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1. (WO1984004329) ENZYME EXTRACTION AND PURIFICATION PROCESSES
Latest bibliographic data on file with the International Bureau   

Pub. No.:    WO/1984/004329    International Application No.:    PCT/AU1984/000069
Publication Date: 08.11.1984 International Filing Date: 19.04.1984
IPC:
C12N 9/00 (2006.01), C12N 9/04 (2006.01), C12N 9/12 (2006.01)
Applicants:
Inventors:
Priority Data:
  30.12.1899 null
Title (EN) ENZYME EXTRACTION AND PURIFICATION PROCESSES
(FR) PROCEDES D"EXTRACTION ET DE PURIFICATION D"ENZYMES
Abstract: front page image
(EN)A process for the preparation of an enzyme extract containing glucose 6-phosphate dehydrogenase, glucokinase, pyruvate kinase and fructokinase, derived from microorganism cells, by subjecting Zymomonas mobilis bacterium cells to extraction with an extraction medium comprising a partially water-miscible organic solvent; a non-ionic surfactant; and lysozyme; under neutral to alkaline pH conditions to provide an extract containing said enzymes. The process can be integrated with a process for the sequential isolation of the glucose 6-phosphate dehydrogenase, glucokinase, pyruvate kinase and fructokinase, present in the enzyme extract, by sequentially contacting the extract in a buffer with a plurality of affinity chromatography adsorbents each of which is a protein-binding dye bound to a support matrix and selective with respect to said enzymes so that glucose 6-phosphate dehydrogenase and glucokinase are isolated from the extract by the correspondingly selective adsorbent, followed by isolation of pyruvate kinase and fructokinase by the correspondingly selective adsorbents, then elution to recover each enzyme from the correspondingly selective adsorbent of said plurality of adsorbents, with optional purification of each enzyme.
(FR)Procédé de préparation d"un extrait d"enzyme contenant de la déhydrogénase de glucose (6)-phosphate, de la glucokinase, de la kinase de pyruvate et de la fructokinase, dérivées des cellules de micro-organismes, en soumettant les cellules des bactéries Zymomonas mobilis à extraction à l"aide d"un agent extracteur comprenant un solvant organique partiellement mélangeable à l"eau, un agent tensio-actif non ionique et du lysozyme dans des conditions de pH neutres à alcalines pour obtenir un extrait contenant ces enzymes. Le procédé peut être intégré à un procédé d"isolation séquentielle de la déhydrogénase de glucose (6)-phosphate, de la glucokinase, de la kinase de pyruvate et de la fructokinase, présentes dans l"extrait d"enzyme, en mettant séquentiellement en contact l"extrait dans un tampon avec une pluralité d"adsorbants de chromatographie par affinité, chacun desquels est un colorant liant une protéine et liés sur une matrice de support et sélectifs par rapport à ces enzymes, de sorte que la déhydrogénase de glucose (6)-phosphate et la glucokinase sont isolées de l"extrait par l"adsorbant sélectif correspondant, cette étape étant suivie par l"isolation de la kinase de pyruvate et de la fructokinase par les adsorbants sélectifs correspondants, ensuite par une élution permettant d"extraire chaque enzyme de l"adsorbant sélectif correspondant parmi ladite pluralité d"adsorbants, avec une purification éventuelle de chaque enzyme.
Designated States:
Publication Language: English (EN)
Filing Language: English (EN)