/US]; 10280 North Torrey Pines Road, La Jolla, CA 92037 (US)
Inventors: BRIERLEY, Russell, Arthur; (US).
SIEGEL, Robert, Steven; (US).
BUSSINEAU, Christopher, Michael; (US).
CRAIG, William, Scot; (US).
HOLTZ, Gregory, Clyde; (US).
DAVIS, Geneva, Ruth; (US).
BUCKHOLZ, Richard, Gordon; (US).
THILL, Gregory, Patrick; (US).
WONDRACK, Lillian, Margaret; (US).
DIGAN, Mary, Ellen; (US).
HARPOLD, Michael, Miller; (US).
LAIR, Stephen, Vernon; (US).
ELLIS, Steven, Bradley; (US).
WILLIAMS, Mark, Edward; (US)
Agent: WATT, Phillip, H.; Fitch, Even, Tabin & Flannery, Room 900, 135 South LaSalle Street, Chicago, IL 60603 (US)
Priority Data:
249,446 26.09.1988 US
265,446 01.11.1988 US
311,517 13.02.1989 US
323,964 15.03.1989 US
Title (EN) MIXED FEED RECOMBINANT YEAST FERMENTATION
(FR) FERMENTATION DE LEVURE DE RECOMBINAISON A ALIMENTATION MELANGEE
Abstract: front page image
(EN)The invention provides a method of increasing the production of a recombinant gene product from a culture of a recombinant methylotrophic yeast host, wherein said product is made by expression from a recombinant gene sequence operably associated with a methanol-responsive expression control element. In the method of the invention, the methylotrophic yeast host is first cultured on a medium with a high concentration of multi-carbon, carbon-source nutriment, such as glycerol, but with little or no methanol, in order to increase the density of the host cells with little or no expression of the recombinant gene product. When the host cells have achieved a suitable density in the culture medium, the culture is subjected to a phase during which the concentration of multi-carbon, carbon-source nutriments is maintained sufficiently low that the methanol-responsive control element controlling expression of the recombinant gene encoding the desired product is derepressed. Finally, the culture is subjected to a phase of high production of the recombinant gene product by increasing the concentration of methanol while maintaining the concentration of multi-carbon, carbon-source nutriments at a low level. The invention is illustrated with production, using $i(Pichia pastoris), of bovine lysozyme c2, human lysozyme, human epidermal growth factors (1-52) and (1-48), and human superoxide dismutase.
(FR)L'invention concerne un procédé permettant d'augmenter la production d'un produit génétique de recombinaison à partir d'une culture d'un hôte de levure méthylotrophique de recombinaison, dans lequel ledit produit est fabriqué par expression à partir d'une séquence génétique de recombinaison associée de manière fonctionnelle à un élément de régulation d'expression réagissant au méthanol. Selon le procédé de l'invention, en premier lieu on cultive l'hôte de levure méthylotrophique dans un milieu à forte concentration de nutriment de source de carbone multi-carbone, tel que du glycérol, mais présentant peu ou pas de méthanol, afin d'augmenter la densité des cellules hôtes avec peu ou pas d'expression du produit génétique de recombinaison. Lorsque les cellules hôtes ont atteint une densité adéquate dans le milieu de culture, on soumet ladite culture à une phase pendant laquelle la concentration de nutriments de source de carbone multi-carbone est maintenue suffisamment basse pour que l'élément de régulation réagissant au méthanol et régulant l'expression du gène de recombinaison codant le produit soit dérégulé. Enfin, on soumet ladite culture à une phase de haute production du produit génétique de recombinaison en augmentant la concentration de méthanol tout en maintenant la concentration de nutriment de source de carbone multi-carbone à un faible niveau. L'invention est illustrée par la production, à l'aide de $i(Pichia pastoris), de lysozyme bovine c2, lysozyme humaine, facteurs de croissance épidermique humains (1-52) et (1-48), et de superoxyde dismutase humaine.
Designated States: AU, DK, FI, JP, KR, NO.
European Patent Office (AT, BE, CH, DE, FR, GB, IT, LU, NL, SE).
Publication Language: English (EN)
Filing Language: English (EN)