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1. (KR1020080031684) SELF-BUFFERING PROTEIN FORMULATIONS
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명 세 서
자가 - 완충성 단백질 제형{SELF-BUFFERING PROTEIN FORMULATIONS}

  관련 출원에 대한 참조
 본 출원은 본원에 전문이 참조 인용된 문헌인 2005 년 6 월 14 일자로 제출된 미국 가출원 일련번호 제 60/690,582 호의 일부 계속 출원이자, 이를 우선권으로 청구하는 출원이다.

기 술 분 야
 본 발명은 단백질, 구체적으로 약학적 단백질의 제형에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 자가 - 완충성 생물약학적 단백질 조성물 및 이 조성물을 디자인, 제조 및 사용하는 방법에 관한 것이다. 본 발명은 또한 수의학용 및/또는 인체 의학용 약학적 단백질 조성물에 관한 것이다.

발명이 속하는 기술 및 그 분야의 종래기술
 약제의 제조 및 제형화 과정에 대한 대다수 양태들은 pH 민감성이다. 약제 완제품의 적당한 pH 유지가 이것의 안정성, 약효 및 저장 수명에 중요한 바, pH 는 안전성과 유효성은 물론이고 허용성을 가지도록 투여용 제형을 디자인하는데 있어서 중요한 고려사항이다.

 pH 유지를 위해서는, 약학적 공정 및 제형화에서 1 종 이상의 완충제를 사용한다. 다양한 완충제가 약학적 용도로 이용가능하다. 특정 적용용도에 대한 완충제 또는 완충제들은 목적 pH 에서 효과를 나타내어야 하며, 또한 필요한 오랜 기간 동안 목적하는 pH 를 유지하도록 충분한 완충 용량(또는 '완충능'이라고도 함)을 제공하여야 한다. 약학적 조성물에서 양호한 완충제란 수많은 다른 요건들 또한 충족시켜야 한다. 적당히 가용성이어야 하며, 금속 이온과의 유해 복합체를 형성하거나 독성이거나, 또는 과도한 침투, 가용화 또는 멤브레인이나 기타 표면상에 흡착하지 않아야 한다. 유용성 또는 효력을 감소시키는 방식으로는 조성물내 다른 성분들과 상호작용하지 않아야 한다. 제형화 및 제품의 보관 중에 노출되는 조건 범위에서 pH 를 유지하는 것이 안정적 및 효과적이어야 한다. 산화반응, 또는 완충 작용을 제공하는 조성물의 프로세싱 중에 일어나는 것과 같이, 그 환경에서 발생하는 기타 반응들에 의해 악영향을 받지 않아야 한다. 최종 제품에 수반되거나 내포되는 경우, 완충제는 투여에 안전하고, 제품 저장 기간 전반에 걸쳐 조성물내 다른 성분들과 상용가능하며 최종 사용자에게 투여시 허용가능하여야 한다.

 일반용 완충제는 많이 있지만, 생물학적 적용에 적합한 것은 매우 한정된 수이며, 그중 소수만이 약학적 공정 및 제형화에 허용가능하다. 그 결과, pH 유지에 효과적일 뿐 아니라, 해당 약학적 공정, 제형화 또는 제품에 요구되는 기타 요건 모두를 충족시키는 완충제를 찾고자 하는 도전이 계속되고 있다.

 약학적 용도에 적합한 완충제를 찾으려는 도전은 약학적 단백질에 특히 중요할 수 있다. 단백질의 형태 및 활성은 결정적으로 pH 에 따라 좌우된다. 단백질은 통상 소 분자 약물에 미치는 것보다 더 많이 그 효력에 유해하게 작용하는 다양한 pH 민감성 반응에 의해 영향을 받기 쉽다. 예로서, 몇몇 두드러진 일례만 언급하면, 아스파라긴 및 글루타민의 측쇄 아미드는 저 pH(4.0 미만) 뿐 아니라, 중성 pH 또는 고 pH(6.0 초과)에서도 탈아미드화된다. 아스파르트산 잔기는 저 pH 에서 인접 펩티드 결합의 가수분해를 촉진한다. 디술피드 결합의 안정성 및 성질은 특히 티올의 존재하에서 pH 에 따라 크게 좌우된다. 단백질의 가용성, 응결, 응집, 침전 및 섬유화는 결정적으로 pH 에 따라 좌우된다. 일부 약학적 제형에 중요한 결정 습성 또한 결정적으로 pH 에 따라 좌우된다. pH 는 대다수 약학적 펩티드 및 단백질의 표면 흡착에 있어서도 중요한 요인이다.

 1 종 이상의 다른 성분들을 불활성화 및/또는 분해하는 반응을 촉매하는 완충제 또한 약학적 제형에 사용할 수 없다. 약학용 완충제는 적절한 pH 를 유지하는데 요구되는 완충 용량을 가지는 것뿐 아니라, 그 투여가 실험대상의 생리학적 pH 를 유해 교란시킬 정도로 강력한 완충 능력을 발휘하지 않는 것이어야 한다. 약학적 제형용 완충제는 또한 통상적으로 복합체 제형화 공정과도 상용가능하여야 한다. 예를 들면, 동결건조 도중 및 재구성된 동결건조 제품에서 pH 를 유지하기 위해 아세테이트 및 이미다졸 같이 승화 또는 증발하는 완충제는 일반적으로 그 신뢰도가 떨어진다. 인산 나트륨과 같이, 단백질 비결정상으로부터 결정화되는 기타 완충제는 동결을 요하는 공정에서 pH 를 유지하는데 신뢰할 수 없다.

 약제 최종 - 제품에서 pH 를 유지하는데 사용되는 완충액은 pH 유지에 효과적일 뿐아니라 실험대상 투여시 안전하고 허용가능한 것이어야 한다. 예를 들어, 저 또는 고 농도의 시트레이트 및 고 농도의 아세테이트와 같은 그외 다른 몇몇 유용한 완충액들은 비경구 투여시 통증을 수반하여 바람직하지 않다.

 아세테이트, 숙시네이트, 시트레이트, 히스티딘(이미다졸), 포스페이트 및 트리스 같은 일부 완충액들은 약학적 단백질의 제형화에 유용한 것으로 밝혀진 바 있다. 이들은 모두 원치않는 한계와 단점들을 가지고 있다. 이들은 모두 제형화 공정을 복잡하게 하거나, 다른 성분, 안정성, 저장 - 수명 및 최종 사용자에 대한 허용성에 악영향을 미칠 위험성을 내포하고 있는 제형내 부가적 성분이 되는 선천적 단점을 가지고 있다.

 그러므로, 약제의 제조 및 제형화와 약학적 조성물, 특히 생물약학적 단백질의 제조 및 제형화와 생물약학적 단백질 조성물에서 pH 를 유지하는 부가적 개선 방법에 대한 요구가 있어 왔다.

  발명의 요약
 따라서, 본 발명의 다양한 목적 및 양태 중에서 특정의 바람직한 실시형태는 목적 pH 유지를 위해 부가적 완충제를 필요로 하지 않고, 단백질 자체에 의해 완충되며, 단백질이 실질적으로 유일한 완충제인 (즉, 기타 성분들은 존재하더라도 실질적으로 제형에서 완충제로 작용하지 않는) 단백질을 포함하는 단백질 제형, 특히 약학적 단백질을 포함하는 약학적으로 허용가능한 제형을 제공하는 것이다.

 이와 관련하여, 본 발명의 다양한 목적 및 양태 중에서 특정의 바람직한 실시형태는 제형화된 단백질의 농도가 목적하는 완충 용량을 제공하는 것을 특징으로 하는 단백질, 특히 약학적 단백질의 자가 - 완충성 제형을 제공하는 것이다.

 추가로, 본 발명의 다양한 목적 및 양태 중에서 특정의 특히 바람직한 실시형태는 전체 염 농도가 150 mM 미만인 자가 - 완충성 단백질 제형, 특히 약학적 단백질 제형을 제공하는 것이다.

 추가로, 본 발명의 다양한 목적 및 양태 중에서 특정의 특히 바람직한 실시형태는 1 종 이상의 폴리올 및/또는 1 종 이상의 계면활성제를 추가 포함하는 자가 - 완충성 단백질 제형, 특히 약학적 단백질 제형을 제공하는 것이다.

 또한 추가로, 본 발명의 다양한 목적 및 양태 중에서 특정의 특히 바람직한 실시형태는 전체 염 농도가 150 mM 미만인 단백질, 특히 약학적 단백질을 포함하고, 약학적으로 허용가능한 염, 삼투 균형 제제 (등장성 제제) ; 계면활성제, 폴리올, 산화 방지제 ; 항생제 ; 항균제 ; 팽화제 ; 동결 건조보호제 ; 소포제 ; 킬레이트제 ; 보존제 ; 착색제 ; 및 진통제를 포함하되 이들로만 한정되지 않는 부형제를 1 종 이상 추가 포함하는 자가 - 완충성 제형을 제공하는 것이다.

 부가적으로, 본 발명의 다양한 목적 및 양태 중에서 특정의 바람직한 실시형태는 단백질 외에, 1 종 이상의 다른 약학적 활성 제제를 포함하는 자가 - 완충성 단백질 제형, 특히 약학적 단백질 제형을 제공하는 것이다.

 본 발명의 다양한 부가적 양태 및 실시형태는 하기 번호로 제시된 내용에 예시적으로 기술되어 있다. 본 발명은 하기에 제시된 각각의 항목에 대해 개별적으로 및/또한 조합의 형태로 함께 참조를 위해 기술된다. 본 출원인은 구체적으로 상기한 조합에 의거하여 청구항들을 주장할 권리를 가지고 있다.

 1. 하기 청구항들 중 어느 한 항에 있어서, 인가된 법적 국내외 기관, 바람직하게는 유럽 의약품 평가 기구 (European Agency for the evaluation of Medical Products), 일본 보건 노동 복지부 (Japan's Ministry of Health, Labor and Welfare), 중국 국가 약품 감독관리국 (China's State Drug Administration), 미국 식품 의약 감독기구 (United States food and Drug Administration) 또는 그 산하 기관(들), 특히 바람직하게는 미국 식품 의약 감독기구 또는 그 산하 기관(들)에 의해 약학적 용도로 승인된 바 있는 조성물.

 2. 상기 또는 하기 청구항들 중 어느 한 항에 있어서, 인체용 약제 제조에 적용가능한 우수 제조 절차에 따라 제조된 조성물.

 3. 상기 또는 하기 청구항들 중 어느 한 항에 있어서, pH 유닛 당 단위 용적당 완충 용량이 pH 5.0 내지 4.0 또는 pH 5.0 내지 5.5 범위의 순수한 물 (pure water) 중에 아세트산 나트륨을 적어도 대략 2.0 또는 3.0 또는 4.0 또는 5.0 또는 6.50 또는 8.00 또는 10.0 또는 15.0 또는 20.0 또는 30.0 또는 40.0 또는 50.0 또는 75.0 또는 100 또는 125 또는 150 또는 200 또는 250 또는 300 또는 350 또는 400 또는 500 mM, 바람직하게는 하기 실시예 1 및 2 에 기술된 방법에 따라 측정된 수치, 특히 바람직하게는 적어도 2.0 mM, 각별하게 특히 바람직하게는 적어도 3.0 mM, 매우 각별하게 특히 바람직하게는 적어도 4.0 mM 또는 적어도 5.0 mM, 각별하게 특히 바람직하게는 적어도 7.5 mM, 특히 바람직하게는 적어도 10 mM, 바람직하게는 적어도 20 mM 포함하는 완충액의 완충 용량인 단백질을 포함하는 조성물.

 4. 상기 또는 하기 청구항들 중 어느 한 항에 있어서, 단백질의 완충 용량을 배제한 조성물의 pH 유닛 당 단위 용적당 완충 용량이 pH 4.0 내지 5.0 또는 pH 5.0 내지 5.5 범위의 순수한 물 중에 아세트산 나트륨을 1.0 또는 1.5 또는 2.0 또는 3.0 또는 4.0 또는 5.0 mM 이하, 바람직하게는 하기 실시예 1 및 2 에 기술된 방법에 따라 측정된 수치, 특히 바람직하게는 1.0 mM 미만, 매우 각별하게 특히 바람직하게는 2.0 mM 미만, 각별하게 특히 바람직하게는 2.5 mM 미만, 특히 바람직하게는 3.0 mM 미만, 바람직하게는 5.0 mM 미만 포함하는 완충액의 완충 용량과 동등 또는 그 미만인 조성물.

 5. 상기 또는 하기 청구항들 중 어느 한 항에 있어서, 조성물의 pH ± 1 pH 의 pH 범위에서, 단백질 완충 용량이 적어도 대략 1.00 또는 1.50 또는 1.63 또는 2.00 또는 3.00 또는 4.00 또는 5.00 또는 6.50 또는 8.00 또는 10.0 또는 15.0 또는 20.0 또는 30.0 또는 40.0 또는 50.0 또는 75.0 또는 100 또는 125 또는 150 또는 200 또는 250 또는 300 또는 350 또는 400 또는 500 또는 700 또는 1,000, 바람직하게는 적어도 대략 1.00, 특히 바람직하게는 1.50, 각별하게 특히 바람직하게는 1.63, 매우 각별하게 특히 바람직하게는 2.00, 매우 고도로 각별하게 특히 바람직하게는 3.00, 매우 각별하게 특히 바람직하게는 5.0, 각별하게 특히 바람직하게는 10.0, 특히 바람직하게는 20.0 mEq/ℓ/pH 유닛인 단백질을 포함하는 조성물.

 6. 상기 또는 하기 청구항들 중 어느 한 항에 있어서, 조성물의 pH ± 1 pH 의 pH 범위에서, 단백질을 배제한 조성물의 pH 유닛 당 단위 용적당 완충 용량이 pH 5.0 내지 4.0 또는 pH 5.0 내지 5.5 범위의 순수한 물 중에 아세트산 나트륨을 0.50 또는 1.00 또는 1.50 또는 2.00 또는 3.00 또는 4.00 또는 5.00 또는 6.50 또는 8.00 또는 10.0 또는 20.0 또는 25.0 mM, 특히 바람직하게는 하기 실시예 1 및 2 에 기술된 방법에 따라 측정된 수치로 포함하는 완충액의 완충 용량과 동등 또는 그 미만인 단백질을 포함하는 조성물.

 7. 상기 또는 하기 청구항들 중 어느 한 항에 있어서, 목적 pH ± 1 pH 의 pH 범위에서, 단백질이 조성물 완충 용량의 적어도 대략 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 99.5 %, 바람직하게는 조성물 완충 용량의 적어도 대략 75 %, 특히 바람직하게는 적어도 대략 85 %, 각별하게 특히 바람직하게는 적어도 대략 90 %, 매우 각별하게 특히 바람직하게는 적어도 대략 95 %, 매우 고도로 각별하게 특히 바람직하게는 적어도 대략 99 % 를 제공하는 것인 조성물.

 8. 상기 또는 하기 청구항들 중 어느 한 항에 있어서, 단백질 농도가 대략 20 내지 400, 또는 20 내지 300, 또는 20 내지 250, 또는 20 내지 200, 또는 20 내지 150 mg/㎖, 바람직하게는 대략 20 내지 400 mg/㎖, 특히 바람직하게는 대략 20 내지 250, 각별하게 특히는 대략 20 내지 150 mg/㎖ 인 조성물.
 9. 상기 또는 하기 청구항들 중 어느 한 항에 있어서, 단백질의 완충 작용에 의해 유지된 pH 가 대략 3.5 내지 8.0, 또는 4.0 내지 6.0, 또는 4.0 내지 5.5, 또는 4.0 내지 5.0, 바람직하게는 대략 3.5 내지 8.0, 각별하게 특히 바람직하게는 대략 4.0 내지 5.5 인 조성물.

 10. 상기 또는 하기 청구항들 중 어느 한 항에 있어서, 염 농도가 150 mM 또는 125 mM 또는 100 mM 또는 75 mM 또는 50 mM 또는 25 mM, 바람직하게는 150 mM, 특히 바람직하게는 125 mM, 각별하게 바람직하게는 100 mM, 매우 특히 바람직하게는 75 mM, 특히 바람직하게는 50 mM, 바람직하게는 25 mM 미만인 조성물.

 11. 상기 또는 하기 청구항들 중 어느 한 항에 있어서, 1 종 이상의 약학적으로 허용가능한 염 ; 폴리올 ; 계면활성제 ; 삼투성 평형 제제 ; 등장성 제제 ; 항-산화제(산화 방지제) ; 항생물질(항생제) ; 항진균제(항균제) ; 부피 조정제(팽화제) ; 동결건조보호제 ; 항-발포제(소포제) ; 킬레이트화제 ; 보존제 ; 착색제 ; 진통제 ; 또는 부가적 약학적 제제를 추가로 포함하는 조성물.

 12. 상기 또는 하기 청구항들 중 어느 한 항에 있어서, 소정량의 저장성, 등장성 또는 고장성, 바람직하게는 대략 등장성, 특히 바람직하게는 등장성인 1 종 이상의 약학적으로 허용가능한 폴리올, 특히 바람직하게는 소르비톨, 만니톨, 수크로스, 트리할로스 및 글리세롤중 1 종 이상, 특히 각별하게 바람직하게는 대략 5 % 소르비톨, 5 % 만니톨, 9 % 수크로스, 9 % 트리할로스 또는 2.5 % 글리세롤, 이와 관련하여 매우 각별하게는 5 % 소르비톨, 5 % 만니톨, 9 % 수크로스, 9 % 트리할로스 또는 2.5 % 글리세롤을 포함하는 조성물.

 13. 상기 또는 하기 청구항들 중 어느 한 항에 있어서, 계면활성제, 바람직하게는 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, 기타 소르비탄의 지방산 에스테르류, 폴리에톨실레이트 및 폴록사머 188, 특히 바람직하게는 폴리소르베이트 20 또는 폴리소르베이트 80, 바람직하게는 대략 0.001 내지 0.1 % 폴리소르베이트 20 또는 폴리소르베이트 80, 매우 바람직하게는 대략 0.002 내지 0.02 % 폴리소르베이트 20 또는 폴리소르베이트 80, 각별하게 0.002 내지 0.02 % 폴리소르베이트 20 또는 폴리소르베이트 80 을 추가 포함하는 조성물.

 14. 상기 또는 하기 청구항들 중 어느 한 항에 있어서, 단백질이 약학적 제제이고, 조성물이 비 - 인체 또는 인체 실험대상의 치료에 적합한 멸균 제형인 조성물.

 15. 상기 또는 하기 청구항들 중 어느 한 항에 있어서, 단백질이 질환 치료에 효과적인 약학적 제제이고, 조성물이 치료하고자 하는 실험대상에게 투여하기 적합한 멸균 제형인 조성물.

 16. 상기 또는 하기 청구항들 중 어느 한 항에 있어서, 단백질이 실험대상 투여 후 상당히 유해한 항원성 반응을 유발시키지 않는 것인 조성물.

 17. 상기 또는 하기 청구항들 중 어느 한 항에 있어서, 단백질이 실험대상 투여 후 상당히 유해한 면역 반응을 유발시키지 않는 것인 조성물.

 18. 상기 또는 하기 청구항들 중 어느 한 항에 있어서, 단백질이 인체 단백질인 조성물.

 19. 상기 또는 하기 청구항들 중 어느 한 항에 있어서, 단백질이 인체화된 단백질인 조성물.

 20. 상기 또는 하기 청구항들 중 어느 한 항에 있어서, 단백질이 항체, 바람직하게는 IgA, IgD, IgE, IgG 또는 IgM 항체, 특히 바람직하게는 IgG 항체, 매우 특히 바람직하게는 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 항체, 각별하게는 IgG2 항체인 조성물.

 21. 상기 또는 하기 청구항들 중 어느 한 항에 있어서, 단백질이 Fab 단편, fab 2 단편, Fab 3 단편, fc 단편, scFv 단편, 비스-scFv(들) 단편, 미니바디(minibody), 디아바디(diabody), 트리아바디(triabody), 테트라바디(tetrabody), VhH 도메인, V-NAR 도메인 V H 도메인, V L 도메인, 카멜 Ig, Ig NAR 또는 펩티바디 또는 이들중 어느 하나의 변이체, 유도체 또는 변형체를 포함하는 것인 조성물.

 22. 상기 또는 하기 청구항들 중 어느 한 항에 있어서, 단백질이 Fc 단편 또는 이것의 일부분, 또는 Fc 단편이나 이것의 일부분의 유도체 또는 변이체인 조성물.

 23. 상기 또는 하기 청구항들 중 어느 한 항에 있어서, 단백질이 한 쌍의 동원 결합 성분 중 제 1 결합 성분을 포함하고, 상기 제 1 결합 성분이 제 2 성분에 특이적으로 결합하는 것인 조성물.


 24. 상기 또는 하기 청구항들 중 어느 한 항에 있어서, 단백질이 (a) Fc 단편 또는 이것의 일부분, 또는 Fc 단편이나 이것의 일부분의 유도체 또는 변이체, 및 (b) 한 쌍의 동원 결합 성분 중 제 1 결합 성분을 포함하는 것인 조성물.

 25. 제 1 항, 제 5 항, 제 7 항, 제 9 항, 제 11 항, 제 13 항 또는 제 14 항 중 어느 한 항에 있어서, 단백질이 1 종 이상의 CD 단백질, HER 수용체계 단백질, 세포 부착 단백질, 성장 인자, 신경 성장 인자, 섬유아세포 성장 인자, 형질전환 성장 인자(TGF), 인슐린 - 유사 성장 인자, 골유도성 인자, 인슐린 및 인슐련 - 관련 단백질, 응고 및 응고 - 관련 단백질, 콜로니 자극 인자(CSFs), 기타 혈액 및 혈청 단백질 혈액군 항원 ; 수용체, 수용체 - 결합 단백질, 성장 호르몬 수용체, T - 세포 수용체 ; 신경영양성 인자, 뉴로트로핀, 릴랙신, 인터페론, 인터류킨, 바이러스성 항원, 리포단백질, 인테그린, 류마티스양 인자, 면역독소, 표면 멤브레인 단백질, 운반 단백질, 귀환 수용체, 어드레신, 조절성 단백질 및 면역접합체(immonoadhesins)에 특이적으로 결합하는 단백질로 구성된 군중에서 선택한 것인 조성물.

 26. 상기 또는 하기 청구항들 중 어느 한 항에 있어서, 단백질이 OPGL 특이적 결합 단백질, 미오스태틴 특이적 결합 단백질, IL - 4 수용체 특이적 결합 단백질, IL1 - R1 특이적 결합 단백질, Ang2 특이적 결합 단백질, NGF - 특이적 결합 단백질, CD22 특이적 결합 단백질, IGF - 1 수용체 특이적 결합 단백질, B7RP - 1 특이적 결합 단백질, IFN 감마 특이적 결합 단백질, TALL - 1 특이적 결합 단백질, 줄기 세포 인자, Flt - 3 리간드 및 IL - 17 수용체로 구성된 군중에서 선택한 것인 조성물.

 27. 상기 또는 하기 청구항들 중 어느 한 항에 있어서, 단백질이 다음 물질중 1 종 이상에 특이적으로 결합하는 단백질로 구성된 군중에서 선택한 것인 조성물 : CD3, CD4, CD8, CD19, CD20, CD34; HER2, HER3, HER4, EGF 수용체 ; LFA - 1, Mol, p150, 95, VLA - 4, ICAM - 1, VCAM, 알파 v/베타 3 인테그린 ; 혈관 내피 성장 인자("VEGF") ; 성장 호르몬, 갑상선 자극 호르몬, 여포 자극 호르몬, 황체형성 호르몬, 성장 호르몬 방출 인자, 부갑상선 호르몬, 뮬러 - 억제 물질, 인체 대식세포 염증 단백질(MIP-1-알파), 에리스로포이에틴(erythropoietin; EPO), NGF-베타, 혈소판 - 유래 성장 인자(PDGR), aFGF, bFGF, 표피 성장 인자(EGF), TGF - 알파, TGF - 베타1, TGF - 베타2, TGF - 베타3, TGF - 베타4, TGF - 베타5, IGF - I, IGF - II, des(1-3)-IGF-I(뇌 IGF-I), 인슐린, 인슐린 A-쇄, 인슐린 B-쇄, 프로인슐린, 인슐린 - 유사 성장 인자 결합 단백질 ; 기타 중에서 인자 VIII, 조직 인자, 본 빌레브란트 인자, 단백질 C, 알파 - 1 - 안티트립신, 플라스미노겐 활성인자, 예 유로키나제 및 조직 플라이스노겐 활성인자("t-PA"), 봄바진, 트롬빈 및 트롬보포이에틴 ; M-CSF, GM-CSF, G-CSF, 알부민, IgE, flk2/flt3 수용체, 비만(OB) 인자, 골 - 유래 신경영양성 인자(BDNF), NT-3, NT-4, NT-5, NT-6 ; 릴랙신 A-쇄, 릴랙신 B-쇄, 프로릴랙신 ; 인터페론 -알파, -베타 및 -감마 ; IL-1 내지 IL-10 ; AIDS 외피 바이러스 항원 ; 칼시토닌, 글루카곤, 심방성 나트륨 이뇨 인자, 폐 계면활성제, 종양 괴사 인자 - 알파 및 -베타, 엔케팔리나제, RANTES, 마우스 고나도트로핀 - 결합 펩티드, Dnase, 인히빈 및 액티빈; 단백질 A 또는 D, 골 형태형성 단백질(BMP), 슈퍼옥시드 디스뮤타제, 붕괴 촉진 인자(DAF).

 28. 상기 또는 하기 청구항들 중 어느 한 항에 있어서, 단백질이 다음 물질들로 구성된 군중에서 선택한 것인 조성물 : Actimmune (인터페론-감마-lb), Activase (알테플라제; Alteplase), Aldurazme (라로니다제; Laronidase), Amevive (알레파셉트; Alefacept), Avonex (인터페론 베타-1a), BeneFIX (노나코그 알파; Nonacog alfa), Beromun (타소네르민; Tasonermin), Beatseron (인터페론-베타-lb), BEXXAR (토시투모맵; Tositumomab), Tev-Tropin (소마트로핀; Somatropin), Bioclate 또는 RECOMBINATE (재조합; Recombinant), CEREZME (이미글루세라제; Imiglucerase), ENBREL (에타네르셉트; Etanercept), Eprex (에포에틴 알파; epoetin alpha), EPOGEN/Procit (에포에틴 알파), FABRAZYME (아갈시다제 베타; Agalsidase beta), Fasturtec/Elitek ELITEK (라스부리카제; Rasburicase), FORTEO (테리파라티드; Teriparatide), GENOTROPIN (소마트로핀; Somatropin), GlucaGen (글루카곤; Glucagon), Glucagon (글루카곤, rDNA 기원), GONAL-F (폴리트로핀 알파; follitropin alfa), KOGENATE FS (옥토코그 알파; Octocog alfa), HERCEPTIN (트라스투주맵; Trastuzumab), HUMATROPE (소마트로핀; SOMATROPIN), HUMIRA (아달리뮤맵; Adalimumab), 용액중 인슐린, INFERGEM� (인터페론 알파콘-1), KINERET� (아나킨라; anakinra), Kogenate FS (항우혈병 인자; Antihemophilic Factor), LEUKIN (사르그라모스팀; SARGRAMOSTIM 재조합 인체 과립세포-대식세포 콜로니 자극 인자 (rhuGM-CSF)), CAMPATH (알렘투주맵; Alemtuzumab), RITUXAN� (리툭시맵; Rituximab), TNKase(테넥테플라제; Tenecteplase), MYLOTARG(겜투주맵 옥조가미신; gemtuzumab ozogamicin), NATRECOR (네시리티드; nesiritide), ARANESP (다르베포에틴 알파; darbepoetin alfa), NEULASTA (페그필그라스팀; pegfilgrastim), NEUMEGA (오프렐베킨; oprelvekin), NEUPOGEN (필그라스팀; Filgrastim), NORDITROPIN CARTRIDGES (소마트로핀), NOVOSEVEN (엡타코그 알파; Eptacog alfa), NUTROPIN AQ(소마트로핀), Oncaspar(페가스파르가제), ONTAK(데닐류킨 디프티톡스; denileukin diftitox), ORTHOCLONE OKT(뮤로모나브-CD3; muromonab-CD3), OVIDREL (코리오고나도트로핀 알파; choriogonadotropin alfa), PEGASYS (페그인터페론 알파-2a; peginterferon alfa-2a), PROLEUKIN (알데스류킨; Aldesleukin), PULMOZYME (도르나제 알파; dornase alfa), Retavase (렙테플라제; Reteplase), REBETOL� (리바비린; Ribavirin) 및 INTRON� A(인터페론 알파-2b) 함유 BETRON 병용 치료제, REBIF (인터페론 베타-la), REFACTO (항우혈병 인자), REFLUDAN (레피루딘; lepirudin), REMICADE (인플릭시맵; infliximab), REOPRO (아브식시맵; abciximab), ROFERON�-A (인터페론 알파-2a), SIMULECT (바실릭시맵; baasiliximab), SOMAVERT (페기비소만트; Pegivisomant), SYNAGIS� (팔리비주맵; palivizumab), Stemben (안세스팀; Ancestim, 줄기 세포 인자), THYROGEN, INTRON� A (인터페론 알파-2b), PEGINTRON� (페그인터페론 알파-2b; Peginterferon alfa-2b), XIGRIS� (활성화된 드로트레코긴 알파; Drotrecogin alfa), XOLAIR� (오말리주맵; Omalizumab), ZENAPAX� (다클리주맵; daclizumab), 및 ZEVALIN� (이브리투모맵 티욱세탄; Ibritumomab Tiuxetan).

 29. 상기 또는 하기 청구항들 중 어느 한 항에 있어서, 단백질이 Ab-hCD22 또는 이것의 단편, 또는 Ab-hCD22 나 이것의 단편의 변이체, 유도체 또는 변형체 ; Ab-hIL4R 또는 이것의 단편, 또는 Ab-hIL4R 이나 이것의 단편의 변이체, 유도체 또는 변형체; Ab-hOPGL 또는 이것의 단편, 또는 Ab-hOPGL 이나 이것의 단편의 변이체, 유도체 또는 변형체 ; 또는 Ab-hB7RP1 또는 이것의 단편, 또는 Ab-hB7RP1 이나 이것의 단편의 변이체, 유도체 또는 변형체인 조성물.

 30. 상기 또는 하기 청구항들 중 어느 한 항에 있어서, 단백질이 Ab-hCD22 또는 Ab-hIL4R 또는 Ab-hOPGL 또는 Ab-hB7RP1 인 조성물.

 31. 상기 또는 하기 청구항들 중 어느 한 항에 있어서, pH 유닛 당 단위 용적당 완충 용량이 pH 4.0 내지 5.0 또는 pH 5.0 내지 5.5 범위의 순수한 물 중에 적어도 4.0 mM 아세트산 나트륨, 바람직하게는 하기 실시예 1 및 2 에 기술된 방법에 따라 측정된 수치를 포함하는 완충 용량을 가진 단백질 및 용매를 포함하며, 단백질을 배제한 조성물의 단위 용적당 완충 용량은 바람직하게는 동일 방식으로 측정된 동일 범위의 수중에 2.0 mM 아세트산 나트륨의 완충 용량과 동등 또는 그 미만인 조성물.

 32. 상기 또는 하기 청구항들 중 어느 한 항에 있어서, 단백질 및 용매를 포함하며, 조성물의 pH 에서 단백질의 완충 용량이 ± 1 pH 유닛의 조성물 pH 변화에 대해 적어도 1.63 mEq/ℓ이고, 단백질을 배제한 조성물의 완충 용량이 ±1 pH 단위의 pH 변화에 대해 조성물의 pH 에서 0.81 mEq/ℓ와 동등 또는 그 미만인 조성물.

 33. 재구성시 상기 또는 하기 청구항들 중 어느 한 항에 따른 조성물을 제공하는 동결건조물.

 34. 1 종 이상의 용기에 상기 또는 하기 청구항들 중 어느 한 항에 따른 조성물 또는 동결건조물과 사용 설명서를 포함하는 키트.

 35. 반대 이온을 사용하여 잔여 완충액을 제거하는 것을 포함하여, 상기 또는 하기 청구항들 중 어느 한 항에 따른 조성물 또는 동결건조물을 제조하는 방법.

 36. 반대 이온의 존재하에 크로마토그래피, 투석 및/또는 접선 흐름 여과 방식 중 하나 이상을 이용하여 잔여 완충액을 제거하는 것을 포함하여, 상기 또는 하기 청구항들 중 어느 한 항에 따른 조성물 또는 동결건조물을 제조하는 방법.

 37. 접선 흐름 여과 방식을 이용하여 잔여 완충액을 제거하는 것을 포함하여, 상기 또는 하기 청구항들 중 어느 한 항에 따른 조성물 또는 동결건조물을 제조하는 방법.

 38. 제제의 pH 이하의 pH 에서 용액에 대해 투석하고, 필요에 따라서는 이후 묽은 산 또는 묽은 염기를 첨가하여 pH 를 보정하는 단계를 포함하여, 상기 또는 하기 청구항들 중 어느 한 항에 따른 조성물 또는 동결건조물을 제조하는 방법.

 39. 재구성된 동결건조물을 포함하여, 상기 또는 하기 청구항들 중 어느 한 항에 따른 조성물을 치료 유효량 및 유효 경로로 실험대상에게 투여하는 것을 포함하여 실험대상을 치료하는 방법.

도면의 간단한 설명
 도 1 은 pH 5.0 내지 4.0 의 범위에서 아세트산 나트륨 표준 완충액에 대한 농도 함수로서 완충 용량 및 적정 데이타를 도시한 것이다. 패널 A 는 실시예 1에 기술된 바와 같이, 여러 다른 농도의 아세트산 나트륨 표준 완충액에 대한 산 적정시 pH 변화를 도시한 그래프이다. pH 가 세로축에 표시되어 있으며, 각 용액에 첨가된 산의 양이 가로축에 용액 ml 당 첨가된 HCl 의 마이크로당량(μEq/ml)으로 표시되어 있다. 각 데이타세트에 대해 선형의 최소 제곱 추세선이 도시되어 있으며, 아세테이트 농도는 삽입그림에 표시되어 있다. 패널 B 는 실시예 1 에 기술된 바와 같이, 패널 A 에 도시된 적정 데이타로부터 결정된 산성 pH 범위에서의 아세테이트 완충액의 완충 용량을 도시한 그래프이다. 완충 용량은 세로축에 pH 변화 유닛 당 완충 용액 ml 당 산의 마이크로당량(μEq/ml-pH)으로 표시되어 있다. 가로축에는 아세테이트 농도가 mM 로 표시되어 있다.

 도 2 는 pH 5.0 내지 5.5 의 범위에서 아세트산 나트륨 표준 완충액에 대한 농도 함수로서 완충 용량 및 적정 데이타를 도시한 것이다. 패널 A 는 실시예 2 에 기술된 바와 같이, 여러 다른 농도의 아세트산 나트륨 표준 완충액에 대한 염기 적정시 pH 변화를 도시한 그래프이다. pH 가 세로축에 표시되어 있으며, 각 용액에 첨가된 염기의 양이 가로축에 용액 ml 당 첨가된 NaOH 의 마이크로당량(μEq/ml)으로 표시되어 있다. 각 데이타세트에 대해 선형의 최소 제곱 추세선이 도시되어 있으며, 아세테이트 농도는 삽입그림에 표시되어 있다. 패널 B 는 실시예 2 에 기술된 바와 같이, 패널 A 에 도시된 적정 데이타로부터 결정된 염기성 pH 범위에서의 아세테이트 완충액의 완충 용량을 도시한 그래프이다. 완충 용량은 세로축에 pH 변화 유닛 당 완충 용액 ml 당 염기의 마이크로당량(μEq/ml-pH)으로 표시되어 있다. 가로축에는 아세테이트 농도가 mM 로 표시되어 있다.

 도 3 은 실시예 3 에 기술된 바와 같이 아세테이트 완충 표준액중 아세테이트 농도의 측정을 도시한 것이다. 그래프는 측정에 대한 표준 곡선을 나타내는 것으로 세로축에는 피크 면적이 표시되어 있고, 가로 축에는 아세테이트 농도가 표시되어 있다. 완충 용량의 실험적 측정에 사용된 용액내 아세테이트의 명목상 양과 계측량이 그래프 아래에 표로 제시되어 있다.

 도 4 는 실시예 4 에 기술된 바와 같이, pH 5.0 내지 4.0 의 범위에서, 여러 다른 농도의 Ab-hOPGL 에 대한 산 적정시 pH 변화를 도시한 그래프이다. pH 가 세로축에 표시되어 있으며, 용액에 첨가된 산의 양이 가로축에 완충 용액 ml 당 첨가된 HCl 의 마이크로당량(μEq/ml)으로 표시되어 있다. 각 데이타세트에 대해 선형의 최소 제곱 추세선이 도시되어 있으며, Ab-hOPGL 농도는 삽입그림에 표시되어 있다.

 도 5 는 실시예 5 에 기술된 바와 같이, pH 5.0 내지 6.0 의 범위에서, 여러 다른 농도의 Ab-hOPGL 에 대한 염기 적정시 pH 변화를 도시한 그래프이다. pH 가 세로축에 표시되어 있으며, 용액에 첨가된 염기의 양이 가로축에 완충 용액 ml 당 첨가된 NaOH 의 마이크로당량(μEq/ml)으로 표시되어 있다. 각 데이타세트에 대해 선형의 최소 제곱 추세선이 도시되어 있으며, Ab-hOPGL 농도는 삽입그림에 표시되어 있다.

 도 6 은 완충 용량을 측정하는데 사용된 Ab-hOPGL 용액 중 잔여 아세테이트 레벨을 나타낸 것이다. 그래프는 실시예 6 에 기술된 바와 같이, 아세테이트 측정에 사용된 표준 곡선을 나타낸다. 명목상 농도와 실험적으로 측정된 용액내 아세테이트 농도가 그래프 아래에 표로 제시되어 있다.

 도 7 은 pH 범위 5.0 내지 4.0 에서 Ab-hOPGL ± 잔여 아세테이트의 완충 용량을 도시한 그래프이다. 데이타는 실시예 7 에 기술된 바와 같이 수득하였다. 상단 라인은 잔여 아세테이트를 포함한 Ab-hOPGL 완충 용량을 나타낸 것이고, 하단 라인은 잔여 아세테이트에 대해 보정된 Ab-hOPGL 완충 용량을 나타낸 것이다. 세로축에는 완충 용량이 pH 유닛 당 Ab-hOPGL 용액 ml 당 산의 마이크로당량(μEq/ml-pH)으로 표시되어 있으며, 가로축에는 Ab-hOPGL 의 농도가 mg/ml 로 표시되어 있다. 실시예 1 에 기술된 바와 같이 다른 농도의 아세테이트 표준 완충액에 대한 완충 용량이 가로선으로 도시되어 있으며, 그 선 위에 완충액의 농도가 표시되어 있다.

 도 8 은 pH 범위 5.0 내지 6.0 에서 Ab-hOPGL ± 잔여 아세테이트의 완충 용량을 도시한 그래프이다. 데이타는 실시예 8 에 기술된 바와 같이 수득하였다. 상단 라인은 잔여 아세테이트를 포함한 Ab-hOPGL 완충 용량을 나타낸 것이고, 하단 라인은 잔여 아세테이트에 대해 보정된 Ab-hOPGL 완충 용량을 나타낸 것이다. 세로축에는 완충 용량이 pH 유닛 당 완충 용액 ml 당 첨가된 염기의 마이크로당량(μEq/ml-pH)으로 표시되어 있으며, 가로축에는 Ab-hOPGL 의 농도가 mg/ml 로 표시되어 있다. 실시예 2 에 기술된 바와 같이 여러 농도의 아세테이트 나트륨 표준 완충액에 대한 완충 용량이 가로선으로 도시되어 있으며, 그 선 위에 아세테이트 농도가 표시되어 있다.

 도 9 는 자가 - 완충성 제형 및 통상적으로 완충된 제형에서의 pH 및 Ab-hOPGL 안정성을 한 쌍의 차트로 도시한 것이다. 패널 A 는 6 개월의 기간에 걸쳐 4 ℃에서 보관 기간의 함수로서, 자가 - 완충된 Ab-hOPGL, 아세테이트 완충액 중에서 제형화된 Ab-hOPGL 및 글루타메이트 중에서 제형화된 Ab-hOPGL 의 안정성을 도시한 것이다. 세로축에는 Ab-hOPGL 안정성이 SE-HPLC 에 의해 측정된 Ab-hOPGL 단량체 % 로 표시되어 있으며, 가로축에는 보관 기간이 표시되어 있다. 패널 B 는 동일 기간에 걸쳐 계측된 동일한 3 가지 제형의 pH 를 도시한 것이다. 단백질 안정성 측정 및 pH 계측은 실시예 9 에 기술되어 있다.

 도 10 은 pH 5.0 내지 4.0 의 범위에서 여러 농도의 자가 - 완충성 Ab-hB7RP1 제형에 대한 적정 데이타 및 완충 용량을 도시한 것이다. 패널 A 는 적정 데이타를 나타낸 것으로, pH 가 세로축에 표시되어 있으며, 용액에 첨가된 산의 양이 가로축에 완충 용액 ml 당 첨가된 HCl 의 마이크로당량(μEq/ml)으로 표시되어 있다. 각 데이타세트에 대해 선형의 최소 제곱 추세선이 도시되어 있으며, Ab-hB7RP1 농도는 삽입그림에 표시되어 있다. 패널 B 는 Ab-hB7RP1 제형의 완충 용량을 도시한 것이다. 상단 라인은 잔여 아세테이트의 기여를 포함하여 제형에 대한 완충 용량을 나타낸 것이고, 하단 라인은 실시예 3 에 기술된 바와 같이 SE-HPLC 측정에 의거하여, 잔여 아세테이트 기여 공제 후 제형에 대한 완충 용량을 나타낸 것이다. 두 개의 데이타 세트에 대한 선형의 최소 제곱 추세선이 제시되어 있다. 세로축에는 완충 용량이 pH 유닛 당 완충 용액 ml 당 산의 마이크로당량(μEq/ml-pH)으로 표시되어 있으며, 가로축에는 Ab-hB7RP1 의 농도가 mg/ml 로 표시되어 있다. 실시예 1 에 기술된 바와 같이, 여러 농도의 아세트산 나트륨 표준 완충액에 대한 완충 용량이 가로 점선으로 도시되어 있으며, 각 선 아래에는 아세테이트 완충액 농도가 표시되어 있다. 결과는 실시예 10 에 기술된 바와 같이 수득되었다.

 도 11 은 pH 5.0 내지 6.0 의 범위에서 여러 농도의 자가 - 완충성 Ab-hB7RP1 제형에 대한 적정 데이타 곡선 및 완충 용량을 도시한 것이다. 패널 A 는 적정 데이타를 나타낸 것으로, pH 가 세로축에 표시되어 있으며, 용액에 첨가된 염기의 양이 가로축에 완충 용액 ml 당 첨가된 NaOH 의 마이크로당량(μEq/ml)으로 표시되어 있다. 각 데이타세트에 대해 선형의 최소 제곱 추세선이 도시되어 있으며, Ab-hB7RP1 농도는 삽입그림에 표시되어 있다. 패널 B 는 Ab-hB7RP1 제형의 완충 용량을 도시한 것이다. 상단 라인은 잔여 아세테이트를 포함한 제형에 대한 완충 용량을 나타낸 것이고, 하단 라인은 잔여 아세테이트의 기여를 배제시키도록 보정한 제형에 대한 완충 용량을 나타낸 것이다. 두 개의 데이타 세트에 대한 선형의 최소 제곱 추세선이 제시되어 있다. 세로축에는 완충 용량이 pH 유닛 당 완충 용액 ml 당 염기의 마이크로당량(μEq/ml-pH)으로 표시되어 있으며, 가로축에는 Ab-hB7RP1 의 농도가 mg/ml 로 표시되어 있다. 실시예 2 에 기술된 바와 같이, 여러 농도의 아세트산 나트륨 표준 완충액에 대한 완충 용량이 가로 점선으로 도시되어 있으며, 각 선 위에는 아세테이트 완충액 농도가 표시되어 있다. 결과는 실시예 11 에 기술된 바와 같이 t수득하였다.

 도 12 는 4 ℃ 및 29 ℃ 에서 자가 - 완충성 제형 및 통상적으로 완충된 제형에서의 Ab-hB7RP1 안정성을 도시한 것이다. 패널 A 는 6 개월의 기간에 걸쳐 4 ℃ 에서 보관 기간의 함수로서, 자가 - 완충된 Ab-hB7RP1, 아세테이트 완충액 중에서 제형화된 Ab-hB7RP1 및 글루타메이트 중에서 제형화된 Ab-hB7RP1 의 안정성을 도시한 것이다. 세로축에는 SE-HPLC에 의해 측정된 시료내 Ab-hB7RP1 단량체가 표시되어 있으며, 가로축에는 시간이 표시되어 있다. 패널 B 는 동일 기간에 걸쳐 29 ℃에서 보관 기간의 함수로서 동일한 3 종의 제형의 안정성을 도시한 것이다. 패널 B 의 축들은 패널 A 에서와 동일하다. HPLC-SE 에 의한 단백질 안정성의 측정은 실시예 12 에 기술되어 있다.

 도 13 은 4 ℃ 및 29 ℃ 에서 Ab-hB7RP1 의 자가 완충 제형에서의 pH 안정성을 도시한 것이다. 세로축에는 pH 가 표시되어 있으며, 가로축에는 시간(주 단위로)가 표시되어 있다. 데이타세트의 온도는 삽입그림 내에 표시되어 있다. 데이타는 실시예 13 에 기술된 바와 같이 수득하였다.

 도 14 는 pH 4.0 내지 6.0 의 범위에서 Ab-hCD22 농도의 함수로서 Ab-hCD22 의 자가 - 완충성 제형에 대한 완충 용량을 도시한 것이다. 패널 A 는 pH 4.0 내지 5.0 의 범위에서 Ab-hCD22 농도의 함수로서 자가 - 완충성 Ab-hCD22 제형에 대한 완충 용량을 도시한 것이고, 패널 B 는 pH 5.0 내지 6.0 의 범위에서 농도의 함수로서 자가 - 완충성 Ab-hCD22 제형에 대한 완충 용량을 도시한 것이다. 이들 두 패널에서, 세로축에는 완충 용량이 pH 유닛 당 완충 용액 ml 당 염기의 마이크로당량 (μEq/ml-pH)으로 표시되어 있으며, 가로축에는 Ab-hCO22 농도가 mg/ml 로 표시되어 있다. 참조용으로, 실시예 1 에 기술된 바와 같은 10 mM 아세트산 나트륨의 완충 용량이 양 패널에 가로 점선으로 도시되어 있다. 결과는 실시예 14 에 기술된 바와 같이 수득하였다.

 도 15 는 pH 5.0 내지 4.0 의 범위에서 여러 농도의 자가 - 완충성 Ab-hIL4R 제형에 대한 적정 곡선 및 완충 용량을 도시한 것이다. 패널 A 는 적정 데이타를 나타낸 것으로, pH 가 세로축에 표시되어 있으며, 용액에 첨가된 산의 양이 가로축에 완충 용액 ml 당 첨가된 HCl 의 마이크로당량(μEq/ml-pH)으로 표시되어 있다. 각 데이타세트에 대해 선형의 최소 제곱 추세선이 도시되어 있으며, Ab-hIL4R 농도는 삽입그림에 표시되어 있다. 패널 B 는 농도의 함수로서 Ab-hIL4R 의 완충 용량을 도시한 것이다. 데이타세트에 대해 선형의 최소 제곱 추세선이 도시되어 있다. 세로축에는 완충 용량이 pH 유닛 당 완충 용액 ml 당 염기의 마이크로당량(μEq/ml-pH)으로 표시되어 있으며, 가로축에는 Ab-hIL4R 의 농도가 mg/ml 로 표시되어 있다. 실시예 1 에 기술된 바와 같은, 여러 농도의 아세트산 나트륨 표준 완충액에 대한 완충 용량이 가로 점선으로 도시되어 있으며, 각 선 위에는 아세테이트 완충액 농도가 표시되어 있다. 결과는 실시예 15 에 기술된 바와 같이 수득하였다.

 도 16 는 pH 5.0 내지 6.0 의 범위에서 여러 농도의 자가 - 완충성 Ab-hIL4R 제형에 대한 적정 곡선 및 완충 용량을 도시한 것이다. 패널 A 는 적정 데이타를 나타낸 것으로, pH 가 세로축에 표시되어 있으며, 용액에 첨가된 염기의 양이 가로축에 완충 용액 ml 당 첨가된 NaOH 의 마이크로당량(μEq/ml)으로 표시되어 있다. 각 데이타세트에 대해 선형의 최소 제곱 추세선이 도시되어 있으며, Ab-hIL4R 농도는 삽입그림에 표시되어 있다. 패널 B 는 농도의 함수로서 Ab-hIL4R 의 완충 용량을 도시한 것이다. 데이타세트에 대해 선형의 최소 제곱 추세선이 도시되어 있다. 세로축에는 완충 용량이 pH 유닛 당 완충 용액 ml 당 염기의 마이크로당량(μEq/ml-pH)으로 표시되어 있으며, 가로축에는 Ab-hIL4R 의 농도가 mg/ml 로 표시되어 있다. 실시예 2 에 기술된 바와 같은, 여러 농도의 아세트산 나트륨 표준 완충액에 대한 완충 용량이 가로 점선으로 도시되어 있으며, 각 선 위에는 아세테이트 완충액 농도가 표시되어 있다. 결과는 실시예 16 에 기술된 바와 같이 수득하였다.

 도 17 은 시간의 함수로서 37 ℃ 에서 Ab-hIL4R 의 아세테이트 완충된 제형 및 자가 - 완충된 제형에서의 Ab-hIL4R 및 pH 안정성을 도시한 것이다. 패널 A 는 37 ℃ 에서 4 주간에 걸친 Ab-hIL4R 안정성을 나타내는 막대 그래프로서, 세로축에는 SE-HPLC 에 의해 측정된 % 단량체성 Ab-hIL4R로 안정성이 표시되어 있으며, 가로축에는 보관 기간이 주 단위로 표시되어 있다. 삽입그림에는 아세테이트 및 자가 - 완충된 제형에 대한 데이타가 명시되어 있다. 패널 B 는 동일 조건 및 기간에 대해 동일 제형의 pH 안정성을 도시한 것으로, pH 가 세로축에 표시되어 있으며, 가로축에는 보관 기간이 주 단위로 표시되어 있다. 아세테이트 및 자가 - 완충된 제형에 대한 데이타가 삽입그림에 표시되어 있다. 데이타는 실시예 17 에 기술된 바와 같이 수득하였다.

  용어 설명
 이하, 본원에서 사용된 다양한 용어 및 문구에 대한 의미가 예시적으로 설명되어 있다.

 "하나의"는 본원에서 "적어도 하나의", "하나 또는 그 이상의"를 의미한다.

 "약"은 본원에서 달리 명시하지 않았다면, ∀ 20 % 내외를 의미한다. 예를 들어, 본원의 약 100 이란 80 내지 120 을 의미하고, 약 5 는 4 내지 6 을 의미하며, 약 0.3 은 0.24 내지 0.36 을 의미하고, 약 60 % 는 48 % 내지 72 %(40 % 내지 60 % 가 아닌)를 의미한다.

 "작용제(들)"는 본원에서 대응 자극성 리간드와는 상이한 물질이지만, 동일한 자극 효과를 가진 분자성 물질을 의미한다. 예를 들어(작용제가 다른 메카니즘을 통해 작용하더라도), 대응 호르몬 수용체에 결합함으로써 활성을 자극하는 호르몬의 경우, 작용제는 호르몬 수용체에 결합하여 그 활성을 자극하는 화학적으로 상이한 물질이다.

 "길항제(들)"은 본원에서 대응 리간드와는 상이한 물질이지만, 상반되는 효과를 가지는 분자성 물질을 의미한다. 예를 들어(길항제가 다른 메카니즘을 통해 작용하더라도), 대응 호르몬 수용체에 결합함으로써 활성을 자극하는 호르몬의 길항제 중 1 종은 호르몬과는 상이하며, 호르몬 수용체에 결합하되, 호르몬 결합에 의해 야기된 활성을 자극하지 않고 이 작용에 의해 호르몬의 효과인자 활성을 억제하는 화학적 물질이다.

 "항체(들)"는 생화학적 및 생물공학적 기술분야에서 통상적인 의미로 본원에서 사용된다.

 본원에서 사용된 용어의 의미 범주 내의 항체 중에는, 모노클로날 및 폴리클로날 항체를 비롯하여 생물학적 공급원으로부터 분리한 항체, 세포 배지에서 제작된 항체와 유전자전이 식물 및 동물에서 제작된 항체를 비롯하여 내인성 유전자 활성화 과정 및 외인성 발현 구성체의 발현 과정에 의해 제작된 항체를 포함한, 재조합 DNA 기술에 의해 제작된 항체(또한 본원에서는 종종 재조합 항체로도 지칭됨), 및 펩티드 합성 및 반 - 합성을 비롯한 화학적 합성 방법에 의해 제작된 항체가 있다. 또한, 다른 것들 중에서 키메라형(chimeric) 항체 및 하이브리드 항체도 달리 명시한 경우를 제외하고는 본원에서 사용된 용어의 범주 내에 있다.

 원형적 항체는 디술피드 결합에 의해 함께 연결된 2 개의 동일한 경쇄 - 중쇄 이합체로 이루어진 사합체 당단백질로, 척추동물의 경쇄로는 카파 및 람다, 두 가지 타입이 있다. 각각의 경쇄는 불변 영역과 가변 영역으로 이루어지고, 두 경쇄는 불변 영역 서열에 의해 구분된다. 척추동물의 중쇄로는 알파, 델타, 입실론, 감마 및 뮤, 다섯 가지 타입이 있다. 각각의 중쇄는 가변 영역과 3 개의 불변 영역으로 이루어지고, 중쇄의 다섯가지 타입이 척추동물 항체(아이소타입)를 다음의 다섯가지 군(class)으로 규정한다 : IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM. 각 아이소타입은 개별적으로 (a) 2개의 알파, 델타, 입실론, 감마 또는 뮤 중쇄 및 (b) 2 개의 카파 또는 2개의 람다 경쇄로 구성된다. 각각의 군내에서 중쇄는 두 타입 모두의 경쇄와 결합하고 있지만, 해당 분자내에서 두개의 경쇄는 둘다 카파이거나 또는 둘다 람다이다. IgD, IgE 및 IgG 는 일반적으로 "유리형" 헤테로사합체 당단백질로 존재한다. IgA 및 IgM 은 일반적으로 "J" 쇄 폴리펩티드와 결합된 수개의 IgA 또는 수개의 IgM 헤테로사합체를 포함하는 복합체에서 존재한다. 일부 척추동물 아이소타입은 불변 영역의 서열 차이에 의해 서로 구분되어 아군(subclass)으로 분류된다. 예를 들면, 4 개의 인체 IgG 아군, IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4, 그리고 2 개의 IgA 아군, IgA1 및 IgA2 가 있다. 이들 및 상기에서 구체적으로 기술하지 않은 다른 것들 모두 본원에서 사용된 용어 "항체(들)"의 의미에 포함된다.


 용어 "항체(들)"는 본원 다른 곳에서 추가 설명된 상기의 아미노산 서열 변이체를 추가 포함한다.

 본원에서 사용된 "항체-유래"은 항체로부터 생성된 단백질 및 항체를 기반으로 한 디자인의 단백질을 의미한다. 이 용어는 그 의미에, 항체 모두 또는 일부분을 사용하여 생산된 단백질, 항체 모두 또는 일부분을 포함하는 단백질, 및 항체 모두 또는 일부분을 기본으로 하여 전체 또는 일부가 디자인된 단백질을 포함한다. "항체 - 유래" 단백질에는 Fc, Fab 와 Fab 2 단편 및 이를 포함한 단백질, V H 도메인과 V L 도메인 단편 및 이를 포함한 단백질, 전체 또는 부분적으로 항체의 가변 영역 및/또는 불변 영역을 포함하는 기타 단백질, scFv(s) 인트라바디, 맥시바디, 미니바디, 디아바디, 이들의 아미노산 서열 변이체 및 본원 다른 곳에 기술된 기타의 것들을 포함한(이들로만 한정되지 않음) 다양한 기타 분자들이 포함되나, 이들로만 한정되지는 않는다.

 본원에서 사용된 "항체 - 관련"은 항체 또는 항체의 일부분과 구조, 기능 또는 디자인 면에서 유사한 단백질 또는 유사체를 의미한다. 본원에 사용된 용어인 "항체 - 관련" 단백질 중에는 전술한 "항체 - 유래" 단백질이 있다. 용어 "항체 - 유래" 및 "항체 - 관련"은 상당 부분 중복되며, 두 용어는 다수의 이러한 단백질에 적용된다. "항체 - 관련" 단백질의 일례로는 펩티바디 및 리셉티바디가 있으며, 이와 관련하여 이것으로의 한정을 의미하지는 않는다. "항체 - 관련" 단백질의 다른 예들은 본원 다른 곳에 기술되어 있다.

 본원에서 사용된 "항체 폴리펩티드(들)"는 달리 특기하지 않는 한, 몇몇을 예시하면 경쇄 폴리펩티드, 중쇄 폴리펩티드 및 J 쇄 폴리펩티드와 같이 항체의 일부분인 폴리펩티드를 의미하며, 다른 단편 중에서, 이들의 유도체와 변이체 및 관련 폴리펩티드가 포함된다.

 "대략"이란 달리 특기하지 않는 한, "약"과 동일한 의미를 가진다.

 "결합 성분(들)"은 다른 분자 또는 분자 복합체의 일부분에 특이적으로 결합하는 분자 또는 분자 복합체의 일부분을 의미한다. 결합 성분은 결합하고자 하는 분자 또는 분자 복합체의 부분과 동일 또는 상이할 수 있다. 결합 성분은 또한 분자 또는 분자 복합체 전체일 수도 있다.

 "특이적 결합"은 본원에서는 해당 분야에서의 통상의 의미로 사용되며, 달리 특기하지 않는 한, 일반적으로 다른 부위에 비해 특정의 특이 부위와 더욱 강력하게 결합이 이루어짐을, 광범위한 부위에서 나타날 수 있는 비 - 특이적 결합에 비해 더욱 강력한 결합이 일어남을 그리고 결합이 특정 부위에 대해 선택적이고 다른 것들과는 그만큼 강력하지 이루어지지 않음을 의미한다. 특이적 결합의 극단적인 경우에 있어서, 한 타입의 부위에서는 매우 강력한 결합이 이루어지지만, 다른 부위에서는 비 - 특이적 결합이 일어나지 않는다.

 "병용 - 투여"는 동시 및/또는 연속 투여를 포함하여 서로 관련 있는 2 종 이상의 약제를 투여하는 것을 의미한다.

 "동원(들)"은 본원에서 예를 들면 서로 끼워 맞추는 2 개의 조각 퍼즐, 자물쇠의 실린더 메카니즘과 이를 여는 열쇠, 효소의 기질 결합 부위와 이 효소 기질, 및 표적과 이에 특이적으로 결합하는 표적 결합 단백질과 같이 상보적이고, 서로 끼워지며, 매칭됨을 의미한다.

 "동원 결합 성분"은 본원에서 서로 특이적으로 결합하는 결합 성분을 의미한다. 항상은 아니지만, 통상적으로 이는 서로 특이적으로 결합하는 한 쌍의 결합 성분을 의미한다. 특이적 리간드와 리간드 수용체에서 고 선택적 결합을 하는 성분을 동원 결합 성분의 예시적 일례로 들 수 있다. 다른 일례로는 항원과 항체 결합 성분이 있다.

 "조성물"은 제형과 같이 1 종 이상의 구성물을 포함하는 물질의 구성을 의미한다.

 "이루어진"이란 "포함하는"(이하 설명 참조)의 동의어이다.

 "포함하는"은 추가 조건, 한정 또는 예외없이 그 밖의 다른 것을 포함하거나 포함하지 않을 수도 있음을 포괄적으로 의미한다. 예를 들어, "x 및 y 를 포함하는 조성물"은 x 및 y 를 함유하는 조성물로, 그 밖의 다른 물질은 함유하지 않을 수 있음을 의미한다. 마찬가지로 "x 를 포함하는 방법"은 x 를 수행하는 방법으로, 그 밖의 다른 것들은 일어나지 않을 수도 있다.

 "농도"는 본원에서는 해당 분야에서 공지된 의미로 사용되며, 소정량의 특정 아이템 함유 혼합물 중에 이 아이템의 양을 통상적으로 비율로서 표시한 것을 의미한다. 예를 들면, 용액중 단백질과 같은 용질의 농도는 다음과 같은 수많은 방식으로 표시할 수 있다(이들로만 한정되지 않음): (A) 중량 % (i) = 용매 용적 100 유닛 당 용질의 중량 ; (B) 중량 % (ii) = 총 중량 100 유닛 당 용질의 중량 ; (C) 중량% (iii) = 용매 100 중량 유닛 당 용질의 중량 ; (D) 질량 % = 용액 100 질량 유닛 당 용질의 질량 ; (E) 몰 분획 = 전체 성분의 총 몰수 당 용질의 몰수 ; (F) 몰 농도 = 용액(즉, 용질 + 용매) 리터 당 용질의 몰수 ; (G) 몰랄농도 = 용매 Kg 당 용질의 몰수 ; 및 (H) 용적 몰랄농도 = 용매 리터 당 용질의 몰수.

 "제어 영역(들)"은 본원에서는 해당 분야에서 공지된 의미로 사용되며, 달리 특기하지 않는 한, 하나 이상의 기능 또는 활성을 제어하는 역할을 하는 DNA 또는 단백질 내 영역을 지칭한다. 예를 들면, 유전자 발현의 제어와 관련하여 "발현 제어 영역"이란 전사가 적절히 일어나도록 하는데 필요하고, 전사 발생 시점, 그 전사 효율, 전사 중단 시점 등의 조절에 관여하는 DNA 내 영역을 의미한다.

 "신규의"는 본원에서 해당 분야에서 공지된 의미로 사용되며, 새로운 것으로부터 만들어진 특정 물질을 의미한다. 예를 들어, 신규 아미노산 서열은 이러한 신규 서열이 천연 서열과 유사성을 지니고 있을지라도, 천연 아미노산 서열로부터 유래되지 않은 것이다. 신규 아미노산 서열은 예를 들면 프리오리(priori) 디자인에 의해, 조합적 방법에 의해, 선택 방법에 의해 생성될 수 있다. 이들은 예를 들면, 화학적 합성에 의해, 반 - 합성에 의해 그리고 다양한 재조합 DNA 기술에 의해(이들 모두 해당 분야의 전문가에게 잘 공지되어 있음) 제조될 수 있다.

 "유해한"은 본원에서 사용된 바와 같이 해로움을 의미한다. 예시하면, "유해" 과정은 질환 진행과정의 해로운 효과 및 치료의 해로운 부작용을 포함한다.

 "유도체(들)"는 본원에서는 예를 들면 아미노산 서열 변경에 의해, 다른 폴리펩티드로의 융합에 의해 또는 공유 변형에 의해, 기준 폴리펩티드를 기본으로 하되, 이와는 상이한 폴리펩티드와 같이 물질내, 형태 또는 디자인으로부터 유래한 것을 의미한다.

 "질환(들)"은 실험대상의 건강에 해로운 영향을 미치는 병변, 증세를 의미한다.

 "질병(들)"은 건강을 악화시키는 증상, 증세를 의미한다.

 "기능장애"는 본원에서 사용된 바와 같이 정상적인 과정의 질병, 질환 또는 유해 효과를 의미한다.


 "유효량"은 일반적으로 목적하는 국소적 또는 전신적 효과를 제공하는 양을 의미한다. 예를 들면, 유효량은 유리한 또는 목적하는 임상적 결과를 나타내기에 충분한 양이다. 유효량은 1 회 투여에서는 한번에 모두 또는 수회 투여에서는 유효량을 제공하는 분할량으로 제공될 수 있다. 유효량에 대한 정확한 결정은 크기, 연령, 상처 및/또는 치료할 질환이나 상처, 및 상처 발생 또는 질환 발병 이후 경과 시간을 비롯한 각 실험대상에 대한 개별적인 요인에 의거하여 이루어질 수 있다. 해당 분야의 전문가라면 해당 분야에서 보편적인 상기 사항들에 의거하여 해당 실험대상에 대한 유효량을 결정하는 것이 가능하다. 본원에서 사용된 "유효 용량"은 "유효량"과 동일한 의미이다.

 "유효 경로"는 일반적으로 목적하는 구획, 시스템 또는 장소로 약제를 전달하는 경로를 의미한다. 예를 들어, 유효 경로란 유리한 또는 목적하는 임상적 결과를 나타내기에 충분한 양의 약제를 목적하는 작용 부위에 제공하고자 약제 투여시 경유하는 것을 말한다.

 "내인성"(내인성 유전자와 같은)은 본원에서 달리 특기하지 않는 한, 제어 영역과 같이 게놈 및 유기체에 원래부터 존재하는 유전자 및 기타 DNA 양태를 지칭하는데 사용된다.
 "외인성" (외인성 유전자와 같은)은 달리 특기하지 않는 한, 일반적으로 본원에서, 예를 들면 세포로 도입되어 그 게놈 내로 혼입된 DNA 와 같이 외부 공급원으로부터 유래된 DNA 를 의미하는데 사용된다.

 "FBS"는 우 태아 혈청을 의미한다.

 "제형(들)"은 보관, 추가 프로세싱, 판매 및/또는 실험대상으로의 투여, 예를 들면 특정 질환 치료를 위해 특정 경로로 소정량의 특정 약제를 실험대상에 투여하는 것과 같이 하나 이상의 특별한 용도를 위해 적어도 1 종의 활성 성분을 1 종 이상의 기타 다른 성분들과 혼합한 것을 의미한다.

 "단편(들)"은 본원에서 단백질의 일부 같은 대형 물질의 일부분, 예를 들면 대형 폴리펩티드의 전체 아미노산 서열 미만으로 이루어진 폴리펩티드를 의미한다. 본원에서 사용된 바와 같이, 이 용어는 폴리펩티드의 둘 이상의 비 - 인접 부분들이 서로 결합하여 원래 것의 단편인 소형 폴리펩티드를 형성하는 것과 같이, 말단 결실에 의해 형성된 단편 및 내부 결실에 의해 형성된 단편을 포함한다.


 "융합 단백질(들)"은 본원에서 동일 또는 상이할 수 있는 두 개의 폴리펩티드 전체 또는 일부를 융합함으로써 형성된 단백질을 의미한다. 전형적인 융합 단백질은 재조합 DNA 기술에 의해, 두 개(또는 그 이상)의 폴리펩티드를 암호화하는 뉴클레오티드의 단부 - 단부 결합에 의해 제조될 수 있다.

 "유전적 조작"은 본원에서 재조합 DNA 기술, 전통적인 유전자 조작 방법, 화학적 방법, 상기 세 방법의 병행 또는 다른 방법들과 같은 의도적인 유전자 변경 과정을 이용하여 제작됨을 의미한다.

 "상동체(들)"는 본원에서 다른 단백질과 상동인 단백질과 같이 다른 물질에 대해 상동성을 가짐을 의미한다. 상동이라 함은 구조 또는 기능 면에서 유사함을 의미한다.

 "이온화"는 본원에서 아세트산이 저 pH 용액에서 HOAc 로부터 OAC - 및 H + 로 이온화하는 것과 같이, 전하의 소실 또는 취득중 적어도 하나에 의해 나타나는 물질의 총 전하 변화를 의미한다.

 "k"는 본원에서 화학 분야의 표준 의미로 평형 계수를 의미한다.
 "k a"는 본원에서 화학 분야의 표준 의미로 분자의 특정 수소의 해리 상수, 예를 들면 아세트상의 산성 수소의 해리 상수를 의미한다.

 "k d"는 본원에서 화학 분야의 표준 의미로 한 쌍의 화학 물질(또는 부위)의 해리 상수를 의미한다.

 "키트"는 소정의 목적 또는 목적들을 위해 함께 사용되는 아이템들의 집합을 의미한다.

 "리간드(들)"는 본원에서 1 종 이상의 다른 분자성 물질상의 하나 이상의 특정 부위에 선택적 및 화학량적으로 결합하는 분자성 물질을 의미한다. 결합은 통상 비 - 공유 결합이지만, 또한 공유 결합일 수도 있다. 다수의 것들 중 극소수의 일례로서 (a) 통상 동원 항체상의 결합 성분에 비 - 공유 결합하는 항원 ; (b) 통상 호르몬 수용체에 비 - 공유 결합하는 호르몬 ; (c) 특정 당에 비 - 공유 결합하는 렉틴 ; (d) 아비딘 및 기타 아비딘 - 유사 단백질상의 다수 부위에 비 - 공유 결합하는 비오틴 ; (e) 호르몬 수용체에 결합하여 그 활성 및/또는 대응 호르몬의 활성을 억제하는 호르몬 길항제 ; 및 (f) 호르몬 수용체에 유사하게 결합하지만 그 활성을 자극하는 호르몬 작용제가 있다.
 "리간드 - 결합 성분(들)"은 본원에서 리간드에 결합하는 분자성 물질, 통상적으로 리간드에 결합하는 대형 분자성 물질의 일부 또는 이로부터 유래된 분자성 물질을 의미한다.

 "리간드 - 결합 단백질(들)"은 본원에서 리간드에 결합하는 단백질을 의미한다.

 "리간드 성분(들)"은 본원에서 대응 리간드와 동일한 방식으로 리간드 - 결합 분자성 물질에 결합하는 분자성 물질을 의미한다. 리간드 성분은 리간드 전체 또는 리간드로부터 유래 또는 신규 생성된 그 일부일 수 있다. 그러나, 통상 리간드 성분은 대응 리간드 - 결합 물질에 결합하는 부위보다 크거나 또는 예외적으로 작다. 리간드 성분은 리간드 결합에 필요한 부위 이외의 구조적 특징까지 포함할 필요가 없으며, 이 용어 또한 일반적으로 이를 의미하지 않는다.

 "mEq"는 본원에서 밀리당량(들)을 의미한다.

 "μEq"는 본원에서 마이크로당량(들)을 의미한다.


 "유사체(들)"는 본원에서 다른, 일반적으로 무관한 화학 물질의 구조적 또는 기능적 특징을 가진 화학 물질을 의미한다. 예를 들면, 대응 호르몬과 동일한 방식으로 대응 수용체에 결합하는 비 - 펩티드 유기성 분자가 호르몬 유사체의 한 종류이다.

 "mM" 은 밀리몰 ; 리터 당 10 -3 몰을 의미한다.

 "변형된 단백질(들)", "변형된 폴리펩티드(들)" 또는 "변형된 단편(들)"은 본원에서 천연 단백질을 형성하는 20개의 천연 아미노산과 다른 화학적 부위(구조)를 포함하는 단백질 또는 폴리펩티드, 또는 단백질이나 폴리펩티드의 단편을 의미한다. 대다수의 변형체는 종종 단백질 또는 단백질의 단편 같은 기타 폴리펩티드에 공유 부착되지만, 또한 이들에 비 - 공유 부착될 수도 있다.

 "성분(들)"은 본원에서 외인성 성분 없이, 특정 구조 및/또는 기능을 구체화한 분자의 부분을 의미한다. 예를 들면, 대다수 경우에서, 리간드 - 결합 단백질의 소 부분만이 리간드 결합에 관여한다. 이러한 단백질의 상기 부분이 연속 또는 비연속 암호화 여부와 상관없이 리간드 - 결합 성분의 예시이다.
 "천연"은 인간의 개재 없이 자연상에 존재하는 것을 의미한다.

 "비 - 천연"은 자연상에 존재하지 않거나, 또는 자연 상에 존재하더라도 천연 상태, 환경, 상황 등에 있지 않음을 의미한다.

 "PBS"는 인산염 완충 식염수를 의미한다.

 "펩티바디"는 Fab 및 F(ab) 2 뿐 아니라, 항체 C H1, C L, V H 및 V L 도메인을 배제한 항체 Fc 도메인 (즉, C H2 및 C H3 항체 도메인)을 포함하는 분자로서, Fc 도메인이 1 종 이하의 펩티드, 바람직하게는 약리학적 활성 펩티드, 특히 바람직하게는 무작위 생성된 약리학적 활성 펩티드에 부착된 것을 지칭한다. 펩티바디의 제작은 전문이, 구체적으로 펩티바디의 구조, 합성, 특성 및 용도에 관한 부분이 본원에 참조 인용된 문헌인 2000 년 5 월 4 일자로 공개된 PCT 공개공보 WO 00/24782에 일반적으로 기술되어 있다.

 "펩디드(들)"는 본원에서 폴리펩티드와 동일한 것을 의미하지만, 반드시는 아니지만 종종은 비교적 짧은 폴리펩티드를 인용하는데에도 사용된다.

 "pH"는 다음의 잘 - 공지되고 보편적인 정의에 따라 사용된다: pH = -log[H 3O +].
 본원에서 사용된 "약학적"이란 인체 또는 비 - 인체 실험대상에서 치료 용도로 사용하는데, 특히 인체에서 사용하는데 허용가능하며, 이들의 용도를 규제하는 권한이 부여된 규제 기관, 예를 들면 미국 식품 의약 관리국, 유럽 의약품 평가 기관, 일본 보건 노동 복지부, 또는 전문이, 구체적으로 7장에 나열된 약품 승인 관련 규제 기관에 관한 부분이 참조 인용된 문헌인 [R. Ng, DRUGS; FROM DISCOVERY TO APPROVAL, Wiley-Liss(Hoboken, NJ)(2004)]에 게시된 것과 같은 기타 규제 기관에 의해 승인된 것임을 의미한다. 본원에서 사용된 문구 "조성물이 승인에 대한 권리를 부여받은 법적 기관에 의해 약학적 용도로 승인되었음"은 인체에 그리고 일부 경우 비 - 인체에 사용하도록 약물의 용도를 규제하고 승인하는 책임과 권한을 관장하는 법률에 의해 확립된 기관 또는 기구 등을 의미한다. 이러한 기관의 승인은 이 자격조건을 충족시킨다. 승인 기구가 예를 들어 반드시 위반 발생 국가의 기관일 필요는 없다. 상기한 기관의 일례로, 미국 식품 의약 관리국 및 본원 상기에 게시된 기타 기관이 포함된다.


 본원에서 사용된 "약제"란 또한 다른 것들 중에서, 전문이, 구체적으로 9장 및 10장에서 약학적 단백질 제형에 대한 우수 제조 절차에 관한 부분이 본원에 참조 인용된 문헌인 [R. Ng, DRUGS; FROM DISCOVERY TO APPROVAL, Wiley-Liss(Hoboken, NJ)(2004)]의 9 장 및 10 장에 기술된 바와 같은 우수 제조 절차에 따라 생산된 제품을 지칭할 수 있다.

 "약학적으로 허용가능한"이란 본원에서 해당 분야에 공지된 의미로 사용된 것으로, 의학용 또는 수의학용, 바람직하게는 특히 미국 식품 의약 관리국 또는 "약제"의 의미와 관련하여 전술한 기타 기관에 의해 이러한 용도로 승인된 인체 의학 용도로 허용가능한 것을 의미한다.

 "폴리펩티드(들)"은 "단백질(들)"에 대한 설명을 참조한다.

 "전구체(들)"는 해당 분야에 공지된 의미로 사용된 것으로, 다른 물질의 유래가 되는 물질을 의미한다. 예를 들면, 전구체 단백질은 단백질분해성 분할 또는 변형과 같은 프로세싱을 거침으로서, 다른 전구체 단백질 (이후 추가 프로세싱을 거치게 됨) 또는 성숙 단백질이 되는 단백질이다.


 "단백질(들)"은 해당 분야에 공지된 의미로 본원에서 폴리펩티드 또는 폴리펩티드 복합체를 의미한다. 본원에 사용된 바와 같이, "단백질(들)"에는 직쇄 및 측쇄 폴리펩티드 양자 모두 포함된다. 이는 자연 발생적 변형 및 자연 발생적이 아닌 것들을 비롯하여 미변형 및 변형된 폴리펩티드를 포함한다. 이러한 변형으로 단지 몇몇 만을 거명하면, 말단, 펩티드 골격, 및 아미노산 측쇄의 화학적 변형; 아미노산 치환, 결실 및 부가; 및 비정상 아미노산 및 기타 부위의 혼입이 있다. 이는 또한 예를 들면 재조합 DNA 기술, 화학적 합성, 및/또는 의도적 아미노산 서열 변경 및/또는 해독후 변형을 포함한 공유 변형에 의해 의도적으로 구조를 변경시킨 폴리펩티드 또는 폴리펩티드 복합체 같은 "조작된" 폴리펩티드 및 그 복합체를 포함하되, 이들로만 한정되지는 않는다.

 "양성자첨가반응"은 적어도 하나의 수소를 첨가하는 것을 의미한다.

 "자가 - 완충성"은 기타 완충제의 부재하에서 특정 적용분야에 충분한 pH 변화를 견디어내는 약학적 단백질 같은 물질의 능력을 의미한다.

 "반 - 신규의"는 본원에서 (a) 특정 참고문헌에 따라 부분적으로 디자인된 및/또는 전구체로부터 생성되고. (b) 특정 참고문헌에 대한 참조 없이 부분적으로 디자인되는 (특정 문헌에 의거하지 않고 단지 일반적인 원리에 의해 디자인된 것과 같이) 것을 의미하며, 이러한 일례로 박테리아 발현 시스템에서 제 1 펩티드를 제조하고, 화학적 합성에 의해 제 2 펩티드를 제조한 후, 이들 두 펩티드를 함께 결합시켜 폴리펩티드를 형성함으로써 제작된 폴리펩티드가 있다.

 "반 - 합성"은 본원에 사용된 바와 같이 화학적 합성 방법과 비 - 화학적 합성 방법을 병행하는 것을 의미한다.

 "실험대상"은 포유동물 같은 척추동물, 예를 들면 인체를 의미한다. 포유동물로는 인체, 농장용 동물, 스포츠용 동물 및 애완동물이 포함되지만, 이들로만 한정되지는 않는다. 본 발명의 방법 및/또는 조성물에 의한 치료를 요하는 실험대상으로는 질병, 기능장애 또는 질환, 또는 이들의 부작용으로 고생하는, 또는 치료 부작용으로 고생하는 것들이 포함된다.

 "실질적으로"는 본원에서 보통의 평범한 정의에 따라 대부분 또는 상당 정도를 의미하는데 사용된다. 예를 들어, 실질적으로 완전함 이란 대부분 또는 상당 정도로 완전함을 의미한다. 추가로 예시하면, 실질적으로 잔류물이 없음이란, 잔류물이 거의 없음, 또는 잔류물이 상당 부분 없음을 의미한다. 수치적 정확성을 요하는 경우에 있어서는, 문맥에 따라, "실질적"이란 본원에서 사용된 바와 같이 적어도 80 % 또는 그 이상, 특히 90 % 또는 그 이상, 매우 특히 95 % 또는 그 이상을 의미한다.

 "치료적으로 유효한"은 본원에서 해당 분야에 공지된 의미에 따라 사용되는 것으로, 실험대상의 예후 또는 상태에서 호전을 이루어내거나 또는 그외, 예를 들면 실험대상 상태가 계속 악화되더라도 질환의 진행 속도의 감소를 포함하여, 치료 목적을 달성하는 것을 의미한다.

 "치료적 유효량"은 일반적으로 질환의 중증도에 있어서 호전을 이루어내는 양을 포괄한, 약제의 양을 지정하는데 사용된다. 예를 들어, 효과적인 종양 치료제는 실험대상의 생존기간을 연장하거나, 종양 관련 세포의 급 - 증식 성장을 억제하거나 또는 종양의 퇴화를 실현시킨다. 본원에서 사용된 용어의 의미 범주내에서 치료적으로 유효한 치료라 함은 질환 경과를 본질적으로 호전시키지는 못하더라도 실험대상 생명의 질적 향상을 도모하는 치료를 포함한다.

 "치료한다", "치료하는" 또는 "치료"는 본 발명과 관련하여 광범위하게 사용되며, 이러한 용어 각각은 다른 것들 중에서도 부전증, 기능장애, 질환, 또는 치료를 저해 및/또는 치료로부터 야기된 것을 포함한 기타 유해 과정을 예방, 완화, 억제 또는 치료하는 것을 포괄한다.

 본원에서 "변이체(들)"은 예를 들면 대립유전자 변이체, 파라로그(paralog) 또는 단백질의 상동체와 같이, 구조적으로는 원형과 다르지만 구조 및/또는 기능상 관련이 있는 단백질의 천연 또는 합성 변형체를 의미한다.

발명의 상세한 설명
 본 발명은 자가 - 완충성 단백질 제형, 특히 생물약학적 단백질 제형, 이 제형을 제조하는 방법 및 이 제형을 사용하는 방법을 제공한다. 의도하는 용도에 적합한 농도에서 요구된 pH 범위 내에 충분한 완충 능력을 제공하는 단백질이라면 본 발명에 따라 자가 - 완충성 단백질로서 제조될 수 있다. 본 발명은 이후 추가 논의된 바와 같이, 천연 단백질 및 "조작된" 단백질 양자 모두, 특히 생물약학적 단백질을 포함한 다양한 단백질을 사용하여 실시할 수 있다.

 자가 - 완충성 조성물, 특히 약학적으로 허용가능한 조성물로 제형화되는 단백질, 특히 생물약학적 단백질의 유용성은 본원에 개시된 발명에 이전에는 인지된 적 없었다. 생리학적 pH 의 조절에 있어서 단백질의 영향력에 대해서는 잠시 인지 및 연구된 바 있으나, 단백질, 특히 생물약학적 단백질이 별도의 완충제 없이도 목적하는 pH 범주내에서 제형을 유지시키기에 충분한 완충 능력을 가질 수 있음이 인지된 적은 없었다.

 미국에서는 생물약학적 단백질이 사용을 위해 완충 용액, 비완충 용액, 비결정질 또는 결정질 현탁액 및 동결건조물로서 제형화된다.

 대부분의 완충 용액 제형은 통상적인 완충제를 사용한다. 두 가지 단백질, Pulmozyme� 및 Humulin� 은 통상적인 완충제 없이 용액으로 제형화된다. 이들 단백질 중 어느 것도 제형에서 실질적인 자가 - 완충 능력을 제공하지 못한다.

 Pulmozyme�은 약 37,000 달톤의 분자량을 가지며, 260 개의 아미노산 중에 5 개의 히스티딘, 22 개의 아스파르트산 및 12 개의 글루탐산을 포함하고 있다. pH 6.3 의 0.5 pH 유닛 내에 단백질의 완충 능력은 실질적으로 히스티딘 함량에 의해 결정된다. 이에 의거한, 제형의 자가 - 완충 능력의 상한치는 효과적인 히스티딘 잔기 농도인 0.15 mM 에 의해 측정된다. 제형내 아스파르트산과 글루탐산의 몰 농도는 0.9 mM 이다. 따라서, 이들 세 아미노산 모두의 총 몰 농도는 제형 농도에서 1 mM 을 약간 상회한다.
 Humulin�은 3.5 g/ml 에서 제형화되며, 약 6,000 달톤의 분자량을 가지고, 2 개의 아스파르트산, 8 개의 글루탐산 및 2개의 히스티딘을 포함하고 있다. 이들 아미노산 중 어느 것도 제형의 pH 인 7.0 내지 7.8 에서 완충제로서 효과적이지 않다. 이 농도에서 히스티딘의 몰 농도는 제형의 pH 에 근접한 pK a 인 1.16 mM 이다.

 생물약학적 동결건조물은 사용 전에 용액 또는 현탁액으로 재구성된다. 대다수의 동결건조물은 재구성된 제형의 적정 pH 를 유지하는 통상적인 완충제를 포함한다. 그중 단백질 농도가 낮거나 또는 pH 가 낮거나 (3 미만) 높아야 (9.5) 하는 몇몇은 효과적으로 비완충된다.

 따라서, 현행 생물약학적 단백질 제형에서 완충은 통상적인 완충제를 사용하여 달성된다. 자체적으로 약학적 단백질 제형을 완충하는 단백질의 능력은 완전히 평가된 적이 없으며, 단백질 약제의 제조에 사용된 적도 없다.

 단백질 완충 능력의 측정은 통상적으로 본 발명에 따른 자가 - 완충성 단백질 제형을 개발하는데 중요하다. 이와 관련하여, 단백질의 완충 능력을 측정하고 결정하는 방법이 하기에 설명되어 있다. 데이타 비교를 위해, 단백질 완충 능력은 비교가능한 단위로 및/또는 완충 표준액과 관련하여 표시되어야 한다. 따라서, 이하에서는 본 발명에 따라 이들 요건에 부합하는 pH 측정기준 및 표준액에 대해 설명하고 있다.

  1. 완충
 완충에 대한 광의의 정의는 산 또는 염기 첨가시 조성물의 pH 변화에 대한 내성이다. 즉, 완충 능력은 때론 pH 변화에 저항하는 조성물의 능력으로 정의된다.

 통상적으로 완충 능력은 소정량의 조성물의 pH 를 변화시키는데 필요한 강산 또는 강염기의 양으로 표시된다. 반 슬라이크 (van slyke)는 가장 널리 사용되는 완충 용량의 정량적 척도를 제공하였는데, 이에 따르면 용액의 경우 완충 용량은 표준 온도 및 압력 조건하에 1 pH 유닛 당 용액 1 리터의 pH 를 변화시키는데 필요한 강산 또는 강염기의 양으로 표시된다.

 이러한 척도에 따르면, 예를 들어 1 리터의 순수한 물 중 5 mM HOAc, 5 mM NaOAc, pH 4.76 에 대한 완충 용량은 다음에 따라 1 가 강 염기 4.09 x 10 -3 moles(즉, 4.09 x 10 -3 염기 당량)로 산출될 수 있다.

 용액에 대한 헨더슨 - 하셀바흐 (Henderson-Hasselbalch) 공식은 다음과 같다 : pH = log{[5 mM] NaOAc / 5 mM]HOAc} + 4.76.

 따라서, 이 완충액의 pH 를 상승시키는데 필요한 1 가 강 염기의 농도 X 는 다음과 같다 : 4.76 에서 5.76 으로, 5.76 = log{[5 mM + X mM] NaOAc / [5 mM - X mM] HOAc} + 4.76. 따라서 : 1.00 = log {[5 mM + X mM] NaOAc / [5 mM - X mM] HOAc} 10.0 = [5 mM + X mM] NaOAc / [5 mM - x mM] HOAc 10.0 = (5 mM + X mM) / (5 mM - X mM) 50 mM - 10X mM = 50 mM + X mM 11X mM = 45 mM X = 4.09 mM, 1 리터에 대해 산출하면 ; (4.09 x 10 -3 moles/리터)(1 리터)(1 당량/mole) = 4.09 x 10 -3 당량.

 즉, 이러한 척도에 따르면, 순수한 물 중에 pH 4.76 에서 5 mM NaOAc 및 5 mM HOAc 를 함유하는 10 mM 아세테이트 완충액 1 리터의 완충 용량은 pH 유닛 당 리터당 4.09 x 10 -3 당량의 염기이다. 다르게 표현할 때, 용액의 완충 용량은 pH 유닛 당 리터당 4.09 밀리당량의 염기, pH 유닛 당 밀리리터당 4.09 마이크로당량의 염기, pH 유닛 당 100 마이크로리터당 0.409 마이크로당량의 염기, pH 유닛 당 10 마이크로리터당 40.9 나노몰의 염기 및 pH 유닛 당 마이크로리터당 4.09 나노몰의 염기이다.

 동일 계산에 따르면, pH 4.76 에서 다른 농도의 이 아세테이트 완충액에 대해 다음과 같은 완충 용량이 산출된다. 상기와 같은 2 mM 아세테이트 완충액은 pH 유닛 당 리터당 0.818 mEq 의 완충 용량을 가진다. 4 mM 에서의 완충 용량은 pH 유닛 당 리터당 1.636 mEq 이고, 5 mM 에서의 완충 용량은 pH 유닛 당 리터당 2.045 mEq 이다. 7.5 mM 에서의 완충 용량은 pH 유닛 당 리터당 3.068 mEq 이고, 10 mM 아세테이트 완충액은 pH 유닛 당 리터당 4.091 mEq 의 완충 용량을 가지며, 15 mM 아세테이트 완충액의 완충 용량은 pH 유닛 당 리터당 6.136 mEq 이다.
 아세트산의 pK a(pH 4.76)에서 아세테이트 완충 용액은 동몰량의 아세트산과 아세테이트 염기 (즉, pK a 에서 산과 염기는 동량으로 존재함)를 포함한다. 그 결과, 아세트산의 pK a 에서 아세테이트 완충액의 pH 변화에 대한 내성 (완충 용량)은 산과 염기의 첨가에 대해 동일하다. 산과 염기의 균형은 pK a 와 동등한 pH 에서의 완충액 중 완충제의 일반적인 특징이다.

 다른 pH 에서는 완충액이 상이한 양의 산 및 염기 형태를 포함하게 되며, 따라서 산 첨가시 변화에 대한 내성(즉, 완충 용량)은 염기 첨가시 변화에 대한 내성과 동일하지 않게 된다. 결과적으로, 이러한 완충액의 완충 용량은 (i) pH 를 1 유닛 저하시키는데 필요한 산의 양 및 (ii) pH 를 1 유닛 상승시키는데 필요한 염기의 양으로 규정하는 것이 바람직하다.

 pH 표준액과 같이, 해당 조성물에서 산과 염기 형태간의 완충액의 분배는 pH 4.76 내외에서 10 mM NaOAc 의 완충 용량 (동몰량의 아세트산과 아세트산 나트륨 함유)을 기술하는데 있어서 상술한 바 있는 절차를 사용하여 특정 pH 및 완충액 농도에서 산출할 수 있다. 그리고 그 결과를 참조용으로 표준액의 완충 용량을 규정하는데 사용할 수 있다.
 즉, 예를 들어 pH 5.0 에서 용액내 아세트산과 아세테이트 염기로의 아세트산의 분배는 상기 절차에 따라 쉽게 산출할 수 있으며, 이로부터 염기와 산 첨가 둘 다에 대한 완충 용량을 산출할 수 있다. 이러한 방식으로 산출했을 때, pH 5.0 내지 5.5 범위에서 10 mM 아세트산 나트륨 완충액의 이론적 완충 용량은 대략 0.5 pH 유닛 당 2.1 mM 및 pH 유닛 당 4.2 mM 이다. 다른게 표현할 때, 완충액의 완충 용량은 이론적으로 변화 pH 유닛 당 완충 용액 ml 당 대략 4.2 μEq 이다. 마찬가지로, pH 5.0 내지 4.0 범위에서 10 mM 아세트산 나트륨 완충액의 이론적 완충 용량은 4.9 mM 이며, 다르게 표현하면 소정 pH 범위에서 변화 pH 유닛 당 완충액 ml 당 4.9 μEq 이다.

 이러한 계산은 대다수의 경우에 있어서 유용하지만, 실험적 표준액과 실험적 측정이 바람직하다. 특히 바람직한 실험적 표준액중에는 하기 실시예 1 및 2 에 예시된 바와 같은 pH 5.0 내지 4.0 범위의 아세트산 나트륨 완충액이 있다. 각별하게 바람직한 것은 본원 다른 곳에서 제시된 다른 것들 중에서 전체 아세테이트 농도가 특히 10 mM, 바람직하게는 4 mM, 각별하게는 4 mM 인 아세트산 나트륨 완충액이다.

 pH 5.0 에서 아세테이트 완충액은 상기 논의된 바와 같이 염기 첨가시 보다는 산 첨가시 pH 변화에 대해 더욱 내성을 나타낸다. 완충 용량에 대해 바람직한 실험적 표준액에 있어서, 표준 아세테이트 완충액의 완충 용량은 다음과 같이 규정된다: (i) pH 5.0 내지 pH 5.5 의 완충액에 대한 염기 적정 데이타에 대해 산출된 최소 제곱 회귀선의 기울기 및 (ii) pH 5.0 내지 pH 4.0 의 완충액에 대한 산 적정 데이타에 대해 산출된 최소 제곱 회귀선의 기울기. 표준 아세테이트 완충액의 제조 및 이들의 완충 용량의 측정은 하기 실시예 1, 2 및 3 에 기술되어 있다. 기타 적절한 완충제를 사용하여 완충 용량 표준액을 확립하고 이를 사용하는데 동일 방법을 사용할 수 있는 것으로 평가된다.

 본 발명에 따른 자가 - 완충성 단백질 조성물의 완충 용량을 계측함에 있어서, 때로는 동일한 완충 용량을 가진 동일 pH 에서의 표준 완충액의 농도로 완충 용량을 표시하는 것이 편리하다. 초기에 pH 5.0 인 아세트산 나트륨 완충액과 같이 완충제의 pK a 가 아닌 표준액을 사용할 때, 본 발명에 따른 자가 - 완충성 조성물은 염기 적정시의 완충 용량 또는 산 적정시의 완충 용량(또는 양자 모두)이 표준액의 대응 완충 용량과 대등하거나 또는 이를 초과하는 경우에 있어서, 표준액과 동등 또는 그 이상의 완충 용량을 가진 것으로 규정된다.


 본 발명에 따른 자가 - 완충성 단백질 조성물의 pH 는 일반적으로 자가 - 완충성 단백질 또는 그 내부의 산 - 염기 치환체의 pK a 가 아닌 것으로 또한 평가된다. 실제로 단백질은 다양성자성으로, 본원에서 논의된 바와 같이 때로는 각각이 다소 상이한 pK a 를 갖는 수개의 치환체를 이후 포함하게 되며, 이들은 소정의 pH 범위에서 그 완충 용량에 기여한다. 따라서, 본 발명에 따른 자가 - 완충성 단백질 제형의 완충 용량은 조성물의 목적 pH 로부터의 소정의 pH 변화 범위에서 산 적정 및 염기 적정 둘 다에 의해 실험적으로 측정하는 것이 바람직하다. 이와 관련하여 바람직한 실시형태에 있어서, 완충 용량은 제형의 출발 pH로부터 개별적으로 + 및 - 1 pH 유닛 변화에서 산 그리고 별도로 염기를 사용하여 적정함으로써 측정한다. 특히 바람직한 실시형태에 있어서는, ± 0.5 pH 유닛의 pH 변화에 대해 적정 데이타를 수집한다. 실시예에 기술된 바와 같이, 완충 용량은 적정 범위에서 조성물에 첨가된 산과 염기의 당량의 함수로서, pH 데이타에 대한 최소 제곱 회귀선의 기울기이다.

 a. 완충 용량의 실험적 척도 및 표준액
 본 발명의 특정의 바람직한 실시형태에서는, 완충 용량의 척도가 시험적 표준액이 된다. 이와 관련하여 바람직한 실험적 표준액은 소정 농도의 특정 완충제를 포함하고, 물 이외 다른 성분들은 포함하지 않거나 또는 각기 소정 농도로 1 종 이상의 특정 성분들을 포함하는 소정 온도 및 소정 pH 의 소정 용적의 수용액이다.

 본 발명의 다양한 양태와 바람직한 실시형태에 따라 완충 용량을 측정하는데 특히 바람직한 특정 표준액은 실시예 1 및 2 에 기술된 바와 같이, 1 기압의 주위 공기와 평형 상태에 있으며 21 ℃ 에서 기타 구성성분이 없는 순수한 물 중에 pH 5.00 의 10 mM 아세트산 나트륨으로, 바람직하게는 μEq/ml-pH 와 같이 pH 유닛 당 단위 용적당 당량으로 표시된다. 표준액의 완충 용량은 하기 실시예 1, 2 및 3 에 기술되고 본원 다른 곳에서 추가 논의된 바와 같이 실험적으로 계측하여야 한다.

 본 발명의 다양한 양태와 바람직한 실시형태에 따라 완충 용량을 측정하는데 특히 바람직한 특정 표준액은 실시예 1 및 2 에 기술된 바와 같이, 1 기압의 주위 공기와 평형 상태에 있으며 21 ℃ 에서 다른 구성성분이 없는 순수한 물 중에 pH 4.76 의 10 mM 아세트산 나트륨으로, 바람직하게는 Eq/ml-pH 같이 pH 유닛 당 단위 용적당 당량으로 표시된다. 표준액의 완충 용량은 하기 실시예 1, 2 및 3 에 기술되고 본원 다른 곳에서 추가 논의된 바와 같이 실험적으로 계측하여야 한다. 상기에서 명시한 헨더슨 - 하셀바흐 공식에 따르면, pH 4.76 ± 1 pH 유닛 범위에서 이 표준액의 산출된 완충 용량은 pH 유닛 당 밀리리터당 4.09 마이크로당량(4.09 μEq/ml-pH)이다.

 이와 관련하여 본 발명의 다양한 양태 및 바람직한 실시형태에 따라, 다른 pH 범위에서의 표준액으로서 기타 다양한 완충액도 이용가능하다. 이와 관련하여서는 분석 화학 측정에 대해 공지되고 통상적으로 사용되는 것과 같은 기준 완충액이 특히 바람직하다. 다양한 이러한 완충제들이 분석 화학에 대한 교재 및 pH 와 완충 용량의 정밀 측정에 대한 학술논문에 제시되어 있다.

 또한 이와 관련하여 본 발명에서 유용한 것은 기타 문헌 중에서도 다음 문헌들에 기술된 것과 같은 생물학적 완충액이다 : 본 발명에 따른 완충제 및 완충액 그리고 pH 및/또는 완충 용량 표준액으로서 이들의 용도에 관한 전문이 본원에 참조 인용된 문헌인 [TEITZ TEXTBOOK OF CLINICAL CHEMISTRY, 3 rd Ed., Burtis and Ashwood, eds., W.B. Saunders Company, Philadelphia, PA (1999), 특히 표 50-13 내지 50-16]; 본 발명에 따른 완충제 및 완충액 그리고 pH 및/또는 완충 용량 표준액으로서 이들의 용도에 관한 전문이 본원에 참조 인용된 문헌인 [THE TOOLS OF BIOCHEMISTRY, Terrance G. Cooper, John Wiley & Sons, New York, NY (1977), 특히 1 장 페이지 1-35, 더욱 특히 표 1-2, 1-4 및 1-5와 관련 본문]; 및 본 발명에 따른 완충제 및 완충액 그리고 이들의 용도에 관한 전문이 본원에 참조 인용된 문헌인 [PROTEIN PURIFICATION PRINCIPLES AND PRACTICE, 3 rd Ed., Robert K. Scopes, Springer-Verlag, New York, NY (1994), 특히 페이지 160-164, 각별하게는 표 6.4 및 6.5 와 관련 본문, 12 장, 섹션 3, 페이지 324-333, 각별하게는 표 12-4 및 12-5 와 관련 본문, 및 부록 C 전체: Buffers for Use in Protein Chemistry].

 그러나 수중에 용해된 기체 일부가 OH - 및/또는 H 3O + 와 반응하므로, 실험적으로 측정된 표준 용액의 완충 용량은 이론적 수치와 다소 차이가 날 수 있다. 따라서, 표준액은 1 기압의 압력에서 대기와 평형 상태를 이루는 용액으로 규정한다. 또한, 완충 표준액은 산, 염기 또는 완충 용량를 변화시키는 어떠한 방식으로든 아세테이트 완충액의 유효 농도 또는 활성을 변화시킬 수 있는 기타 다른 반응물이 제거된 것과 같이, 그 성분이나 완충 용량을 변화시키지 않는 물질에서 유지되거나, 이러한 물질과만 접촉하여야 한다. 상기 두 가지, 대기 평형 및 용기 불활성이 제공되면, 표준액의 완충 용량은 그 용적과 직접 및 선형 비례하게 된다. 이에 따라, 100 ml 의 완충 용량은 1.00 리터의 1/10 이 되며, 10 ml 의 완충 용량은 1.00 리터의 1/100 이 된다. 따라서, 표준액의 용적은 편의상 조정하고, 이후 이를 목적하는 1 리터로 다시 표준화시킬 수 있다.

 현장용으로 상기 10 mM 아세테이트 완충 용량 표준액을 제조하는 것이 항상 편리한 것은 아니다. 그러나, 아세테이트 완충액과 동일한 방식으로, 다양한 다른 완충제를 사용하여 여러 가지 다른 완충 용량 표준액을 제조 및 사용하는 것이 가능하다. 완충 표준액이 적절히 제조되면, 이는 전술한 아세테이트 완충 표준액에 대해 보정한 후, 현장에서 사용할 수 있다. 이러한 대안적 표준액을 사용하여 얻어지는 결과는 이후 실질적인 왜곡이나 오류 없이 상기 아세테이트 표준액으로 환산하여 표시할 수도 있다.

 이러한 대안적 표준액의 완충 용량은 계산에 의해 보정할 수도 있다. 이를 위해서는, 대안적 표준액의 완충 용량을 직접 측정하고 pH 유닛 당 단위 용적당 mEq 로 나타낸다. 이후, 대안적 표준액에 의거한 측정치는 pH 유닛 당 단위 용적당 mEq 로 표시된 대안적 표준액과 아세테이트 표준액간의 완충 용량의 비율을 사용하여 아세테이트 표준액으로 표준화시킬 수 있다.


 현장 표준액을 기준 표준액으로 부합하는 방법에서 보편적으로 사용되는 이러한 방법을 사용하면, 전술한 아세테이트 완충 표준액은 유사 방법을 사용하여 다른 조성물에 대해 이루어진 본질적으로 다른 척도과 쉽게 비교가능한 임의의 조성물의 완충 용량 측정을 위한 휴대가능하고 측량가능하며 신뢰성 있고 정밀한 기준을 제공한다.

 b. 완충 용량 표준액의 제조
 완충 용량 표준액은 참조 예시된 다음 문헌에서와 같이, 분석 화학계의 잘 - 확립된 방법을 이용하여 제조할 수 있다 : 특히 완충제 및 완충 용량 표준액의 제조 및 용도에 관한 전문이 본원에 참조 인용 된 문헌인 [ANALYTICAL CHEMISTRY, 3 rd Ed., Douglas A. Skoog and Donald M. West. Holt, Rinehart and Winston, New York (1979), 구체적으로 9 장(페이지 186-226), 10 장(페이지 227-233) 및 페이지 583-588 에 기술된 방법]; [TEITZ TEXTBOOK OF CLINICAL CHEMISTRY, 3 rd Ed., Burtis and Ashwood, eds., W.B. Saunders Company, Philadelphia, PA (1999), 특히 완충액 제조 및 보정에 대한 일반 실험 기술에 관한 1 장 및 표 50-13 내지 50-16]; [THE TOOLS OF BIOCHEMISTRY, Terrance G. Cooper, John Wiley & Sons, New York, NY (1977), 구체적으로 1 장, 페이지 1-35 및 표 1-3, 1-4 및 1-5 와 관련 본문]; [PROTEIN PURIFICATION PRINCIPLES AND PRACTICE, 3 rd Ed., Robert K. Scopes, Springer-Verlag, New York, NY (1994), 구체적으로 페이지 160-164, 특히 그중 표 6.4 및 6.5 와 관련 본문, 12 장, 섹션 3, 페이지 324-333, 특히 그중 표 12-4 및 12-5 와 관련 본문, 및 부록 C 전문: Buffers for Use in Protein Chemistry]; 및 [PEMINGTON: THE SCIENCE AND PRACTICE OF PHARMACY, 21 st Ed., Beringer et al. Editors, Lippincott, Williams & Wilkins, Philadelphia, PA (2005), 구체적으로 완충제, 완충액, 완충 용량 등에 관한 부분].

 완충 용량 표준액 제조에 사용된 물은 고도로 정제된, 바람직하게는 milliQ 수와 같은 타입 I 수, 또는 3 중으로 증류된 물이어야 한다. 완충 시약은 순도가 높은 것이어야 하며, 전문, 구체적으로 분석 등급용 물 및 시약에 관한 부분이 본원에 참조 인용된 상기 문헌 [TEITZ and REMINGTON]에 기술된, 분석 화학적 분석에 사용하기 적합한 기준 등급 또는 ACS 시약 등급 시약과 같이 표준 용액의 pH 또는 완충 용량을 변화시킬 수 있는 임의의 물질이 없어야 한다.

 완충 시약의 조성은 정확하게 확립되어야 하며, 완충 시약의 분자량이 각 완충 시약별로 정확히 공지되어야 한다. 사용되는 정확한 시약에 대해 분자량이 제시되어야 하며, 이러한 분자량은 시약내에 존재하는 수화물 같은 부가생성물의 중량을 포함하여야 한다. 분자당 수소 공여자 또는 수소 수용자의 유효 갯수가 각 완충 시약별로 정확하게 공지되어야 하며, 수화물 같은 다른 형태의 비례 배분이 이러한 형태의 혼합물을 포함하는 각 시약별로 공지되어야 한다. 액체 완충 시약의 농도가 정확하게, 바람직하게는 몰수/용적 및 몰수/질량(예, 몰수/리터 및 몰수/gm 또는 kg)으로 공지되어야만 한다. 시약의 중량을 정확하게 계측할 수 있도록 제습을 위해 흡습제를 사용한 건조가 이루어져야 한다.

 일반적으로, 시약 및 기준 등급 화학물질의 공인된 업체에 의해 제공된 정보의 정확성 정도라면 전술한 완충 용량 표준액 제조에 충분하다. 정확한 계측을 위한 흡습성 시약의 건조에 있어서 분석 화학계에서 통상 사용하는 공지된 표준 기술을 사용할 수 있다.

 본원에서 기술된 바에 따르면, 완충 용량 측정을 목적으로 시료 단백질 용액뿐 아니라 완충 용량 표준 용액을 적정하기 위한 산 및 염기 용액, 예를 들면 1 N HCl 및 1N NaOH (단지 둘 만을 거명함)를 제조 및 보정하는데 있어서 잘 - 확립되고 통상적으로 사용되는 분석 화학적 방법을 이용할 수 있다. 특정의 용해 기체와 염기성 용액간의 상호작용 및 이들 용매화로 인한 pH 변화 효과로부터 야기되는 부정확성 요인을 배제시키기 위해, 적정용 NaOH 용액의 제조가 수행되어야 함을 주지하여야 한다. 완충액 및 완충 표준액의 제조 및 보정에 관하여서는 전문, 구체적으로 상기 논의된 바 있는 적정용 표준 용액의 제조에 관한 부분이 본원에 참조 인용된 예시 문헌인 [Skoog and West(1979)] 및 기타 상기 인용 문헌을 참조한다.

 c. 완충 용량의 실험적 계측
 완충 용량을 측정하기 위한 표준액과 시료의 적정은 공지된 통상의 방법을 사용하여 수행할 수 있다. 적정은 수작업으로 수행할 수 있으며, 또한 자동 적정기를 사용하여 수행하는 것도 가능하다. 이와 관련하여 본 발명에 사용하기 적합한 다양한 자동 적정기가 다수 업체에서 시판중에 있다. 이와 관련하여 본 발명에 사용하기 적합한 방법은 전문, 구체적으로 완충 용량의 측정을 목적으로 하는 공지 및 미지 용액의 적정에 관한 부분이 참조 인용된 것으로, 완충 표준액의 제조 및 보정에 관한 상기 인용 문헌에 기술된 바와 동일하다.

 2. 단백질에 의한 완충 및 단백질 완충 용량
 a. 단백질 수소 평형상태 및 완충 용량의 측정
 단백질은 예외없이 다수의 산성 및 염기성 구성성분을 포함하며, 그 결과 단백질의 수소 이온 평형상태는 매우 복잡하다. 실제로, 특정 환경에서 단백질의 수소 이온 평형상태에 대해 완전히 파악하는 것은 현행 이론적 및 계산적 방법의 역량 밖에 있다. 따라서, 단백질 완충 용량의 실험적 계측이 바람직하다. 해당 분야의 전문가가 사용할 수 있고 통상 사용하는 단백질 수소 평형상태의 실험적 정밀 계측에 대해 개발된 방법이 본 발명에 따른 자가 - 완충성 단백질 제형의 개발과 관련하여 단백질의 완충 성질을 계측하는데 매우 적절하다. 이에 따라, 리보뉴클레아제에 대한 탠포드(Tanford) 및 그의 동료들의 pH 적정 연구에서 설명 및 예시된 바와 같은 공지 방법에 의해 본 발명에 따라 단백질의 pH 적정 곡선을 결정할 수 있다. 이는 단백질의 수소 이온 적정 및 단백질의 완충 작용과 완충 용량의 결정에 관한 부분이 본원에서 참조 인용된 문헌인 [C. Tanford, "Hydrogen Ion Titration Curves of Proteins," in T. Shedlovsky (ed.), ELECTROCHEMISTRY IN BIOLOGY AND MEDICINE, John Wiley and Sons, New York, 1955, Ch. 13; C. Tanford and J.D. Hauenstein, J. Am . Chem . Soc. 78, 5287 (1956), C. Tanford, PHYSICAL CHEMISTRY OF MACROMOLECULES, John Wiley and Sons, New York, 1961, 특히 페이지 554-567]을 참조한다.

 그러나, 본 발명은 상기 참고문헌에 기술된 바와 같이 그렇게 정밀한 측정을 요구하지는 않는다. 오히려, 본 발명에 따른 단백질의 완충 특성 및 완충 용량은, 본 발명에 따라 전문, 구체적으로 소정 pH 범위내에서 단백질의 적정 곡선의 실험적 측정에 관한 부분이 본원에 참조 인용된 상기 Skoog(1979), Cooper(1977) 및 Scope(1994)의 문헌과 같이, 분석 화학계 및 생화학계의 표준액 인용 부분에 기술된 방법을 이용하여 측정할 수 있다.

 본 발명에 따른 적정 곡선 및 완충 용량의 측정에 대해서는 이하 실시예에서 다수의 아세테이트 완충액 및 다양한 약학적 단백질과 관련하여 상술되어 있다. 이에 따르면, 단백질의 pH 적정 곡선은 특정 제형에 대해 제한된 소정의 pH 범위에 대해 상기 참고문헌에 기술된 방법에 따라 실험적으로 측정할 수 있다. 많은 면에서, 이들 방법들은 아세테이트 완충액 (실시예에서 예시된)과 같은 소 분자의 적정에 대해 분석 화학계에서 사용되는 것과 동일하다. 그러나 효과적인 제형에 요구되는 형태와 기능을 유지하기 위해서는 단백질 핸들링에 보다 세심한 주의가 이루어져야 한다.

 단백질 적정은 수작업으로 또는 자동화된 적정기를 사용하여 수행할 수 있다. 수작업 적정용 장비와 자동 적정기는 다수 공급 업체 및 판매 업체로부터 용이하게 입수가능하다. 단백질의 pH 적정 곡선과 완충 용량을 측정하는데 적합한 방법은 소정의 pH 범위에서의 아세테이트 완충 표준액의 적정 및 여러 가지 상이한 치료용 단백질의 적정과 관련하여 실시예에 예시되어 있다. 이들 방법들은 본 발명에 따른 다른 단백질의 수소 이온화 반응과 완충 용량을 결정하는데 사용할 수 있다.

 본 발명의 특별한 양태는 용액내 농도의 함수로서 단백질의 완충 용량을 결정하는 것이다. 이와 관련하여 바람직한 방법에서는, 특정 단백질의 용액을 일련의 등급화된 농도로 제조한다. 관심의 pH 범위에서 각 농도별로 단백질에 대해 pH 적정 곡선을 측정한다. 염기 적정 및 산 적정 양자 모두를 사용하여 관심 범위에 대해 적정 곡선을 측정하는 것이 바람직하다. 특정의 바람직한 실시형태에서는, 용액 별로, 첨가된 산 또는 염기의 당량 대 측정된 pH 의 그래프에 데이타가 표기된다. 통상, 약 0.5 내지 1.0 pH 유닛의 범위에 대해, 농도별 적정 데이타는 바람직하게는 최소 제곱 회귀 분석에 의해 측정된 직선과 거의 일치한다. 이와 관련하여 바람직한 실시형태에 있어서, 농도별 단백질의 완충 용량은 회귀선의 기울기(또는 이것의 비율)에 해당되며, pH 유닛 당 ml 당 당량 유닛으로 표시된다. 또한 이와 관련하여 본 발명에서는 단백질의 완충 용량과 그 농도간의 관계가 유용하다. 특정의 바람직한 실시형태에 있어서, 이러한 관계는 완충 용량 대 단백질 농도의 그래프 상에 그려진, 상기 설명에 따라 결정된 완충 용량 데이타의 가장 좋은 직선의 최소 제곱 회귀 분석에 의해 결정된다.
 본 발명에 따른 단백질의 완충 용량에 대한 실험적 데이타는 표준 아세테이트 완충액의 완충 용량과 결부시키는 것이 바람직하다. 즉, 이와 관련하여 본 발명의 특히 바람직한 실시형태에 있어서, 상기와 같이 결정된, 특정 제형내 소정 농도에서의 특정 단백질의 완충 용량은 동일 완충 용량을 가진 표준 아세테이트 완충액의 농도와 동일하게 본다.

 본원에 기술된 실험적 측정이 일반적으로 본 발명의 다양한 양태 및 바람직한 실시형태에 따른 자가 - 완충성 조성물의 제형화에 결정적인 양태이기는 하지만, 후술된 바와 같이, 이러한 조성물(실험적 측정과 연관하여)의 디자인, 제조 및 용도를 이끌어 내는데 이론적 및 계산적 방법을 사용하는 것이 생산적일 수도 있다.

 b. 단백질 수소 이온 평형상태 및 완충 용량의 예측
 단백질내 수소의 이온화는 복잡하지만, 일반적으로는 아미노산 측쇄, 및 말단 아미노 및 카르복실기의 이온화가능한 수소에 의해 규정된 pH 범위로 환산될 수 있다. 폴리펩티드내 말단 카르복실의 pK a는 통상 3.1 근방이다. 아스파르트산과 글루탐산의 측쇄내 산성 수소의 pK a는 4.4 근방이며, 폴리펩티드내 히스티딘의 pK a 는 대략 6.0 범위이다. 말단 아미노기 수소 이온화 pK a 는 통상 7.5 근방이며, 시스테인내 술프히드릴은 8.5 정도의 pK a 를 가진다. 티로신 히드록실과 리신 아민은 둘다 10 근방의 pK a 를 가지며, 아르기닌의 pK a 는 대략 12 의 범위이다.

 형태적 접힘현상은 통상 극성 용매내에서 대형 폴리펩티드와 단백질을 노출된 용매 - 접근가능 영역 및 주변 환경과 거의 또는 전혀 접촉하지 않는 비 - 극성 코어 영역으로 구분한다. 접힘현상은 이들 두 극단 간에 다양한 환경을 만들어 낸다. 또한, 단백질내 특정 아미노산 측쇄 주변의 미소환경은 통상 용매 효과, 이온 결합, 킬레이트화, 착물화, 보조 인자와의 결합 및 해독후 변형(가능한 몇몇 만을 거명함)중 하나 이상에 의해 영향을 받는다. 이들 각각은 단백질내 특정 아미노산 이온화의 pK a 에 영향을 줄 수 있다. 따라서, 해당 단백질내 특정 잔기에 대한 pK a 는 유리 아미노산의 pK a 와는 크게 다를 수 있다.

 실제로, 단백질내 아미노산의 미소환경에 의한 pK a 의 섭동은 단백질 접힘현상 및 접혀진 단백질내 특정 아미노산의 위치와 전하 상태를 연구하는데 사용되곤 한다. 탠포드 등에 의해 보고된 단백질 적정 곡선은 보편적으로 광범위한 특징들로 복잡하다. 통상 일부 이온화 가능한 양성자만이 적정 곡선에서 설명되며, 다른 것들은 명백히 코어 내부에 위치하여 용매에 접근불가능하다. 일부 경우에서 검출될 수 있는 동일 타입의 개별적인 측쇄의 pK a 는 서로 구별될 수 있다. 그러나 다른 것으로 검출되더라도, 이들의 pK a 는 일반적으로 유리 아미노산의 수치에 근접한다.

 단백질의 가장 강력한 완충 작용은 잘못 가정된 것을 수도 있지만, 일반적으로 등전점에서는 일어나지 않는다. 실제로, 완충은 아미노산 측쇄 수소 및 말단 수소에 따라 좌우되므로, 상기에서 논의된 바와 같이 유리 아미노산의 이온화 가능한 수소의 pK a 범위에서 일어난다. 단백질, 특히 다른 것들 중에서도 약산성 pH(pH 4-6)에서 더욱 가용성 및/또는 더욱 안정성을 나타내는 특정 약학적 단백질의 조성물을 제형화하는데 있어서 가장 중요한 것은 아미노산인, 아스파르트산과 글루탐산의 카르 복실 수소의 pK a 범위 즉, pH 4.0 내지 5.5, 특히 4.5 근방에서 일어나는 완충 작용이다.

 소정의 pH 에서 특정 용액중 특정 단백질의 완충 용량을 추정하기 위해서는 다양한 방법들이 이용가능하다. 방법들은 고도의 기술적이고 복잡한 컴퓨터 모델부터 휴대용 계산기로 수행할 수 있는 것까지 있다. 이들 방법중 어느 것도 완벽하거나 완전히 정확하지 않으나, 일부 경우에 있어서는 유용한 추정치를 제공할 수 있다.

 예를 들어, 일부 경우에 있어서 완충 용량의 잠재적으로 유용한 아이디어는 아미노산 조성, 말단 아민과 카르복시기 및 아미노산 측쇄 수소 공여자 및 수용자의 pK a 값(문제의 용매중에서), 단백질 농도 및 용액의 pH에 의거하여 용액내 단백질에 대해 산출될 수 있다.

 예를 들면, 글루탐산(유리 아미노산으로서)의 측쇄 카르복실 수소의 pK a 범위의 pH 에서의 단백질의 완충 용량의 잠재적으로 유용한 추정치는 단백질의 분자량과 이것이 함유하고 있는 글루탐산 잔기의 수로부터 얻을 수 있다. 전자를 후자로 나누면 글루탐산의 당량당 중량 그리고 이에 따라 글루탐산의 pK a 에서의 이온화가능한 수소의 당량당 중량이 얻어진다. 글루탐산 및 아스파르타산 측쇄 카르복실기는 거의 동일한 pK a 를 가지므로, 이 둘에 대한 상기한 계산의 결과는 서로 합산되어 이들의 두 pK a 근방의 범위에서의 완충 용량의 추정치를 산출하게 된다. pK a 에서의 단백질 용액의 완충 용량 추정치는 용액내 단백질의 농도 및 제공된 고유의 인자, 즉 이온화가능한 수소의 당량당 중량으로부터 산출될 수 있다. 농도를 당량당 중량으로 나누면, Eq/용적의 유닛으로 완충 용량에 대한 추정치가 산출된다. 이러한 추정치는, 일부 잔기가 용매에 접근할 수 없는 단백질 영역에 보통 격리되어 있어 실제 완충 용량에 기여하지 못하기 때문에 너무 높게 나오게 된다. 특정의 경우에 있어서는 완충 용량에 대한 격리의 효과를 설명하는 것이 가능할 수도 있다. 예를 들면, 격리의 이론적 또는 실험적 추정치를 반영하는 분할 계수를 적용하여 원래의 계산을 보정할 수 있다.

 이러한 계산은 본원 다른 곳에 설명된 방법에 따른 단백질 완충 용량의 실험적 측정에 비해 일반적으로 유용성 및 정확성이 떨어지게 된다. 그러나 용액내 단백질의 완충 용량의 최대 추정치를 대략 산출하는데에는 유용할 수 있다.

 3. 단백질
 본원에 기재된 발명은 목적하는 제형에 필요한 단백질 농도 등의 파라미터 이내에서 목적 pH 범위에서 충분한 완충 용량을 제공하는 임의의 단백질을 사용하여 실시할 수 있다. 이와 관련하여 바람직한 단백질 중에는 가축 및/또는 인체 치료용 약학적 단백질, 특히 인체 치료용 단백질이 있다. 또한 바람직한 단백질중에는 수용액에 가용성인 단백질, 특히 비교적 고 농도에서 가용성인 단백질 및 장기간 안정한 단백질이 있다. 이외에, 바람직한 단백질로는 목적하는 완충 작용의 pH 근방에서 측쇄 수소 이온화 상수를 가진 비교적 많은 수의 용매 접근가능한 아미노산을 포함하는 단백질이 있다.

 추가로, 본 발명의 바람직한 단백질로는 실험대상 투여 후, 매우 유해한 항원성 반응을 유발시키는 약학적 제형용 단백질이 있다. 이와 관련하여 바람직한 것은 수의학용 및/또는 인체 의학용 단백질, 특히 후자와 관련하여 인체화된 및 인체 단백질이 있다.

 추가로, 본 발명의 바람직한 단백질로는 리간드 - 결합 단백질 및 단백질 리간드를 비롯하여, 특정 표적에 선택적으로 결합하는 단백질이 있다. 항원 - 결합 단백질, 이로부터 유래된 단백질 및 관련 단백질이 이와 관련하여 본 발명의 특히 바람직한 실시형태중에 속한다. 이와 관련하여 매우 바람직한 본 발명의 단백질은 항체 및 전체 또는 부분적으로 항체로부터 유래된 또는 항체를 포함하는 단백질로서, 단지 몇몇을 거명하면: 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 일반적으로 조작된 항체, 하이브리드 항체, 이 - 특이성 항체, 단쇄 항체, 하나 이상의 아미노산 치환, 첨가 및/또는 결실이 이루어진 항체(항체 뮤테인)를 포함하여 일반적으로 변형된 항체, 키메라형 항체, 항체 유도체, 상기한 것들 중 어느 하나로부터 유래되고 또한 유사하게 조작 또는 변형된 이들의 유도체일 수도 있는 항체 단편, 항체 또는 항체나 항체 단편으로부터 유래된 부위를 포함하며, 상기한 것들 중 어느 하나 또는 이들의 변형체나 유도체일 수도 있는 융합 단백질, 항체 또는 항체로부터 유래된 부위를 포함하고, 상기한 것들 중 어느 하나, 또는 이들의 변형체나 유도체를 포함하는 접합체, 및 상기한 모든 것들을 포함하여, 화학적으로 변형된 항체, 항체 단편, 항체 융합 단백질 등이 있다.

 a. 항체, 항체 - 유래 및 항체 - 관련 단백질 등
 본 발명에 따라 특히 바람직한 단백질 중에는 천연 항체에 존재하고 이를 구성하는 것과 동일한 아미노산 서열을 가진 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드와 같은 항체 폴리펩티드, 예를 들면 천연 공급원으로부터 분리한 이러한 폴리펩티드 및 단백질을 포함하여 혈청 및 항혈청에 존재하는 것뿐 아니라, 항체 및 항체 - 관련 폴리펩티드, 및 본 발명에 따른 항체 폴리펩티드 및 단백질을 제조하는데 사용할 수 있는 단백질을 제작하는데 보편적으로 사용하는 몇몇 기술을 거명하면, 하이브리도마 기술에 의해, 내인성 유전자의 활성화에 의해(예를 들면 상동성 또는 비 - 상동성 재조합에 의해), 내인성 전사 제어 영역의 제어 하에서 외인성 유전자의 발현에 의해, 외인성 발현 구성체의 발현에 의해, 반 - 합성에 의해 그리고 신규 합성에 의해 제작된 것들이 있다.

 이들 항체 - 관련 폴리펩티드 및 단백질 중에는 전체 또는 일부에 신규의 아미노산 서열을 가진 것들, 항체 전체 또는 일부분 이상을 포함하는 것들(즉, 천연 항체 폴리펩티드의 아미노산 서열에서 4 이상의 잔기가 동일한 서열을 가진 아미노산의 연속 쇄), 천연 항체와 어떤 방식으로는 일부 일치하지만, 다른 방식으로는 상이한 아미노산 서열을 가진 것들, 천연 복제물 또는 관련 서열과는 동일하되 상이한 아미노산 서열을 포함하지만 1종 이상의 해독 - 후 변형체의 복제물과는 상이한 것들, 및 제 2 의 상이한 항체 폴리펩티드의 일부이거나 이로부터 유래되거나 또는 관련될 수 있고, 천연, 유사 그러나 상이함의 여부와 상관없이 반 - 신규의 아미노산 서열 및/또는 신규의 서열을 포함하는 임의의 다른 폴리펩티드 또는 단백질의 일부이거나 또는 이로부터 유래될 수 있는 하나 이상의 폴리펩티드 영역에 융합된 상기의 임의의 것(일부 또는 전체)으로 일부가 이루어진 것들이 포함된다. 이러한 하이브리드를 본원에서는 일반적으로 융합 폴리펩티드 및/또는 융합 단백질로 지칭한다.

 본원에 기술된 본 발명에 따른 바람직한 단백질 중에는 추가로 상기의 모든 것들에 따른 변형 단백질이 있다. 이러한 변형 단백질 중에는 비 - 공유 결합, 공유 결합 또는 공유 결합과 비 - 공유 결합에 의해 화학적으로 변형된 단백질이 포함된다. 또한, 세포 변형 시스템에 의해 제작될 수 있는 해독 - 후 변형체 또는 효소 및/또는 화학적 방법으로 생체외에서 도입된 또는 다른 방식으로 도입된 변형체를 하나 이상 추가로 포함하는 상기의 것들 모두가 포함된다.

 이와 관련하여 본 발명의 바람직한 단백질 중에는 전형적인 이합체성 (LH) 2 항체를 특정 프로테아제로 분할하여 중쇄를 함께 연결하고 있는 디술피드 결합 위에, 가변 영역과 인접 불변 영역 사이의 중쇄는 분할하되 경쇄는 원상태로 보존되도록 하여 제작된 것과 같은 Fab 단편(들)이 있다. 이러한 분할로, 함께 연결된 중쇄의 나머지 부분을 포함하는 하나의 Fc 단편 및 각기 원상태의 경쇄와 중쇄의 가변 영역을 포함하는 두 개의 이합체성 Fab 단편들이 얻어진다. Fab 단편들은 또한 천연 항체의 분리 및/또는 프로테아제에 의한 분할을 요하지 않는 다른 기술에 의해 제작할 수도 있다.

 또한 바람직한 것은 디술피드 결합 "사이 또는 하단"을 분할하는 프로테아제를 사용하여, Fab 단편과 동일한 방식으로 생산된 것과 같은 Fab 2 단편(들)이다. 결과적으로, 두개의 Fab 단편들은 디술피드 결합에 의해 서로 연결되어 있으며, 하나의 Fab 2 단편으로 유리된다. Fab 2 단편은 원형 항체의 분리 또는 요구된 특이성을 가진 프로테아제에 의한 분할을 필요로 하지 않는 다수의 다른 기술에 의해 제작할 수 있다. 또한, 일 - 및 이 - 특이성 Fab 2 단편들은 둘 다 다양한 통상적 기술에 의해 제작할 수 있다.

 이와 관련하여 바람직한 단백질 중에는 또한 조작된 항체 단편으로, 3 개의 Fab 단편들이 서로 연결되어 있는 Fab 3 단편이 있다. Fab 3 단편은 일-, 이- 또는 삼 - 특이성일 수 있다. 이들은 해당 분야의 전문가에게 공지된 다양한 방법에 의해 제작될 수 있다.

 이와 관련하여 기타 바람직한 단백질 중에는 Fab 단편 또는 Fab 2 단편의 생산에 사용된 동일한 방법에 의해 프로테아제로 분할함으로써 제작된 것과 같은 Fc 단편(들)이 있다. 그러나, Fc 단편의 제작을 위해서는, 경쇄 함유 단편들이 아닌 이합체성 중쇄 함유 단편들을 분리한다. Fc 단편에는 항원 결합 부위는 없으나, 항체 관여 생리학적 과정에서 역할을 하는 효과인자가 포함되어 있다. Fc 단편은 이를 목적으로 해당 분야의 전문가에게 공지되고 일상적으로 사용되는 다양한 기술에 의해 제작될 수 있다.

 이와 관련하여 기타 바람직한 단백질 중에는 단일 - 쇄 가변성 단편("scFv(s)")이 있다. scFv(s)는 면역글로불린의 중쇄와 경쇄의 가변 영역을 연결하여 제작한 융합 단백질이다. scFv 내 중쇄와 경쇄는 통상 단형 연결기인 세린, 글리신에 의해 연결되어 있다. scFv(s)는 이들의 기원이 되는 항체와 동일한 특이성을 가진다. 원래는 파지 디스플레이을 통해 제작되었으나, scFv(s)는 이제 공지된 다양한 방법들에 의해 제작가능하다.

 또한 바람직한 것은 두개의 scFv(s)의 융합체인 Bis-scFv(s)이다. Bis-scFv(s)는 일- 또는 이- 특이성일 수 있다. 다양한 방법들이 공지되어 있으며, 본 발명에 따른 Bis-scFv(s) 제작에 적용할 수 있다.

 이와 관련하여 본 발명에 따라 바람직한 것으로는 또한 미니바디; 일- 및 이- 특이성 디아바디 ; 일-, 이- 및 삼- 특이성 트리아바디 ; 일-, 이-, 삼- 및 사- 특이성 테트라바디 ; VhH 도메인 ; V-NAR 도메인 ; V H 도메인; V L 도메인 ; 카멜 Igs ; Ig NARs ; 및 등이 있다.

 이들 및 그외 다른 것들과 관련하여 본 발명의 다양한 양태 및 바람직한 실시형태에 따른 바람직한 실시형태 중에는 또한 항체의 1 종 이상의 CDR 및/또는 CDR-유래 및/또는 CDR-관련 영역 또는 항체의 1 종 이상의 FR 및/또는 FR-유래 및/또는 FR-관련 영역을 포함하는 단백질이 있다. 이와 관련하여, CDR 은 상보성 결정 영역을 의미하는 것으로; 다시 말해 항체의 항원 특이적 결합 부위내 중요 부분인 항체 경쇄 또는 중쇄의 초가변 영역으로 통상 약 9 내지 12 아미노산 길이를 가진다. 이와 관련하여 FR 은 항체의 골격 영역을 의미하는 것으로 ; 즉 항체의 항원 특이적 결합 부위내에서 CDR 을 제외한 약 15 내지 20 아미노산의 영역을 말한다. 용어 CDR- 유래 및 CDR- 관련 그리고 용어 FR- 유래 및 FR- 관련이라 함은 상기 용어 설명 부분에서 항체 - 유래 및 항체 - 관련이란 용어를 항체와 관련하여 설명한 것과 CDR 및 FR 에서도 동일한 의미를 가진다.

 본원에 기재된 상기 및 본 발명의 기타 양태에 따른 항체, 항체 - 유래 및 항체 - 관련 단백질과 관련하여서는, 전문이, 구체적으로는 본원에 기술된 본 발명에 다른 항체, 특히 생물약학적 항체 그리고 항체 - 유래 및 항체 - 관련 단백질, 특히 항체 - 유래 및 항체 관련 약학적 단백질의 구조 및 조작에 관한 부분이 본원에 참조 인용된 문헌인 [ Protein Engineering: Principles and Practice, Jeffrey L. Cleland and Chares S. Craik, eds. Wiley-Liss, Inc., New York(1996), 본문 중에서 특히 Kelley, Robert F., "Engineering Therapeutic Antibodies," 15장 페이지 399-434 및 Hollinger, P. & Hudson, P., "Engineered antibody Fragments and the rise of single domain," Nature Biotechnology, September 2005, 1126-1136]를 예시로 참조한다.
 상기한 모든 것과 관련하여, 본 발명에 특히 바람직한 것은 인체 투여시 유해한 면역 반응을 야기하지 않는 인체, 인체화된 및 기타 단백질이다. 또한, 본 발명에서 바람직한 것은 비 - 인체 투여시에도 마찬가지로 유해한 면역 반응을 초래하지 않는 상기 모두에 따른 단백질이다.

 이와 관련하여 본 발명에 따른 매우 특히 바람직한 단백질 중에는 전술한 모든 것들을 비롯하여, 항체 및/또는 항체 - 유래된 단백질, 폴리펩티드 또는 단편 등을 포함하는 융합 단백질이 있다. 이와 관련하여 본 발명의 매우 특히 바람직한 융합 단백질 중에는 본원에 예시적으로 기술된 것과 같이, 항체 또는 항체 - 유래된 단백질, 또는 전술한 것과 같은 단편 및 리간드 - 결합 성분을 포함하는 융합 단백질이 있다.

 b. 표적 결합 단백질
 이와 관련하여 본 발명의 바람직한 단백질 중에는 또한 항체 및 기타 유형의 표적 결합 단백질, 및 이와 관련된 또는 이로부터 유래된 단백질, 및 단백질 리간드 및 이로부터 유래된 또는 이에 관련된 단백질이 있다. 이와 관련하여, 특히 바람직한 리간드 - 결합 단백질 중에는 신호 및 효과인자 단백질에 결합하는 단백질, 및 이에 관련된 또는 이로부터 유래된 단백질이 있다.
 항체를 포함하여, 이로부터 유래된 단백질 및 이에 관련된 단백질을 포함하여, 상기한 결합 단백질 중에는 다음 중 하나 이상에 단독 또는 복합체 형태의 결합하는 것들이 있다 : (i) CD3, CD4, CD8, CD19, CD20 및 CD34 를 포함하되 이들로만 한정되지 않는 CD 단백질류 ; (ii) 예를 들면 HER2, HER3, HER4 및 EGF 수용체를 포함한 HER 수용체 단백질류 ; (iii) 세포 부착 분자류, 예를 들면 LFA-1, Mol, p150,95, VLA-4, ICAM-1, VCAM 및 알파 v/베타 3 인테그린 ; (iv) 혈관 내피 성장 인자("VEGF") ; 성장 호르몬, 갑상선 자극 호르몬, 여포 자극 호르몬, 황체형성 호르몬, 성장 호르몬 방출 인자, 부갑상선 호르몬, 뮬러 - 억제 물질, 인체 대식세포 염증 단백질(MIP-1-알파), 에리스로포이에틴(erythropoietin; EPO), 신경 성장 인자, 예를 들면 NGF-베타, 혈소판 - 유래 성장 인자(PDGR), 섬유아세포 성장 인자, 예를 들면 FGF 및 bFGF, 표피 성장 인자(EGF), 형질전화 성장 인자(TGF), 예를 들면 TGF-알파, 및 TGF-베타1, TGF-베타2, TGF-베타3, TGF-베타4 또는 TGF-베타5 를 포함한 TGF-베타, 인슐린 - 유사 성장 인자-I 및 -II(IGF-I 및 IGF-II), des(1-3)-IGF-I(뇌IGF-I) 및 골유도성 인자를 포함하되, 이들로만 한정되지 않는 성장 인자류 ; (v) 인슐린, 인슐린 A-쇄, 인슐린 B-쇄, 프로인슐린 및 인슐린 - 유사 성장 인자 결합 단백질을 포함하되, 이들로만 한정되지 않는 인슐린 및 인슐린 - 관련 단백질류 ; (vi) 다른 것들 중에서, 인자 VIII, 조직 인자, 본 빌레브란트 인자, 단백질 C, 알파-1-안티트립신, 플라스미노겐 활성인자, 예를 들면 유로키나제 및 조직 플라이스노겐 활성인자("t-PA"), 봄바진, 트롬빈 및 트롬보포이에틴 같은 응고 및 응고 - 관련 단백질류 ; (vii) 다른 것들 중에서, M-CSF, GM-CSF 및 G-CSF 을 포함한 콜로니 자극 인자류(CSFs) ; (viii) 알부민, IgE 및 혈액군 항원을 포함하되, 이들로만 한정되지 않는 기타 혈액 및 혈청 단백질류 ; (ix) flk2/flt3 수용체, 비만(OB) 인자, 성장 호르몬 수용체 및 T-세포 수용체를 포함한 수용체 및 수용체 - 관련 단백질류 ; (x) 골 - 유래 신경영양성 인자(BDNF) 및 뉴로트로핀-3, -4, -5 또는 -6(NT-3, NT-4, NT-5 또는 NT-6)을 포함하되, 이들로만 한정되지 않는 신경영양성 인자류 ; (xi) 릴랙신 A-쇄, 릴랙신 B-쇄 및 프로릴랙신 ; (xii) 인터페론 - 알파, -베타 및 -감마를 포함한 인터페론류 ; (xiii) 인터류킨류(ILs), 예 IL-1 내지 IL-10 ; (xiv) AIDS 외피 바이러스 항원을 포함하되, 이것으로만 한정되지는 않는 바이러스 항원류 ; (xv) 당단백질류, 칼시토닌, 글루카곤, 심방성 나트륨 이뇨 인자, 폐 계면활성제, 종양 괴사 인자 - 알파 및 -베타, 엔케팔리나제, RANTES(regulated on activation normally T-cell expressed and secreted), 마우스 고나도트로핀 - 관련 펩티드, Dnase, 인히빈 및 액티빈 ; (xvi) 인테그린, 단백질 A 또는 D, 류마티스양 인자, 면역독소, 골 형태형성 단백질(BMP), 슈퍼옥시드 디스뮤타제, 표면 멤브레인 단백질, 붕괴 촉진 인자(DAF), AIDS 외피, 운반 단백질, 귀환 수용체, 어드레신, 조절성 단백질, 면역접합체(immonoadhesins), 항체 ; 및 (xvii) 상기한 것들 중 어느 하나의 생물학적 활성 단편 또는 변이 체류.

 상기한 모든 것들과 관련하여, 특히 바람직한 것은 효과적인 치료제인 것들, 구체적으로 표적, 특히 상기 제시된 것들로부터 유래된 표적, 이와 관련된 표적 및 이것의 변형체를 포함하여 상기 제시된 것들 중에서 선택된 표적에 결합함으로써 치료 효과를 발휘하는 것들이 있다.

 c. 단백질의 구체적인 예시
 구체적인 단백질을 예시하면 펩티바디를 포함하여, 특정 항체 및 항체 - 관련 단백질, 예를 들면 하기 및 본원 다른 곳에 제시된 것들이 있다 :
 완전 인체화된 및 인체의 OPGL 특이적 항체, 특히 완전 인체화된 모노클로날 항체를 포함하고, OPGL 특이적 항체 및 항체 관련 단백질에 관한 전문이 본원에 참조 인용된 국제 공개공보 번호 WO 03/002713 에 기술된 항체, 특히 상기 문헌 내에 기재된 것에 한정하지 않고 상기 문헌 내에 게시된 서열을 가진 것 : 9H7 ; 18B2 ; 2D8 ; 2E11 ; 16E1 ; 및 22B3 을 포함하며, 상기 문헌 도 2 에 제시된 경쇄 SEQ ID NO : 2 및/또는 도 4 에 제시된 중쇄 SEQ ID NO : 4(이들 각각은 상기 공개공보에 기재된 전문이 본원에 개별적 및 구체적으로 참조 인용됨)를 가진 OPGL 특이적 항체를 포함하는 OPGL 특이적 항체 및 펩티바디 등(또한 RANKL 특이적 항체, 펩티바디 등으로도 지칭됨). 4.5 내지 5.0 및 5.0 내지 5.5 의 pH 범위에서 OPGL 특이적 항체("Ab-hOPGL")의 산 및 염기 적정은 하기 실시예에 기술되어 있다. 이들 pH 범위에서의 Ab-hOPGL 의 완충 용량에 대한 계산 또한 하기 실시예에 기술되어 있다.

 미오스태틴 특이적 항체, 특히 전문, 구체적으로 미오스태틴 특이적 항체에 관한 부분이 본원에 참조 인용된 문헌인 미국 출원 공개공보 번호 2004/0181033 에 기술된 것으로, TN8-19-1 내지 TN9-19-40, TN8-19 con1 및 TN8-19 con2 를 포함한 SEQ ID NOS : 305-351 의 TN8-19 계 펩티바디 ; SEQ ID NOS : 357-383 의 mL2 계 펩티바디 ; SEQ ID NOS : 384-409 의 mL15 계 펩티바디 ; SEQ ID NOS : 410-438 의 mL17 계 펩티바디 ; SEQ ID NOS : 439-446 의 mL20 계 펩티바디 ; SEQ ID NOS : 447-452 의 mL21 계 펩티바디 ; SEQ ID NOS : 453-454 의 mL24 계 펩티바디 ; 및 SEQ ID NOS : 615-631 의 펩티바디(이들 각각은 상기 공개공보에 기재된 전문이 본원에 개별적 및 구체적으로 참조 인용됨)를 포함하되, 이들로만 한정되지 않는 미오스태틴 결합제 또는 펩티바디.

 IL-4 수용체 특이적 항체, 특히 이 수용체에 IL-4 및/또는 IL-13 이 결합함으로써 중개된 활성을 억제하고, 전문, 구체적으로는 IL-4 수용체 특이적 항체에 관한 부분이 본원에 참조 인용된 문헌인 국제 출원 번호 PCT/US2004/03742d 의 국제 공개공보 번호 WO 205/047331 에 기술된 것으로, 특히 상기 문헌에 기술되어 있고, L1H1 ; L1H2 ; L1H3 ; L1H4 ; L1H5 ; L1H6 ; L1H7 ; L1H8 ; L1H9 ; L1H10 ; L1H11 ; L2H1 ; L2H2 ; L2H3 ; L2H4 ; L2H5 ; L2H6 ; L2H7 ; L2H8 ; L2H9 ; L2H10 ; L2H11 ; L2H12 ; L2H13 ; L2H14 ; L3H1 ; L4H1 ; L5H1 ; L6H1(이들 각각은 상기 공개공보에 기재된 전문이 본원에 개별적 및 구체적으로 참조 인용됨)으로 명시된 것을 비 - 한정 포함하는 항체. 4.5 내지 5.0 및 5.0 내지 5.5 의 pH 범위에서의 산 및 염기 적정, 그리고 IL-4 수용체 특이적 항체("Ab-hIL4R")의 상기 범위에서의 완충 용량에 대한 계산은 하기 실시예에 기술되어 있다.


 전문, 구체적으로는 IL-R1 특이적 결합 단백질, 모노클로날 항체에 관한 부분이 본원에 참조 인용된 문헌인 미국 출원 공개공보 번호 US2004/097712A1 에 기술된 것으로, 특히 상기 문헌에 15CA, 26F5, 27F2, 24E12 및 10H7(이들 각각은 상기 언급된 미국 출원 공개공보에 기재된 전문이 본원에 개별적 및 구체적으로 참조 인용됨)로 명시된 것을 포함하되 이들로만 한정되지 않는 인터류킨 1-수용체 1("IL1-R1") 특이적 항체, 펩티바디 및 관련 단백질 등.

 각각의 전문, 구체적으로 Ang2 특이적 항체 및 펩티바디 등에 관한 부분이 본원에 참조 인용된 문헌인 국제 공개공보 번호 WO 03/057134 및 미국 출원 공개공보 번호 US2003/0229023 에 기술된 것으로, 특히 상기 문헌에 기술되어 있고, Ll(N) ; Ll(N) WT ; Ll(N) 1K WT ; 2xLl(N) ; 2xLl(N) WT ; Con4(N), Con4(N) 1K WT, 2xCon4 (N) 1K ; Ll(C) ; Ll(C) 1K ; 2xLl(C) ; Con4(C) ; Con4(C) 1K ; 2xCon4(C) 1K ; Con4-Ll(N) ; Con4-Ll(C) ; TN-12-9(N) ; C17(N) ; TN8-8(N) ; TN8-14(N) ; Con 1(N)을 비 - 한정 포함하는 서열의 것들을 포함하되, 이들로만 한정되지 않으며, 또한 동일한 것으로 전문이 본원에 참조 인용된 문헌인 국제 공개공보 번호 WO2003/030833 에 기술된 것들과 같은 항 - Ang2 항체 및 제형, 특히 상기 문헌에 기술된 바와 같이 다양한 순서의 Ab526 ; Ab528 ; Ab531 ; Ab533 ; Ab535 ; Ab536 ; Ab537 ; Ab540 ; Ab543 ; Ab544 ; Ab545 ; Ab546 ; A551 ; Ab553 ; Ab555 ; Ab558 ; Ab559 ; Ab565; AbFlAbFD ; AbFE ; AbFJ ; AbFK ; AbGlD4 ; AbGClE8 ; AbHlCl2 ; Ab1Al ; Ab1F ; Ab1KAb1P ; 및 Ab1P(이들 각각은 상기 공개공보에 기재된 전문이 본원에 개별적 및 구체적으로 참조 인용됨)를 포함하는 Ang2 특이적 항체 및 펩티바디 및 관련 단백질 등.

 전문, 구체적으로는 이와 관련하여 NGF - 특이적 항체 및 관련 단백질에 관한 부분이 본원에 참조 인용된 문헌인 미국 출원 공개공보 번호 US2005/0074821 에 기술된 것들을 포함하되 이들로만 한정되지 않으며, 특히 상기 문헌에 4D4, 4G6, 6H9, 7H2, 14D10 및 14D11(이들 각각은 상기 공개공보에 기재된 전문이 본원에 개별적 및 구체적으로 참조 인용됨)로 명시된 NGF - 특이적 항체를 포함하되 이들로만 한정되지 않는 NGF 특이적 항체.

 CD22 특이적 항체 및 관련 단백질에 관한 전문이 본원에 참조 인용된 문헌인 미국 특허 5,789,553 에 기술된 것과 같은 CD22 특이적 항체 및 관련 단백질, 특히 인체 CD22 특이적 항체, 예를 들면 인체화된 및 완전 인체의 모노클로날 항체를 포함하되 이들로만 한정되지 않는, 특히 인체 CD22 특이적 IgG 항체를 포함하되 이들로만 한정되지 않는 인체 CD22 특이적 항체, 예시하면 에프라투주맵(Epratuzumab), CAS 레지스트리 번호 501423-23-0에서 인체 CD22 특이적 완전 인체화된 항체를 포함하되, 이들로만 한정되지 않는 인체 - 마우스 모노클로날 hLL2 카파 - 쇄에 디술피드 연결된 인체 - 마우스 모노클로날 hLL2 감마 - 쇄의 이합체. 본 발명의 예시로서, 4.5 내지 5.0 및 5.0 내지 5.5 의 pH 범위에서 CD22 - 특이적 항체("Ab-hCD22")의 산 및 염기 적정은 하기 실시예에 기술되어 있다. 이들 pH 범위에서의 Ab-hCD22 의 완충 용량에 대한 계산 또한 하기 실시예에 기술되어 있다.

 IGF-1 수용체 특이적 항체 및 관련 단백질에 관한 전문이 본원에 참조 인용된 문헌인 국제 특허 출원 번호 PCT/US2005/046493 에 기술된 것으로, 상기 문헌에 LlHl, L2H2, L3H3, L4H4, L5H5, L6H6, L7H7, L8H8, L9H9, LlOHlO, L11H11, L12H12, L13H13, L14H14, L15H15, L16H16, L17H17, Ll8Hl8, L19H19, L20H20, L21H21, L22H22, L23H23, L24H24, L25H25, L26H26, L27H27, L28H28, L29H29, L30H30, L31H31, L32H32, L33H33, L34H34, L35H35, L36H36, L37H37, L38H38, L39H39, L40H40, L41H41, L42H42, L43H43, L44H44, L45H45, L46H46, L47H47, L48H48, L49H49, L50H50, L51H51, 및 L52H52(이들 각각은 상기 국제 출원에 기재된 전문이 본원에 개별적 및 구체적으로 참조 인용됨)로 명시된 IGF-1 특이적 항체를 포함하되 이들로만 한정되지 않는 IGF-1 수용체 특이적 항체 및 관련 단백질.


 B-7 관련 단백질 1("B7RP-1") 특이적 항체(B7RP-1 또한 B7H2, ICOSL, B7h 및 CD275 로 문헌에 지칭되기도 함), 특히 B7RP - 특이적 완전 인체 모노클로날 IgG2 항체, 특히 B7RP-1의 제 1 면역글로불린 - 유사 도메인내 에피토프에 결합하는 완전 인체 IgG2 모노클로날 항체, 구체적으로 상기 모두와 관련하여 활성화된 T 세포상의 천연 수용체인 ICOS 와 B7RP-1 의 상호작용을 억제하는 것들, 이러한 항체 및 관련 단백질에 관한 전문이 본원에 참조 인용된 문헌인 2005 년 7 월 18 일자 제출된 미국 가출원 번호 60/700,265 에 기재되고, 다음과 같이 명시된 항체를 포함하되 이들로만 한정되지 않는 것들 : 16H(경쇄 가변 서열 및 중쇄 가변 서열 SEQ ID NO : 1 및 SEQ ID NO : 7) ; 5D(경쇄 가변 서열 및 중쇄 가변 서열 SEQ ID NO : 2 및 SEQ ID NO : 9) ; 2H(경쇄 가변 서열 및 중쇄 가변 서열 SEQ ID NO : 3 및 SEQ ID NO : 10) ; 43H(경쇄 가변 서열 및 중쇄 가변 서열 SEQ ID NO : 6 및 SEQ ID NO : 14) ; 41H(경쇄 가변 서열 및 중쇄 가변 서열 SEQ ID NO : 5 및 SEQ ID NO : 13) ; 및 15H(경쇄 가변 서열 및 중쇄 가변 서열 SEQ ID NO : 4 및 SEQ ID NO : 12) (이들 각각은 상기 미국 가출원에 기재된 전문이 본원에 개별적 및 구체적으로 참조 인용됨). 산 및 염기 적정 그리고 B7RP-1 특이적 항체("Ab-hB7RP1")의 완충 용량에 대한 측정은 하기 실시예에 기술되어 있다.


 인체화된 모노클로날 항체와 같은 IL-15 특이적 항체, 펩티바디 및 관련 단백질, 특히 IL-15 특이적 항체 및 관련 단백질에 관한 전문이 본원에 참조 인용된 문헌인 미국 출원 공개공보 번호 US2003/0138421 ; US2003/023586 ; US2004/0071702 에 기재되고, 펩티바디를 포함하는, 구체적으로 HuMax IL-15 항체 및 146B7 같은 관련 단백질을 포함하되, 이들로만 한정되지 않는 것과 같은 항체.

 IFN 감마 특이적 항체, 특히 인체 IFN 감마 특이적 항체, 구체적으로 IFN 감마 특이적 항체에 관한 전문이 본원에 참조 인용된 문헌인 미국 출원 공개공보 번호 US2005/0004353 에 기재된 것과 같은 완전 인체 항 - IFN 감마 항체, 구체적으로 예를 들면 상기 문헌에 1118 ; 1118* ; 1119 ; 1121 ; 및 1121* 로 명시된 항체(이들 각각은 상기 미국 출원 공개공보에 기재된 전문이 본원에 개별적 및 구체적으로 참조 인용됨).

 TALL-1 결합 단백질에 관한 전문이 본원에 참조 인용된 문헌인 미국 출원 공개공보 번호 US2003/0195156 에 기재된 것, 특히 표 4 및 5B 의 분자들(이들 각각은 상기 미국 출원 공개공보에 기재된 전문이 본원에 개별적 및 구체적으로 참조 인용됨)과 같은 TALL-1 특이적 항체 및 기타 TALL 특이적 결합 단백질.

 줄기 세포 인자 및 관련 단백질에 관한 전문이 본원에 참조 인용된 문헌인 미국 특허 번호 6,204,363 및 6,207,802 에 기재된 것, 특히 예를 들면 줄기 세포 인자 "STEMGEN TM" 과 같은 줄기 세포 인자(들)("SCF") 및 관련 단백질.

 Flt3 - 리간드 및 관련 단백질에 관하여 본원에 참조 인용된 문헌인 미국 특허 번호 6,632,424 에 기재된 것과 같은 Flt-3-리간드("Flt3L") 및 관련 단백질.

 IL-17 수용체 및 관련 단백질에 관하여 본원에 참조 인용된 문헌인 미국 특허 번호 6,072,033 에 기재된 것과 같은 IL-17 수용체("IL-17R") 및 관련 단백질.

 엠브렐(Embrel)로도 지칭되는 에타너셉트(Etanercept) 및 관련 단백질.

 Actimmune (인터페론-감마-lb), Activase (알테플라제; Alteplase), Aldurazme (라로니다제; Laronidase), Amevive (알레파셉트; Alefacept), Avonex (인터페론 베타-1a), BeneFIX (노나코그 알파; Nonacog alfa), Beromun (타소네르민; Tasonermin), Beatseron (인터페론-베타-lb), BEXXAR (토시투모맵; Tositumomab), Tev-Tropin (소마트로핀; Somatropin), Bioclate 또는 RECOMBINATE (재조합; Recombinant), CEREZME (이미글루세라제; Imiglucerase), ENBREL (에타네르셉트; Etanercept), Eprex (에포에틴 알파; epoetin alpha), EPOGEN/Procit (에포에틴 알파), FABRAZYME (아갈시다제 베타; Agalsidase beta), Fasturtec/Elitek ELITEK (라스부리카제; Rasburicase), FORTEO (테리파라티드; Teriparatide), GENOTROPIN (소마트로핀; Somatropin), GlucaGen (글루카곤; Glucagon), Glucagon (글루카곤, rDNA 기원), GONAL-F (폴리트로핀 알파; follitropin alfa), KOGENATE FS (옥토코그 알파; Octocog alfa), HERCEPTIN (트라스투주맵; Trastuzumab), HUMATROPE (소마트로핀; SOMATROPIN), HUMIRA (아달리뮤맵; Adalimumab), 용액중 인슐린, INFERGEM� (인터페론 알파콘-1), KINERET� (아나킨라; anakinra), Kogenate FS (항우혈병 인자; Antihemophilic Factor), LEUKIN (사르그라모스팀; SARGRAMOSTIM 재조합 인체 과립세포-대식세포 콜로니 자극 인자 (rhuGM-CSF)), CAMPATH (알렘투주맵; Alemtuzumab), RITUXAN� (리툭시맵; Rituximab), TNKase(테넥테플라제; Tenecteplase), MYLOTARG(겜투주맵 옥조가미신; gemtuzumab ozogamicin), NATRECOR (네시리티드; nesiritide), ARANESP (다르베포에틴 알파; darbepoetin alfa), NEULASTA (페그필그라스팀; pegfilgrastim), NEUMEGA (오프렐베킨; oprelvekin), NEUPOGEN (필그라스팀; Filgrastim), NORDITROPIN CARTRIDGES (소마트로핀), NOVOSEVEN (엡타코그 알파; Eptacog alfa), NUTROPIN AQ(소마트로핀), Oncaspar(페가스파르가제), ONTAK(데닐류킨 디프티톡스; denileukin diftitox), ORTHOCLONE OKT(뮤로모나브-CD3; muromonab-CD3), OVIDREL (코리오고나도트로핀 알파; choriogonadotropin alfa), PEGASYS (페그인터페론 알파-2a; peginterferon alfa-2a), PROLEUKIN (알데스류킨; Aldesleukin), PULMOZYME (도르나제 알파; dornase alfa), Retavase (렙테플라제; Reteplase), REBETOL� (리바비린; Ribavirin) 및 INTRON� A(인터페론 알파-2b) 함유 BETRON 병용 치료제, REBIF (인터페론 베타-la), REFACTO (항우혈병 인자), REFLUDAN (레피루딘; lepirudin), REMICADE (인플릭시맵; infliximab), REOPRO (아브식시맵; abciximab), ROFERON�-A (인터페론 알파-2a), SIMULECT (바실릭시맵; baasiliximab), SOMAVERT (페기비소만트; Pegivisomant), SYNAGIS� (팔리비주맵; palivizumab), Stemben (안세스팀; Ancestim, 줄기 세포 인자), THYROGEN, INTRON� A (인터페론 알파-2b), PEGINTRON� (페그인터페론 알파-2b; Peginterferon alfa-2b), XIGRIS� (활성화된 드로트레코긴 알파; Drotrecogin alfa), XOLAIR� (오말리주맵; Omalizumab), ZENAPAX� (다클리주맵; daclizumab), 및 ZEVALIN� (이브리투모맵 티욱세탄; Ibritumomab Tiuxetan).

 d. 서열 변이
 상기 및 하기 모두와 관련하여 특히 바람직한 단백질에는 상기 예시한 결합 단백질, 특히 약학적 결합 단백질의 기준 아미노산 서열, 예를 들면 GenBank 또는 기준 단백질의 기타 기준 서열에 대하여 아미노산 서열이 70% 또는 그 이상, 각별하게는 80% 또는 그 이상, 더욱 각별하게는 90% 또는 그 이상, 더욱 더 각별하게는 95% 또는 그 이상, 특별하게는 97% 또는 그 이상, 더욱 특별하게는 98% 또는 그 이상, 더욱 더 특별하게는 99% 또는 그 이상 동일한 영역을 포함하는 것이 속한다.

 이와 관련하여 동일성은 공지되고 쉽게 입수가능한 다양한 아미노산 서열 분석 소프트웨어를 사용하여 측정할 수 있다. 바람직한 소프트웨어로는 서열 검색 및 배열 문제에 대한 만족스러운 해결책을 고려하여, 스미스 - 워터만(Smith-Waterman) 알고리즘을 시행하는 것이 포함된다. 또한 다른 알고리즘을 사용할 수도 있는데, 이때 속도가 가장 중요한 고려사항이 된다. 이와 관련하여 사용가능한 DNAs, RNAs 및 폴리펩티드의 배열 및 상동성 매칭에 보편적으로 사용되는 프로그램으로는 FASTA, TFASTA, BLASTN, BLASTP, BLASTX, TBLASTN, PROSRCH, BLAZE 및 MPSRCH가 있으며, 후자는 MasPar가 제작한 대규모 병렬 프로세서에 실시하기 위해 스미스 - 워터만 알고리즘을 시행한다.

 상기한 결정에 바람직한 프로그램 중에는 BLASTN, BLASTX 및 BLASTP 프로그램이 있으며, 전자는 폴리뉴클레오티드 서열 비교에 그리고 후자 두 프로그램은 폴리펩티드 서열 비교; 즉 BLASTX는 폴리뉴클레오티드 서열의 세 판독 프레임 모두로부터 폴리펩티드 서열의 비교 및 BLASTP는 단일 폴리펩티드 서열의 비교에 바람직하다.

 BLAST는 비교 실행에 앞서 설정되는 다양한 사용자 한정 파라미터를 제공한다. 그중 일부는 NCBI BLAST 및 인터넷상에서 접근가능한 기타 서열 정렬 프로그램에 의해 제공된 것과 같이, 그래픽 사용자 인터페이스 면에서 다른 것들과 쉽게 식별된다. 세팅과 그 수치들은 서비스 웹 사이트상에 제시 및 설명되어 있으며, 구체적으로 문헌 [BIOINFORMATICS: SEQUENCE AND GENOME ANALYSIS, 2 nd Ed., David W. Mount, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York (2004)]에서, 특히 단백질과 핵산 서열의 비교 및 BLAST 비교와 검색에 관한 3, 4, 5 및 6장; 문헌 [SEQUENCE ANALYSIS IN A NUTSHELL: A GUIDE TO COMMON TOOLS AND DATABASES, Scott Markel and Darryl Leon, O'Reilly & Associates, Sebastopol, California (2003)]에서, 특히 BLAST에 관한 7장을 포함하되, 이들로만 한정되지 않는 입수 용이한 다양한 문헌에 상세히 기술되어 있으며, 이들 문헌들은 전문, 구체적으로 뉴클레오티드 및 폴리펩티드 서열의 비교 및 동일성, 유사성, 상동성 및/또는 기타의 정도에 대한 결정, 특히 시험 서열과 기준 서열의 비교를 통한 이들 간의 동일성 정도(%)의 산출에 관한 부분이 본원에 참조 인용된 것이다.

 이와 관련하여 본 발명의 바람직한 실시형태에 있어서, 서열의 연관성은 NCBI BLAST에서와 같이 BLAST를 사용하여 서열을 비교하기 위한 본 발명의 파라미터의 바람직한 세팅에 관한 전문 및 모든 구체적인 부분이 본원에 참조 인용된 문헌인 [SEQUENCE ANALYSIS IN A NUTSHELL: A GUIDE TO COMMON TOOLS AND DATABASES, Scott Markel and Darryl Leon, O'Reilly & Associates, Sebastopol, California (2003), 페이지 47-51]에 제시된 바와 같이, e = 10을 가진 전술한 BLAST 비교 검색중 어느 하나 또는 다른 것 및 NCBI 웹 서버상에 내정값으로 설정된 모든 다른 파라미터에 의해 환산된 동일성 등급(%)으로 규정된다.

 다음의 참고 문헌들에는 이와 관련하여 서열 비교에 대한 부가적인 정보가 제공되어 있다. 상기한 것과 관련하여 전문, 구체적으로 아미노산 또는 폴리뉴클레오티드 서열의 동일성 및 상동성 결정에 관한 부분, 특히 7 장이 본원에 참조 인용된 문헌인 [GUIDE TO HUMAN GENOME COMPUTING, Ed. Martin J. Bishop, Academic Press, Harcourt Brace & Company Publishers, New York (1994)]. BLAST 프로그램은 전문이 본원에 참조 인용된 문헌인 [Altschul et al., "Basic Local Alignment Research Tool," J Mol Biol 215: 403-410 (1990]에 기술되어 있다. 서열 분석 및 상동성과 동일성 결정에 관한 부가적인 정보는 해당 분야의 전문가에게 공지되고 입수 용이한 다수의 다른 참고문헌 중에서도, 상기한 바에 관한 전문, 구체적으로는 서열 비교 및 동일성과 상동성 결정에 관한 부분이 본원에 참조 인용된 문헌인 다음 문헌들에 제공되어 있다: NUCLEIC ACID AND PROTEIN SEQUENCE ANALYSIS: A PRACTICAL APPROACH, Eds. M. J. Bishop and C. J. Rawings, IRL Press, Oxford, UK (1987); PROTEIN STRUCTURE: A PRACTICAL APPROACH, Ed. T. E. Creighton, IRL Press, Oxford, UK (1989); Doolittle, R. F.: "Searching through sequence databases," MetEnz. 183: 99-110 (1990); Meyers and Miller: "Optimal alignments in linear space" Comput . Applica . in Biosci 4: 11-17 (1988); Needleman and Wunsch: "A general method applicable to the search for similarities in amino acid sequence of two proteins," J Mol Biol 48: 443-453 (1970) and Smith and Waterman "Identification of common molecular subsequences," J Mol Biol 147: 1950 et seq. (1981).

 이와 관련하여 특히 바람직한 실시형태는 전술한 기준 단백질 활성의 50% 내지 150 % 를 가지는 것이고, 이와 관련하여 특히 매우 바람직한 실시형태는 기준 단백질 활성의 60 % 내지 125 % 를 가지는 것이며, 더욱 더 매우 바람직한 실시형태는 기준 단백질 활성의 75 % 내지 110 % 를 가지는 것이고, 한층 더 매우 바람직한 실시형태는 기준 단백질 활성의 85 % 내지 125 % 를 가지는 것이며, 더욱 한층 더 매우 바람직한 실시형태는 기준 단백질 활성의 90 % 내지 110 % 를 가지는 것이다.

 4. 제형
 단백질 약제의 제형화에 통상적으로 사용되는 다수의 시약 및 방법들은 본 발명의 다양한 양태 및 바람직한 실시형태에 따른 자가 - 완충성 단백질 조성물의 제형화에 사용할 수 있다. 그러나, 본 발명에 띠른 자가 - 완충성 단백질 제형에 있어서, 완충은 통상의 제형의 경우에서와 같이 완충제에 의해서가 아닌, 단백질 자체에 의해 거의 전적으로 제공된다. 또한, 본 발명의 다양한 양태 및 바람직한 실시형태에 따른 자가 - 완충성 단백질 제형에는 이러한 완충제가 거의 존재하지 않는다.

 그러나, 다수의 다른 경우에 있어서, 본 발명의 다양한 양태 및 실시형태에 따른 자가 - 완충성 단백질 조성물은 단백질의 제형화에 통상적으로 사용되는 시약 및 방법, 특히 가축용 및 인체용 약제를 포함한 약제의 제형화에 사용되는 시약 및 방법, 각별하게는 가축용 및 특히 인체용 단백질 약제를 제형화하는데 적합한 시약 및 방법을 사용하여 제형화할 수 있다.

 이에 따라서, 해당 분야에 공지된 통상의 약제를 제형화 및 사용하기 위한 다수의 방법 및 성분들은 본 발명의 다양한 양태 및 바람직한 실시형태에 따른 자가 - 완충성 단백질 제형의 디자인, 제조 및 사용에 사용할 수 있다. 이러한 방법 및 성분들은 이와 관련하여 입수 용이한 몇몇 참고문헌으로 거명되는 문헌으로서, 전문, 구체적으로는 본 발명의 다양한 양태 및 바람직한 실시형태에 따른 단백질의 자가 - 완충성 제형에 사용될 수 있는 통상적인 성분 및 방법에 관한 부분이 본원에 참조 인용된 문헌인 [REMINGTON: THE SCIENCE AND PRACTICE OF PHARMACY, 21 st Ed.; Beringer et al. Editors, Lippincott, Williams & Wilkins, Philadelphia, PA (2005)]; [ANSEL'S PHARMACEUTICAL DOSAGE FORMS AND DRUG DELIVERY SYSTEMS, 8 th Ed., Allen et al, Editors, Lippincott, Williams & Wilkins, Philadelphia, PA (2005)]; 및 [PHARMACEUTICAL FORMULATION OF PEPTIDES AND PROTEINS, Sven Frokjaer and Lars Hovgaard, Editors, CRC Press, Boca Raton, Florida (2000)]에 기술되어 있다.

 이와 관련하여 유용한 부가적 방법 및 성분들은 다른 것들 중에서도 전문, 구체적으로는 본 발명에 따른 약학적으로 허용가능한 자가 - 완충성 단백질 제형에 관한 부분이 본원에 참조 인용된 문헌인 US 6,171,586; WO 2005/044854; US 6,288,030; US 6,267,958; WO 2004/055164; US 4,597,966; US 2003/0138417; US 6,252,055; US 5,608,038; US 6,875,432; US 2004/0197324; WO 02/096457; US 5,945,098; US 5,237,054; US 6,485,932; US 6,821,515; US 5,792,838; US 5,654,403; US 5,908,826; EP 0 804 163; 및 WO 2005/063291 에 기재되어 있다.

 성분의 다양한 특정 양태 및 제형의 특정 형태에 관해서는 하기에 예시적으로 추가 설명되어 있다. 이렇게 제공된 설명은 본 발명의 다양한 양태 및 실시형태에 따른 자가 - 완충성 단백질 제형에 가능한 방법 및 조성물을 포괄하는 것도, 또한 어떠한 방식으로든 배제하는 것도 아니다.

 본 발명의 다양한 양태의 바람직한 실시형태에서, 자가-완충성(self-buffering) 단백질의 제형은 단백질 및 담체를 포함하며, 상기 담체는 경우에 따라서, 다음 중에서 하나 또는 그 이상으로 본원에서 다양하게 언급될 수 있다 : 부형제, 1 차 부형제, 희석제, 1 차 희석제, 1 차 담체, 용매 및/또는 1 차 용매. 광범위한 의미에서, 담체는 조성물의 상(phase) 및/또는 이의 용도에 따라 알맞게 기체, 액체 또는 고체일 것이다. 이러한 관점에서 본 발명의 몇몇 실시형태에서, 담체는 단백질이 분산될 수 있는 분말과 같은 고체 형태이다. 이러한 관점에서의 바람직한 실시형태에서, 담체는 액체, 특히 자가-완충성 단백질이 고도로 가용성이며, 특히 바람직한 완충능(buffer capacity)을 제공하는 농도에서 액체 형태이다. 액상의 담체는 유기 또는 비-유기일 것이다. 바람직하게 이들은 수용성이며, 가장 바람직하게 이들은 주로, 또는 완전히 순순한 물로 이루어져 있다.

 본 발명의 다양한 양태와 실시형태에 따른 약학적 용도에 적합한 제형은, 예를 들어, 멸균 과정 (일반적으로 활성제와 혼합하기 전에 적용됨) 및 저장 기간의 조건과 같은 과정 및 조건에 맞게 양립해야 함을 인지할게될 것이다.

 거의 변함없이, 본 발명의 수많은 양태와 실시형태에 따른 제형은 부형제 및 그 밖의 다른 약학적 제제를 포함하지만 이것으로 한정되지 않은 부가적인 성분을 함유할 것이다. 그럼에도 불구하고, 본 발명의 따른 제형은 자가-완충성 제형이며, 여기에서 완충능(buffer-capacity)은 본원의 그 밖의 다른 곳에서 기재한 바와 같이, 실질적으로 또는 전적으로 1 차 단백질 자체에 의해 제공된다.

 본 발명의 다양한 양태와 실시형태에 따른 제형은, 하기에 기재한 바와 같이, 예를 들어 제형 및/또는 1 차 폴리펩티드 및/또는 단백질의 삼투압, 삼투 몰농도, 점도, 정화도, 색상, 삼투성, 향기, 멸균성, 안정성, 용해나 또는 방출 속도, 흡수 또는 침투를 변경시키고, 유지하거나, 또는 보존하기 위한 성분을 포함하지만, 이것으로 제한하지 않는 부형제, 그 밖의 다른 것들을 함유할 것이다.


 제형은 예를 들어, 제형화하려는 특정 단백질, 제형 내에 포함될 수 있는 그 밖의 다른 약학적 제제와 같은 다른 활성 제제, 투여하고자 하는 경로, 사용하려는 투여 방법, 투여량, 투여 빈도 및 수송 형태, 그밖의 다른 요소에 따라 달라질 것이다.

 본 발명의 다양한 양태의 특정 바람직한 실시형태에 따른 제형은 단백질, 바람직하게 약학적 단백질 및 용매를 포함하는 조성물을 제공하며, 상기 단백질은 유닛 부피 당 대략 적어도 다음의 완충능을 가진다 : 본원의 실시예 1 또는 2 및 그 밖의 다른 곳에 기재된 pH 5.0 내지 4.0 또는 pH 5.0 내지 5.5 의 범위에 걸쳐 측정된 2.0 또는 3.0 또는 4.0 또는 5.0 또는 6.50 또는 8.00 또는 10.0 또는 15.0 또는 20.0 또는 30.0 또는 40.0 또는 50.0 또는 75.0 또는 100 또는 125 또는 150 또는 200 또는 250 또는 300 또는 350 또는 400 또는 500 또는 700 또는 1,000 또는 1,500 또는 2,000 또는 2,500 또는 3,000 또는 4,000 또는 5,000 mM 아세트산 나트륨 완충용액.

 본 발명의 다양한 양태의 특정 바람직한 실시형태에 따른 제형은 자가-완충성 단백질 조성물, 특히 약학적 단백질 조성물을 제공하며, 여기에서, 단백질의 완충능은 배제하고, 조성물의 유닛 부피 당 완충능은 본원의 실시예 1 또는 2 및 그 밖의 다른 곳에 기재된 pH 5.0 내지 4.0 또는 pH 5.0 내지 5.5 의 범위에 걸쳐 측정된 1.0 또는 1.5 또는 2.0 또는 3.0 또는 4.0 또는 5.0 mM 아세트산 나트륨 완충용액과 동일하거나 또는 그 미만이다.

 본 발명의 다양한 양태의 특정 바람직한 실시형태에 따른 제형은 단백질과 용매를 포함하는 자가-완충성 단백질 조성물, 특히 약학적 단백질 조성물을 제공하며, 여기에서 조성물의 pH 에서, 단백질의 완충능은 대략 적어도 다음과 같다 : 하나의 pH 유닛의 pH 에서의 변화 및 리터 당 1.00 또는 1.50 또는 1.63 또는 2.00 또는 3.00 또는 4.00 또는 5.00 또는 6.50 또는 8.00 또는 10.0 또는 15.0 또는 20.0 또는 30.0 또는 40.0 또는 50.0 또는 75.0 또는 100 또는 125 또는 150 또는 200 또는 250 또는 300 또는 350 또는 400 또는 500 또는 700 또는 1,000 또는 1,500 또는 2,000 또는 2,500 또는 3,000 또는 4,000 또는 5,000 mEq/ℓ/pH 유닛.

 본 발명의 다양한 양태의 특정 바람직한 실시형태에 따른 제형은 단백질과 용매를 포함하는 자가-완충성 단백질 조성물, 특히 약학적 단백질 조성물을 제공하며, 여기에서, 단백질을 배제하고, 조성물의 pH 에서 조성물의 유닛 부피 당 완충능은 본원의 실시예 1 또는 2 및 그 밖의 다른 곳에 기재된 pH 5.0 내지 4.0 또는 pH 5.0 내지 5.5 의 범위에 걸쳐 측정된 0.50 또는 1.00 또는 1.50 또는 2.00 또는 3.00 또는 4.00 또는 5.00 또는 6.50 또는 8.00 또는 10.0 또는 20.0 또는 25.0 mM 아세트산 나트륨 완충용액과 동일하거나 또는 그 미만이다.

 본 발명의 다양한 양태의 특정 바람직한 실시형태에 따른 제형은 단백질과 용매를 포함하는 자가-완충성 단백질 조성물, 특히 약학적 단백질 조성물을 제공하며, 여기에서 바람직한 pH 에서, 단백질은 적어도 약 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 99.5 % 의 조성물의 완충능을 제공한다.

 본 발명의 다양한 양태의 특정 바람직한 실시형태에 따른 제형은 단백질과 용매를 포함하는 자가-완충성 단백질 조성물, 특히 약학적 단백질 조성물을 제공하며, 여기에서 단백질의 농도는 약 200 내지 400 또는 20 내지 300 또는 20 내지 250 또는 20 내지 200 또는 20 내지 150 mg/ml 이다.

 본 발명의 다양한 양태의 특정 바람직한 실시형태에 따른 제형은 단백질과 용매를 포함하는 자가-완충성 단백질 조성물, 특히 약학적 단백질 조성물을 제공하며, 여기에서 단백질의 완충작용에 의해 유지되는 pH 는 약 3.5 내지 8.0 또는 4.0 내지 6.0 또는 4.0 내지 5.5 또는 4.5 내지 5.5 이다.

 본 발명의 다양한 양태의 특정 바람직한 실시형태에 따른 제형은 단백질과 용매를 포함하는 자가-완충성 단백질 조성물, 특히 약학적 단백질 조성물을 제공하며, 여기에서 염의 농도는 150 mM 또는 125 mM 또는 100 mM 또는 75 mM 또는 50 mM 또는 25 mM 미만이다.

 본 발명의 다양한 양태의 특정 바람직한 실시형태에 따른 제형은 단백질과 용매를 포함하는 자가-완충성 단백질 조성물, 특히 약학적 단백질 조성물을 제공하며, 하나 또는 그 이상의 약학적으로 용인가능한 염 ; 삼투성 평형 제제 [osmotic balancing agent 또는 삼투성 제제(tonicity agents)] ; 항-산화제 ; 항생물질 ; 항진균제 ; 부피 조정제 ; 동결건조 보호제(lyoprotectants) ; 항-발포제 ; 킬레이트화제 ; 보존제 ; 착색제 ; 진통제 ; 또는 부가적인 약학적 제제를 추가로 포함한다.

 본 발명의 다양한 양태의 특정 바람직한 실시형태에 따른 제형은 단백질과 용매를 포함하는 자가-완충성 단백질 조성물, 특히 약학적 단백질 조성물을 제공하며, 하나 또는 그 이상의 약학적으로 용인가능한 폴리올 [저장성(hypotonic), 등장성 또는 고장성(hypertonic), 바람직하게 대략적인 등장성, 특히 바람직하게 등장성], 특별히 바람직하게 모든 하나 또는 그 이상의 소르비톨, 만니톨, 수크로스, 트리할로스, 또는 글리세롤, 특별히 바람직하게 약 5 % 소르비톨, 5 % 만니톨, 9 % 수크로스, 9 % 트리할로스 또는 2.5 % 글리세롤, 이러한 관점에서 매우 특별하게 5 % 소르비톨, 5 % 만니톨, 9 % 수크로스, 9 % 트리할로스 또는 2.5 % 글리세롤을 추가로 포함한다.

 본 발명의 여러 양태 중 바람직한 특정 실시형태에 따른 제형은 단백질 및 용매를 포함하고, 추가로 1 종 이상의 약학적으로 허용되는 계면활성제, 바람직하게는 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, 소르비탄의 다른 지방산 에스테르, 폴리에톡실레이트 및 폴록사머 188 중 1 종 이상, 특히 바람직하게는 폴리소르베이트 20 또는 폴리소르베이트 80 을, 바람직하게는 대략 0.001 내지 0.1 % 의 폴리소르베이트 20 또는 폴리소르베이트 80, 매우 바람직하게는 대략 0.002 내지 0.02 % 폴리소르베이트 20 또는 폴리소르베이트 80, 특히 0.002 내지 0.02 % 폴리소르베이트 20 또는 폴리소르베이트 80 을 포함하는 자가-완충성 단백질 조성물, 특히 약학적 단백질 조성물을 제공한다.

 본 발명의 여러 양태 중 바람직한 특정 실시형태에 따른 제형은 단백질 및 용매를 포함하는 자가-완충성 단백질 조성물을 포함하며, 이때 단백질은 약학적 작용제이며, 조성물은 동물 또는 인간 의학적 환자의 치료에 적합한 멸균제형이다.

 또한, 본원에 기재된 본 발명의 여러 양태 및 실시형태에 따른 제형 중에는 앞서 기재한 동결건조 조성물이 포함되며, 특히 재구성하였을 때, 상기와 본원의 다른 곳에서 언급한 제형을 제공하는 동결건조 조성물이 포함된다.

 a. 부형제 및 기타 추가 성분
 앞서 논의한 바와 같이 본 발명의 양태에 따른 특정 실시형태는 자가-완충성 단백질 조성물, 특히 단백질, 구체적으로 약학적 단백질 이외에, 이 단락 및 본원의 다른 곳에서 예시한 것과 같은, 부형제 1 종 이상을 포함하는 약학적 단백질 조성물을 제공한다. 이와 관련하여, 본 발명에는 예를 들면, 점도 조절과 같이, 제형의 물리적, 화학적 또는 생물학적 물성을 조정하는 등의 다양한 목적과, 효과를 개선하고/하거나 예를 들면, 제조, 운송, 보관, 사용전 조제, 투여 중에 그리고 이후에 발생하는 스트레스로 인해 단백질이 분해되고 변질되는 것을 방지하기 위해 제형화 및 공정을 안정화하기 위한 공정들을 위해 부형제들이 사용될 수 있다.


 이와 관련하여 유용한 다양한 부형제가 단백질 안정화 및 제형 재료 및 방법에 유효하다. Arakawa 등의 Solvent interactions in pharmaceutical formulations, Pharm Res. 8(3): 285-91 (1991); Kendrick 등의 Physical stabilization of proteins in aqueous solution, in: RATIONAL DESIGN OF STABLE PROTEIN FORMULATIONS: THEORY AND PRACTICE, Carpenter and manning, eds. Pharmaceutical biotechnology. 13:61-84 (2002), 및 Randolph 등의 Surfactant-protein interactions, Pharm Biotechnol. 13: 159-75 (2002). 상기 문헌들은 모두 본원에 참조문헌으로 인용되었으며, 특히 일부분이 본 발명에 따른 자가-완충성 단백질 제형과 동일한 부형제 및 방법, 특히 동물 및/또는 인간 의학 용도를 위한 단백질 제약 상품 및 방법에 대한 것과 관련이 있다.

 본 발명에 유용한 다양한 부형제는 표 1 에 기재하였고, 하기에 추가로 기재하였다.

 
표 1
  i.
 본 발명의 특정 바람직한 실시형태에 따르면, 예를 들면, 이온 강도 및/또는 자가-완충성 제형의 등장성을 조정하고/하거나 본 발명에 따른 자가-완충성 단백질 조성물 내 자가-완충성 단백질 또는 다른 성분의 용해도 및/또는 물리적 안정성을 개선하기 위해 염을 사용할 수 있다.

 널리 알려진 바와 같이, 이온들은 단백질 표면에서 전하를 띤 잔기와 결합하고, 단백질 내 전하를 띤 극성 관능기를 차단하며, 그들의 서로 끌어당기고 밀쳐내는 상호작용의 강도를 줄임으로써 단백질의 자연 상태를 안정화할 수 있다. 이온은 또한 단백질의 변성된 펩티드 연결기 (-CONH) 에 결합하여 단백질의 변성 상태를 안정화할 수 있다. 그밖에, 단백질 내에서의 전하를 띤 극성 관능기들 간의 이온성 상호작용은 분자간 정전기적 상호작용을 줄여 단백질이 응집하고 불용성을 띠는 것을 방지하거나 줄일 수 있다.

 이온성 물질들은 단백질에 대한 효과에 따라 확연히 구별된다. 이온 및 그들의 효과에 대한 여러 카테고리 등급화가 개발되었으며 본 발명에 따른 자가-완충성 단백질 조성물을 제형화하는데 사용될 수 있다. 한 예로는 호프마이스터 (Hofmeister) 시리즈가 있다. 이는, 용액 중에서 단백질의 구조적 안정성에 대한 효과로 이온성 및 극성 비이온성 용질의 등급을 결정한다. 안정화 용질은 "코스모트로픽 (kosmotropic)이라 부른다. 불안정화 용질은 "카오트로픽 (chaotropic)" 이라 부른다. "코스모트로프 (kosmotrope)" 는 통상적으로 용액으로부터 단백질들이 침전 (염석, salting out)되는 고농도 (예를 들면, 1 몰농도 황산 암모늄 이상)에 사용된다. "카오트로프 (chaotrope)" 는 통상적으로 단백질을 변성시키고/거나 용해 (염용, salting in)하는데 사용된다. 이온들의 염용과 염용에 대한 상대적인 효과는 호프마이스터 시리즈에 있어서 그들의 위치를 결정한다.

 앞서 논의한 유용성 및 단점에 더하여, 염들은 단백질 제형의 점도를 줄이는데 효과적이며 본 발명에서 그러한 용도로 사용될 수 있다.

 본 발명의 바람직한 실시형태에 따른 비경구용 제형에서 등장성을 유지하고, 단백질 용해도 및/또는 안정화도를 개선하고, 점도 특성을 개선하고, 단백질 안정화도 및 응집성에 대한 유해한 효과를 피하고 염-매개 단백질 분해를 방지하기 위해, 본 발명의 여러 바람직한 실시형태에 따른 자가-완충성 제형 중의 염 농도는 150 mM (1가 이온) 내지 150 mEq/l (다가 이온)이다. 이와 관련하여, 본 발명의 특정 바람직한 실시형태에서는 전체 염농도가 약 75 mEq/l 내지 약 140 mEq/l이다.

  ii . 아미노산
 본 발명의 여러 바람직한 실시형태에 따른 단백질 제형에 유리 아미노산이 부피 조정제, 안정화제 및 항산화제로 사용될 수 있다. 그러나, 본 발명에 따른 자가-완충성 단백질 제형에 포함된 아미노산은 완충 작용을 제공하지는 않는다. 이러한 연유로 인해, 현저한 완충 능력을 갖는 것들은 사용되지 않으며, 현저한 완충 작용을 보이는 pH 범위에서도 사용되지 않거나 낮은 농도에서만 사용되어 그러한 완충 능력이 제형 내에서 중요하지 않도록 한다. 이는 특히 통상적으로 약학적 제형에 완충제로 사용되는 히스티딘과 기타 아미노산들의 경우에 그러하다.

 위의 사항을 고려할 경우, 라이신, 프롤린, 세린 및 알라닌이 제형내에서 단백질을 안정화하는데 사용될 수 있다. 글리신은 정확한 케이크 구조 및 특성을 보장하는 동결건조에 유용하다. 결과적으로, 이는 동결건조 제형 및 재구성 동결건조물에 통상적인 성분으로, 뉴메가 (Neumega ), 제노트로핀 (Genotropin ), 및 후마트로프 (Humatrope ) 등이 있다. 알기닌은 액상 및 동결건조 제형 모두에서 단백질 응집을 억제하는데 유용할 수 있으며, 액티베이스 (Activase ), 아보넥스 (Avonex ) 및 엔브렐 (Enbrel ) 액상 등이 있다. 메티오닌은 항산화제로 유용하다.

  iii . 폴리올
 폴리올은 당, 예를 들면, 만니톨, 수크로스 및 소르비톨, 및 다가 알콜, 예를 들면, 글리세롤 및 프로필렌 글리콜을 포함하며, 상기 논의한 용도로 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 및 관련 물질을 포함한다. 폴리올은 코스모트로픽이다. 이들은 액상 및 동결건조 제형 모두에서 유용한 안정화제로 물리적 및 화학적 분해 과정으로부터 단백질을 보호한다. 폴리올은 또한 제형의 등장성을 조정하는데 유용하다.

 이와 관련하여, 본 발명에 유용한 폴리올로는 예를 들면, 루킨 (Leukine ), 엔브렐-리오 (Enbrel -Lyo) 및 베타세론 (Betaseron )과 같이 동결 건조 제형에서 케이크의 구조적 안정성을 보장하는데 통상적으로 사용되는 만니톨이 있다. 일반적으로 동결건조보호제, 예를 들면 수크로스와 함께 사용된다. 소르비톨 및 수크로스는 등장성을 조정하는데 바람직한 약물 중 하나이며, 운송 중의 동결-해동 스트레스와 제조 공정 중의 벌크 제조로부터 약물을 보호하는 안정화제이다. 글루코스 및 락토스와 같은 환원당 (유리 알데하이드 또는 케톤기를 함유함)은 글리케이트 표면 라이신 및 알기닌 잔기일 수 있다. 따라서, 일반적으로 이들은 본 발명에 따른 사용에 바람직한 폴리올은 아니다. 그밖에, 수크로스와 같이 산성 조건에서 프럭토스와 글루코스로 가수분해되어 결과적으로 당화를 일으키는 이런 반응성 물질을 형성하는 당은 본 발명의 아미노산으로 바람직하지 않다. PEG 는 냉동보호제로서 단백질을 안정화하는데 유용하고 본 발명에 사용될 수 있으며, 예로는 재조합 (Recombinate )가 있다.

  iv . 계면활성제
 단백질 분자는 표면에 흡착되기 쉬우며 공기-액체, 고체-액체 및 액체-액체 계면에서 변성되어 응집되기 쉽다. 이러한 효과는 일반적으로 단백질 농도에 반비례한다. 이러한 유해한 상호작용은 일반적으로 단백질 농도에 반비례하며, 상품의 운반 및 취급 중에 발생하는 것과 같은 물리적 흔들림에 의해 심해진다.

 계면활성제는 일상적으로 사용되어 표면 흡착을 방지하거나, 최소화하거나 줄인다. 이와 관련하여, 본 발명에 유용한 계면활성제로는 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, 다른 소르비탄 폴리에톡실레이트의 지방산 에스테르 및 폴록사머 188 이 있다.

 계면활성제는 또한 단백질의 구조적 안정성을 제어하는데 통상적으로 사용된다. 이와 관련한 계면활성제의 사용은 단백질 특이적으로, 임의의 주어진 계면활성제가 특정 단백질을 안정화하면서 다른 단백질은 불안정화할 수 있다.

 폴리소르베이트는 산화성 분해되기 쉬우며, 종종 단백질 잔기 측쇄, 특히 메티오닌의 산화를 초래하는데 충분한 양의 과산화물을 함유한다. 결과적으로, 폴리소르베이트는 주의해서 사용해야 하며, 사용될 경우 가장 적은 유효 농도로 사용되어야 한다. 이와 관련하여, 폴리소르베이트는, 부형제가 이들의 가장 적은 유효 농도로 사용되어야 한다는 일반적인 법칙의 좋은 예이다.

  v. 항산화제
 다양한 공정이 약학적 제형에 있어서의 단백질의 유해 산화를 초래할 수 있다. 주변 산소 및 온도를 적정 수준으로 유지하고 빛에 대한 노출을 피하여 제약 제형에서 단백질의 유해 산화를 어느 정도 예방할 수 있다. 항산화성 부형제는 또한 단백질의 산화성 분해를 방지하기 위해 사용될 수 있다. 이와 관련하여 유용한 항산화제는 환원제, 산소/유리-라디칼 스캐빈저 및 킬레이트제이다. 본 발명에 따른 치료용 단백질 제형에 사용되는 항산화제는 수용성이고 상품의 유효기간 내내 활성을 유지할 수 있는 것이 바람직하다. 이와 관련하여 EDTA 는 본 발명에 따른 바람직한 항산화제이며, 산성 섬유아세포 성장 인자의 제형 및 키네렛 (Kineret ) 및 온택 (Ontak )과 같은 상품에 사용된 것과 꽤 동일한 방법으로 본 발명에 사용될 수 있다.

 항산화제는 단백질을 손상시킬 수 있다. 예를 들면, 글루타티온과 같은 환원제는 분자간 이황화 결합을 분열시킬 수 있다. 그리하여, 본 발명에 사용하기 위한 항산화제는 제형 내에서 단백질을 손상시킬 수 있는 가능성을 없애거나 충분히 줄이도록 선택한다.

  vi . 금속 이온
 본 발명에 따른 제형은 단백질 보조-인자 (co-factor)이며, 특정 인슐린 현탁액을 형성하는데 필수적인 아연과 같이, 단백질 배위결합물을 형성하는데 필수적인 금속 이온을 포함할 수 있다. 금속 이온은 또한 단백질을 분해하는 특정 과정을 억제할 수 있다. 그러나, 금속 이온은 단백질을 분해하는 물리적 및 화학적 공정에 촉매로 작용할 수도 있다.


 마그네슘 이온 (10-120 mM)은 아스파르트산을 이소아스파르트산으로 이성질체화하는 것을 억제하는 데 사용될 수 있다. Ca +2 이온 (100 mM 이하)은 인간 데옥시리보누클레아제 (rhDNase, 풀모자임 (Pulmozyme))의 안정성을 증가시킬 수 있다. 그러나, Mg +2, Mn +2 및 Zn +2 는 rhDNase 를 불안정화할 수 있다. 유사하게 Ca +2 및 Sr +2 는 VIII 인자를 안정화할 수 있고, Mg +2, Mn +2 및 Zn +2, Cu +2 및 Fe +2 에 의해 불안정화될 수 있으며, Al +3 에 의해 응집이 증가될 수 있다.

  vii . 보존제
 동일한 용기로부터 1 회 이상 적출하는 다중 용량 비경구용 제형을 개발할 때 보존제는 필수적이다. 그의 일차적 기능은 미생물의 성장을 억제하고 약물 상품의 유효기간 또는 사용기간 내내 상품 멸균성을 보장하는 것이다. 통상적으로 사용되는 보존제로는 벤질 알콜, 페놀 및 m-크레솔이 포함된다. 보존제는 소분자 비경구용 제형과 함께 오랫동안 사용되어 왔지만, 보존제를 포함하는 단백질 제형을 개발하는 것은 쉽지않다. 보존제는 대부분 단백질에 대해 불안정화 효과 (응집)를 보이며, 이는 다중-용량 단백질 제형에의 사용을 제한하는 주요 요인이다. 최근까지, 대부분의 단백질 약물은 1 회 용량으로만 제형화되었다. 그러나, 다중-용량 제형이 가능하다면, 환자에게 편의를 제공하고 시장성을 증가시키는데 일익을 담당할 것이다. 좋은 예로, 보존 제형의 개발이 보다 편리한 다중-용량 주입 펜 제품의 상품화된 인간 성장 호르몬 (hGH) 이 있다. hGH 의 보존 제형을 함유한 4 개 이상의 펜 장치가 현재 판매되고 있다. 노르디트로핀 (Norditropin, 액상, Novo Nordisk), 뉴트로핀 에이큐 (Nutropin Aq, 액상, Genentech) 및 제노트로핀 (동결 건조-이중 캠버 카트리지, Pharmacia & Upjohn)은 페놀을 함유하고, 소마트로프 (Somatrope, Eli Lilly)는 m-크레졸로 제형화된다.

 보존제 함유 투여 형태의 제형화 및 개발 중에 몇 가지 점을 고려해야한다. 약품 중의 유효 보존제 농도를 극대화해야 한다. 이를 위해 단백질 안정성을 저해하지 않으면서 항생 효과를 부여하는 농도 범위에 걸쳐 주어진 보존제의 투여 형태를 검사해야 한다. 예를 들면, 차동 주사 열량계 (DSC, Differential Scanning Calorimetery) 를 사용하여 인터루킨-1 수용체 (Type 1) 를 위한 액상 제형의 개발에 있어서, 3 개의 보존제를 성공적으로 스크린하였다. 시장 상품에 통상적으로 사용되는 농도에서의 안정성에 대한 영향을 기초로, 보존제들의 순위를 결정하였다.
 예상할 수 있듯이, 보존제를 함유한 액상 제형의 개발은 동결건조 제형보다 어려웠다. 동결 건조 상품은 보존제 없이 동결 건조할 수 있으며, 사용시 보존제 함유 희석제를 이용하여 재구성할 수 있다. 이는 보존제가 단백질과 접촉하는 시간을 단축하고, 이와 관련된 안정성의 위협을 크게 최소화한다. 액상 제형의 경우, 보존제 효과 및 안정성은 상품의 전제 유효기간 (18-24 개월) 동안 유지된다. 여기서 주목할 점은 보존제 효과가 활성 약물 및 모든 부형제 성분을 함유한 최종 제형에서 입증되어야 한다.

 본 발명에 따른 자가 완충성 단백질 제형, 특히 자가-완충성 생물 약학적 단백질 제형은 일반적으로 특이적 투여 경로 및 방법, 특이적 투여 용량 및 투여 빈도를 고려하여, 특이적 질병의 치료를 위해 생체 이용률 및 지속성의 범위에서 설계한다.

 그리하여, 제형은 경구용, 이과(耳科), 안과, 직장 및 질 경로를 포함하지만 이에 제한되지 않는 임의의 적합한 경로 및 정맥내 및 동맥내 주입, 근육내 주입 및 피하 주입을 포함한 비경구용 경로를 고려하여 본 발명에 따라 제형화할 수 있다.


  b. 비경구 투여용 제형
 비경구 투여용 제형은 수성 또는 비수성 등장성 멸균 주사액 또는 현탁액의 형태일 수 있다. 이들 용액 및 현탁액은 경구 투여용 제형에 사용하는 것으로 언급된 캐리어 또는 희석제 1 종 이상을 사용하거나 다른 적합한 분산제 또는 습윤화제 및 현탁화제를 사용하여 멸균 분말 또는 과립으로부터 제조할 수 있다.

 비경구 투여를 생각할 경우, 본 발명에 사용하기 위한 치료 조성물은 약학적으로 허용되는 비히클 중에 원하는 단백질을 포함하는, 발열물질을 함유하지 않고, 비경구로 투여가능한 수용액 형태일 수 있다. 비경구용 주사액에 특히 적합한 비히클은 순수한 멸균수로, 단백질이 멸균, 등장성, 자가-완충성 용액으로 제형화된다.

 이들 제조 방법은 원하는 단백질을 제어가능한 또는 지속적인 방출을 가능하게 하는, 주입가능한 구체, 생침식가능한 입자, 중합체 화합물 (폴리락트산, 폴리글리콜산), 비드 또는 리포솜의 형태로 제형화하는 것을 포함할 수 있다. 이러한 제형들은 매몰식 약물 전달 장치로 투여할 수 있다.


 비경구 투여용 제형은 또한 카르복시메틸 셀룰로스, 소르비톨 및 덱스트란과 같은 점도를 조절하는 물질을 함유할 수 있다. 또한 원하는 단백질 또는 기타 성분의 용해도를 증가시키는 물질 및 경우에 따라 자가-완충성 단백질을 포함하여 하나 이상의 성분들을 안정화시키는 물질을 포함할 수 있다.

  c. 폐 투여용 제형
 본 발명의 특정 실시형태에 따른 약학적 조성물은 흡입에 적합할 수 있다. 폐 투여의 경우, 약학적 조성물은 에어로졸의 형태로 또는 건조 분말 에어로졸을 포함하는 흡입기로 투여할 수 있다. 예를 들면, 결합제가 흡입을 위한 건조 분말로 조제될 수 있다. 흡입 용액은 또한 에어로졸 전달을 위한 촉진제를 사용하여 조제될 수 있다. 또다른 양태에서는, 용액을 분사할 수 있다. 폐 투여방법은 화학적으로 변성된 단백질의 폐 전달을 기재하고 있는 PCT 출원 제 PCT/US94/001875 호에 추가로 기재되어 있다.

  d. 경구 투여용 제형
 경구 투여를 위해, 약학적 조성물은 정제, 캡슐, 좌약 또는 액체 형태일 수 있다. 약학적 조성물은 특정 양의 활성 성분을 함유하는 투여 단위 형태로 제조하는 것이 바람직하다. 이러한 투여 단위의 예로는 정제 또는 캡슐이 있다. 이와 관련하여, 본 발명에 따른 경구 투여용 제형은 통상적으로 자가-완충성 단백질이 제형화 중에 완충제로서 작용하는 경우에 제조할 수 있다.

 e. 제어 방출 제형
 본원에 기재된 발명에 유용한 추가 제형으로 지속성 전달 제형(sustained-delivery formulation)과 제어 전달 제형(controlled-delivery formulation)이 있다. 본 발명의 여러 양태 및 바람직한 실시형태에 따라 사용될 수 있는 이러한 지속성 전달 제형 및 제어 전달 제형은 당업자에게 널리 공지되어 있다. 리포솜 캐리어, 생침식성 미세입자, 다공성 비드 및 반투과성 중합체 매트릭스를 사용하는 전달방법이 이에 포함되며, 하기 문헌들에 기재되어 있다. 제 PCT/US93 /00829 호 ; U.S. 3,773,919 ; EP 58,481 ; Sidman 등의 Biopolymers, 22:547-556 (1983) ; Langer 등의 J. Biomed. Mater. Res., 15:167-277, (1981) ; Lager 등의 Chem. Tech., 12:98-105 (1982) ; EP 133,988 ; Eppstein 등의 Proc. Natl. Acad. Sci. (USA), 82:3688-3692 (1985) ; EP 36,676 ; EP 88,046 ; 및 EP 143,949. 상기 문헌들은 그 전문이 본원에 참조문헌으로 인용되었으며, 특히 일부분이 본원에 기재된 본 발명에 따른 자가완충성 지속성 및 제어 전달성 약학적 단백질 제형과 관련이 있다.

  f. 멸균
 생체내 투여에 사용되는 약학적 조성물은 일반적으로 무균상태여야 한다. 이는 멸균 여과막을 통한 여과법에 의해 가능하다. 조성물을 동결건조시킨 경우, 이 방법을 사용하여 멸균화하는 것은 냉동 건조 및 재구성 전에 또는 후에 실시할 수 있다. 비경구 투여용 조성물은 냉동건조 형태로 또는 용액 형태로 보관할 수 있다. 그 밖에, 비경구 조성물은 일반적으로 멸균 투입구를 갖는 용기, 예를 들면, 정맥주사 용액 백 또는 피하 주사용 바늘이 관통할 수 있는 스토퍼를 갖는 약병에 담겨진다.

 g. 저장
 약학적 조성물이 제형화된 경우에, 상기 조성물은 용액, 현탁액, 겔, 에멀젼, 고체, 또는 무수 또는 동결건조된 분말로서 멸균 유리병에 저장된다. 이러한 제형은 바로 사용할 수 있는 형태이거나 또는 투여하기 전에 재구성을 필요로 하는 형태(예를 들어, 동결건조된 형태)로 저장된다.

 h. 부가적인 약학적 제제
 본 발명의 자가-완충성 단백질 조성물, 특히 자가-완충성 약학적 단백질 조성물은 조성물의 자가-완충성 단백질에 더하여 하나 또는 그 이상의 부가적인 약학적 제제를 포함할 수 있다. 이러한 제제는 널리 공지되어 있는 단백질 또는 다른 유형의 제제이다. 이러한 제제 중에는 모든 장애 또는 질환을 예방하거나 치료하기 위한 제제도 포함된다. 예를 들어, 이러한 제제는 항생제 및 항진균제를 포함한다. 이러한 제제는 또한 예를 들어, 염증성 질환, 암, 대사성 장애, 신경성 및 신장 장애를 치료하기 위한 제제를 포함하나 이에 한정되지 않는 인체 장애를 치료하기 위한 제제를 포함한다. 이러한 관점에서 본 발명에 사용될 수 있는 제제는 또한 자가-완충성 조성물의 작용을 증대시키고/증대시키거나 이러한 조성물을 투여했을 때 발생하는 바람직하지 않은 모든 부작용을 예방, 개선 또는 치료하는데 유용한 제제를 포함한다.

 i. 자가- 완충성 단백질 제형을 제조하는 방법
 본 발명의 조성물은 단백질, 특히 약학적 단백질을 사용하여 널리 공지되어 있는 일반적인 제조방법, 제형화 방법으로 제조할 수 있다. 이러한 관점에서 본 발명의 다양한 양상의 바람직한 특정 실시형태에서, 상기 조성물을 제조하는 방법은 잔여 완충제를 제거하기 위해 반대이온의 사용을 포함한다. 이러한 관점에서, 용어 "반대이온"은 조성물을 제조하는 동안 조성물로부터 완충용액을 치환시킬 수 있는 작용을 하는 극성 또는 하전된 모든 성분을 의미한다. 이러한 관점에서 유용한 반대이온은 예를 들어, 글리신, 염화물, 황산염 및 인산염을 포함한다. 이러한 관점에서 용어 "반대이온"은 치환 이온과 동일한 의미를 나타낸다.

 잔여 완충제는 표준 투석 방법 및 접선 흐름 정용여과(tangential flow diafiltration)와 같은 고성능 멤브레인 확산-기저 방법을 포함하나 이에 한정되지 않는 다양한 널리 공지되어 있는 방법을 사용하는 이러한 관점에서 반대이온을 사용하여 제거할 수 있다. 이러한 관점에서 반대이온을 사용하여 잔여 완충용액을 제거하는 방법은 또한 몇몇 경우에서 크기 배제 크로마토그래피를 사용하여 수행할 수 있다.

 이러한 관점에서 관련된 특정의 실시형태에서, 본 발명의 조성물은 자가-완충성 단백질을 포함하는 제제의 pH 보다 낮은 pH 에서 비완충제 용액(bufferless solution)에 대한 투석을 포함하는 방법으로 제조하였다. 이러한 관점에서 본 발명의 특히 바람직한 실시형태에서, 비완충제 용액은 반대이온, 특히 잔여 완충용액을 제거하는데는 용이하고 자가-완충성 단백질 또는 이의 제형에는 반대 영향을 미치지 않는 반대이온을 포함한다. 이러한 관점에서 본 발명의 더욱 특히 바람직한 실시형태에서, 투석한 후에 제제의 pH 는 묽은 산 또는 묽은 염기를 사용하여 바람직한 pH 로 조정하였다.


 이러한 관점에서 특정의 관련된 특히 바람직한 실시형태에서, 본 발명의 조성물은 자가-완충성 단백질을 포함하는 제제의 pH 보다 낮은 pH 에서 비완충제 용액에 대한 접선 흐름 정용여과(tangential flow diafiltration) 를 포함하는 방법으로 제조하였다. 이러한 관점에서 특히 바람직한 본 발명의 실시형태에서, 비완충제 용액은 반대이온, 특히 잔여 완충용액을 제거하는데는 용이하고 자가-완충성 단백질 또는 이의 제형에는 반대 영향을 미치지 않는 반대이온을 포함한다. 이러한 관점에서 더욱 특히 바람직한 본 발명의 실시형태에서, 정용여과시킨 후에 제제의 pH 는 묽은 산 또는 묽은 염기를 사용하여 바람직한 pH 로 조정하였다.

 5. 투여 경로
 다양한 실시형태에서, 본 발명의 제형은 실험대상에게 치료제를 투여하는 본 분야의 숙련자들에게 널리 공지되어 있는 다양한 적합한 경로를 통해 투여할 수 있다. 이러한 관점에서의 본 발명의 실시형태에서, 본원의 다른 부분에 기재되어 있는 바와 같이, 하나 또는 그 이상의 제형은 소화관을 통해 투여된다. 다른 실시형태에서, 본원의 다른 부분에 기재되어 있는 바와 같은 하나 또는 그 이상의 제형은 비경구 투여된다. 다양한 실시형태에서, 하나 또는 그 이상의 제형은 비경구적으로 투여되는 하나 또는 그 이상의 다른 제형과 함께 소화관을 통해 투여될 수 있다.

 다양한 실시형태에서의 이러한 경로는 경구, 안내, 점막, 국소, 직장, 흡입 스프레이와 같은 폐 및 피내로 투여되는 조성물의 투여를 포함하나 이에 한정되지 않는다. 하기의 비경구 투여 경로는 본 발명의 다양한 실시형태에서 또한 유용하다 : 정맥내, 동맥내, 심장내, 척수내, 척추 강내, 골(骨)내, 관절내, 활액내(intrasynovial), 피내(intracutaneous), 진피내(intradermal), 피하, 복막 및/또는 근육내 주사에 의한 투여. 몇몇 실시형태에서, 정맥내, 동맥내, 피내, 진피내 및/또는 근육내 주사가 사용된다.

 본 발명의 특정 실시형태에서, 조성물은 예를 들어, 안구내 혈관신생, 망막변증 또는 연령-관련 황반변성을 치료하기 위해 안구내 주사에 의해 국소적으로 투여된다.

 6. 투여량
 투여되는 자가-완충성 단백질 제형의 양 및 이러한 제형으로 질환 증상을 치료하기 위한 투여 섭생은 연령, 체중, 성별, 및 실험대상의 의학적 증상, 질환의 유형, 질환의 심각성, 투여 경로 및 빈도, 및 사용되는 특정 제형을 포함하는 다양한 인자에 따라 달라진다. 특히, 양은 투여되는 단백질 치료제 및 이와 복합하여 투여되는 다른 모든 치료제에 따라 달라질 것이다. 투여량은 이러한 목적을 위해 널리 확립되어 있는 일반적인 약학적 방법을 사용하여 본 발명의 제형에 대하여 결정될 수 있다.

 7. 투여 섭생
 본 발명의 제형은 투여량, 및 특정 실험대상의 연령, 성별, 체중 및 증상, 및 투여될 제형(예를 들어, 고체 및 액체)과 같은 이러한 인자들을 고려하는 의학적으로 숙련된 숙련자들 및 수의학적 숙련자들에게 널리 공지되어 있는 기술에 의해 투여될 수 있다. 사람 및 다른 포유동물에 대한 투여량은 본원의 상세한 설명, 본원에 인용되어 있는 문헌 및 본 분야의 지식으로부터 본 분야의 숙련자들에 의해 과도한 실험 없이도 결정될 수 있다.

 다양한 실시형태에 따라, 적합한 투여량 및 투여 계획은 다양한 인자에 따라 달라질 것이며, 다른 환경에서 다양할 것이다. 일반적으로 투여하기에 적합한 투여 계획을 결정할 파라미터는 다음 중 일부 또는 모두를 포함한다 : 치료될 질환 및 이의 단계 ; 실험대상의 종, 이의 건강, 성별, 연령, 체중 및 대사율 ; 투여되는 다른 치료제 ; 및 실험대상의 병력 또는 유전자형으로부터 예상되는 잠재적 합병증.
 주어진 상황에서의 적합한 투여 계획은 또한 제형의 특성, 투여되는 방법, 투여된 이후의 분포 경로 및 작용 부위, 및 실험대상의 몸체로부터 청소되는 속도를 고려할 것이다. 마지막으로, 적합한 투여량의 결정은 바람직하게 최대 효과의 역치 이하도 아니며 증가된 투여량의 이점을 능가하는 활성 제제의 투여량과 관련된 유해한 효과의 역치 이상도 아니다.

 "투여량"은 한번에, 나누어서 또는 일정 기간 동안 계속적으로 수송시킬수 있다는 것은 명백할 것이다. 총 투여량은 또한 단일 부위로 수송되거나 또는 여러 부위로 나누어 분포될 수 있다. 또한, 투여량은 치료 기간과 동일하게 남아 있을수 있거나 또는 치료 기간과 다른 기간 동안 남아 있을 수 있다.

 다양한 실시형태에서, 본 발명의 제형은 초기 투여량으로 투여한 다음 추가 투여로 유지된다. 몇몇 실시형태에서, 본 발명의 제형은 초기에는 하나의 방법으로 투여하고 이후에는 동일한 방법 또는 하나 또는 그 이상의 상이한 방법으로 투여한다. 진행성 투여의 투여량은 실험대상 내의 활성 제제의 농도를 특정 값을 유지하기 위해 조정할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 조성물은 정맥내 주사에 의해 초기 투여하고/투여하거나 실험대상의 조성물의 수준을 유지하기 위해 투여한다. 다양한 실시형태에서, 다른 투여 형태가 사용된다.

 본 발명의 제형은 치료학적 유효량을 수송시키기에 적합한 빈도 및 시간을 포함하는 광범위한 시간에 걸쳐 다수의 빈도로 투여할 수 있다. 투여량은 계속적으로 수송되고 여러 매 시간 동안, 하루, 매일, 격일 또는 1 주일 당 며칠 동안 1 회 또는 그 이상으로, 또는 매우 적은 빈도로 투여할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 상기 투여량은 1 , 2 , 3, 4, 5 , 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 그 이상의 일 동안 투여된다. 다양한 실시형태에서, 상기 조성물은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 그 이상의 년 수 동안 투여된다. 초기 투여를 위한 적합한 섭생 및 계속적인 투여를 위한 추가적인 투여량은 동일하거나 또는 다양하다. 적합한 섭생은 본원의 상세한 설명, 본원에 인용되어 있는 인용문헌 및 본 분야의 지식으로부터 본 분야의 숙련자들에 의해 확인될 수 있다. 일반적으로, 치료 기간은 질환 진행 기간, 사용할 치료제의 효능 및 치료하고자 하는 실험대상의 증상 및 반응에 비례한다.

 8. 질환 및 치료
 바람직한 실시형태에서, 자가-완충성 약학적 단백질은 다양한 장애 및 질환을 앓고 있는 실험대상을 치료하는데 효과적이다. 본원의 다른 부분에 기재한 바와 같이, 본 발명은 다른 것들 중 다양한 질환-관련 표적에 특이적으로 결합하는 도메인 및 Fc 작동 기능을 포함하며 질환을 치료하는데 효과적인 약학적 항체의 자가-완충성 조성물, 항체-유도 약학적 단백질 및 항체-관련 약학적 단백질을 제공한다. 이러한 단백질 및 이의 자가-완충성 조성물은 본원의 앞 부분에 충분히 기재되어 있으며, 또한 상기 단백질의 표적과 관련된 다양한 장애 및 질환을 치료하는 상기 단백질의 용도에 대해서도 충분히 기재되어 있다. 제형화 방법, 투여 방법, 투여량 및 투여 방법을 포함하는 조성물을 사용하는 방법은 모든 상기에 자세히 기재되어 있다. 본 발명의 제형 및 특정의 모든 조성물의 투여는 본 발명의 상세한 설명에 의해 제공되는 지시에 비추어 본 분야에 널리 공지되어 있는 일반적인 기술을 사용하여 특정 질환을 치료하도록 맞출 수 있다. 본 발명의 다양한 양상 및 바람직한 실시형태의 자가-완충성 약학적 단백질 제형을 사용하여 일반적으로 치료할 수 있는 질환 중에는 염증성 질환, 암, 대사성 장애, 신경성 및 신장 장애 등이 있다.

 9. 포장 및 키트
 본 발명은 또한 자가-완충성 단백질 제형을 포함하는 키트, 특히 용기 내의 자가-완충성 약학적 단백질 제형 및 이의 사용 설명서를 포함하는 키트를 제공하며, 특히 이러한 키트 내의 제형은 사람에게 사용하기에 약학적으로 허용가능한 제형이다. 바람직한 키트 중에서 본 발명의 키트는 하나 또는 그 이상의 용기 내의 본 발명의 자가-완충성 단백질 제형, 및 하나 또는 그 이상의 분리된 서류, 키트의 성분 및/또는 키트의 성분의 용도를 설명하고 있는 정보을 포함하는 키트를 포함하며, 특히, 상기 키트 내의 단백질은 생물약학적 단백질, 특히 사람이 앓고 있는 질환을 치료하기 위해 제형된 생물약학적 단백질이다.

 이러한 관점에서의 본 발명의 특정 양상에서, 바람직한 키트는 상기한 바와 같이 하나 또는 그 이상의 본 발명의 자가-완충성 단백질 제형을 투여하기 위해 하나 또는 그 이상의 단일 또는 다중-챔버 주사기(예를 들어, 액상 주사기 및 리오주사기)를 추가로 포함하는 키트를 포함한다. 이러한 관점에서의 본 발명의 특정 양상에서, 특정의 특히 바람직한 키트는 예비로딩 주사기(preloaded syringe)를 추가로 포함한다. 이러한 관점에서의 본 발명의 추가로 특히 바람직한 실시형태에서, 키트는 주사기 내로 로딩되도록 준비된 형태로 부분적 잔공 하에서 유리병 내에 포장되고 실험대상에게 투여되는, 비경구 투여용 자가-완충성 약학적 조성물을 포함한다. 이러한 관점에서의 특히 바람직한 실시형태에서, 조성물은 부분적 진공 하에서 배열된다. 이러한 모든 관점의 특정의 추가적인 특히 바람직한 실시형태에서, 키트는 상기한 모든 것과 관련하여 하나 또는 그 이상의 유리병을 포함하고, 여기에서 각각의 유리병은 실험대상에게 투여하기 위한 단일 유닛 투여량을 포함한다. 이러한 모든 관점에서, 본 발명은 또한 상기한 배열된 동결건조물을 포함하는 키트에 관한 것이며, 재구성물은 본원의 조성물을 제공한다. 이러한 관점에서, 본 발명은 또한 특정의 바람직한 실시형태에서 본 발명의 동결건조물 및 동결건조물을 재구성하기 위한 멸균 희석제를 포함하는 키트를 제공한다.

실 시 예
 본 발명은 하기의 설명되어 있는 비-제한적 실시예를 통해 부가적으로 설명하였다.

  실시예 1 : pH 5.0 내지 4.0 범위에서 아세트산 나트륨 완충용액의 산 적정 및 완충능
 공지되어 있는 농도의 아세트산 원액을 HPLC 등급의 물(HPLC grade water)에 용해시킨 극히 순수한 빙초산으로 희석한 다음 NaOH 로 원하는 정도의 pH 까지 적정하여 제조하였다. 원액을 공기 및 21 ℃ 에서 평형시켰다. 부피 표준(volumetric standard)은 1 N 의 농도로 제조하고 필요에 따라 HPLC 물로 희석하였다.


 1 mM, 2.5 mM, 5 mM, 7.5 mM, 10 mM 및 15 mM 의 아세트산 나트륨 완충용액은 HPLC 물로 원액을 희석하여 제조하였다. 용액을 HCl 로 적정하였다. 0.2 N HCl 은 1, 2.5 및 5 mM 의 용액에 대하여 사용하였고, 0.4 N HCl 은 7.5 mM 의 용액에 대하여 사용하였으며, 0.8 N HCl 은 10 mM 및 15 mM 의 용액에 대하여 사용하였다. 표준 분석 실험 기술을 사용하여 적정시켰다.

 도 1 의 패널 A 는 적정 데이터 및 각각의 용액에 대한 데이터로부터 계산된 가장 작은 사각형의 경향선을 나탄낸 것이다. 상기 경향선의 기울기는 대응되는 아세테이트 완충용액의 완충능으로서 기재되어 있는 각각의 데이터 세트로부터 계산하였다. 아세트산 완충용액 농도에 관한 완충능의 선 의존성은 도 1 의 패널 B 에 나타내었다.

  실시예 2 : pH 5.0 내지 5.5 범위에서 아세트산 나트륨 완충용액의 염기 적정 및 완충능
 아세테이트 완충용액 및 적정시키기 위한 용액을 실시예 1 에 기재되어 있는 바와 같이 제조하였다. 상기 용액을 pH 5.0 내지 5.5 로 적정시키고 HCl 대신 NaOH 를 사용하여 적정시킨 것을 제외하고 실시예 1 에 기재되어 있는 바와 같이 용액을 적정시켰다. 0.2 N NaOH 는 1, 2.5 및 5 mM 용액을 적정시키는데 사용하였고, 0.4 N NaOH 는 7.5, 10 및 15 mM 용액을 적정시키는데 사용하였다. 적정의 결과를 도 2A 에 나타내었다. 아세테이트 완충용액의 농도에 대한 완충능의 선 의존성은 도 2 B 에 나타내었다.

  실시예 3 : HPLC 에 의한 아세테이트의 측정
 아세테이트를 분석 SE-HPLC 를 사용하여 아세테이트 완충용액 시료 내에서 측정하였다. 아세테이트 농도의 기능으로서의 피크 영역에 대한 표준 곡선은 공지되어 있는 아세트산 농도의 완충용액 내에서 아세테이트를 분석함으로써 확립하였다. 표준 곡선을 도 3 에 나타내었다. 시험 완충용액 내의 아세테이트의 명목적이고 특정된 양은 도면에 나타낸 표준 곡선 밑 부분에 표로 나타내었다.

  실시예 4 : pH 5.0 내지 pH 4.0 범위에 걸친 Ab - hOPGL 제형의 산 적정
 10 mM 아세테이트(명목적인 부피) 내의 벌크(bulk) Ab-hOPGL, 5 % 소르비톨, pH 5.0 을 3 밀리포어 펠리콘 XL50 재생 셀롤로스 한외거르기 맴브레인을 사용하는, 다중-다형성 카세트를 수반하는 LABSCALE TFF� 시스템(밀리포어)에서 5.25 % 소르비톨, pH 3.2(HCl 로 조정하였음)에 대하여 정용여과시켰다. 정용여과(diafiltration) 용액을 각각의 제형에 대한 정용여과 과정을 수행하는 동안 8 내지 10 번 교환하였다. 정용여과시킨 다음, 결과적으로 생성된 완충용액-유리 용액의 pH 를 측정하고 0.05 N HCl 또는 0.05 N NaOH 를 사용하여 pH 를 5.0 으로 조정하였다.

 1, 10, 30, 60, 90 및 110 mg/ml 용액을 희석시켜 적정용으로 제조하였다. 각각의 희석물의 pH 는 필요에 따라 NaOH 또는 HCl 로 pH 5.0 으로 조정하였다. 상기 실시예에 기재되어 있는 바와 같이 적정시켰다. 0.2 N HCl 을 사용하여 1, 10 및 30 mg/ml 용액을 적정시켰다. 0.4 N HCl 을 사용하여 60 mg/ml 용액을 적정시켰다. 0.8 N HCl 을 사용하여 90 및 110 mg/ml 용액을 적정시켰다.

 적정의 결과를 도 4 에 나타내었다. 가장 작은 사각형으로 표시한 회귀선은 각각의 농도에 대한 데이타 세트를 나타낸 것이다. 완충능은 각각의 농도에 대한 회귀선의 기울기로서 나타내었다.

  실시예 5 : pH 5.0 내지 6.0 범위에 걸친 Ab - hOPGL 제형의 염기 적정
 1, 10, 30, 60, 90 및 110 mg/ml 의 Ab-hOPGL 용액을 실시예 4 에 기재되어 있는 바와 같이 적정시키기 위해 제조하였다. 상기 실시예에 기재되어 있는 바와 같이 NaOH 를 사용하여 염기 적정시켰다. 1, 10, 30 및 60 mg/ml 용액에 대하여 0.2 N NaOH 를 사용하였으며, 90 및 110 mg/ml 용액에 대하여서는 0.4 N NaOH 를 사용하였다. 적정 결과를 도 5 의 그래프로 나타내었다. 선형의 회귀선은 각각의 농도에 대한 데이터를 나타낸 것이다. 완충능은 각각의 농도에 대한 회귀선의 기울기로 나타내었다.

  실시예 6 : 자가- 완충성 Ab - hOPGL 제형 내 잔여 아세테이트의 농도
 Ab-hOPGL 제형 내 잔여 아세테이트의 양을 실시예 3 에 기재되어 있는 방법을 사용하여 측정하였다. 결과를 도 6 에 그래프로 나타내었으며, 이는 아세트산 농도에 대한 HPLC 측정치와 관련되어 있는 표준 곡선을 나타내며, 그래프 아래에 기재되어 있는, 측정치의 결과를 기재한 표는 상이한 농도에서의 Ab-hOPGL 제형에 관한 것이다. Ab-hOPGL 농도는 왼쪽("정상")에 기재하였으며 각각의 Ab-hOPGL 농도에서의 아세테이트의 측정된 농도는 오른쪽에 기재하였다.

  실시예 7 : pH 5.0 내지 4.0 범위에서 Ab - hOPGL 제형에 잔여 아세테이트를 더하거나 또는 제한 완충능
 상기 실시예에 기재되어 있는 바와 같이 자가-완충성 Ab-hOPGL 제형을 제조하고 HCl 로 적정하였다. 또한, 데이터를 예를 들어, 실시예 3 에 기재되어 있는 바와 같이 SE-HPLC 에 의한 아세테이트의 함량의 측정으로 기준으로 잔여 아세테이트 완충용액의 기여를 배제시킴으로써 조정하였다. 완충능은 상기한 바와 같이 측정하였다. 데이타의 두 세트에 관하여 동일한 분석을 수행하였다. 도 7 에 나타낸 결과는 Ab-hOPGL 제제의 완충능에 관한 잔여 아세테이트의 효과를 나타낸 것이다. 이러한 결과로 잔여 아세테이트의 완충능은 분석한 자가-완충성 Ab-hOPGL 제형에서 부수적인 요인(minor factor)이라는 것을 명백히 알 수 있다.

  실시예 8 : pH 5.0 내지 6.0 범위에서의 Ab - hOPGL 제형에 잔여 아세테이트를 더하거나 또는 제한 완충능
 상기 실시예에 기재되어 있는 바와 같이 자가-완충성 Ab-hOPGL 제형을 제조하고 NaOH 로 적정하였다. 또한, 예를 들어, 실시예 3 에 기재되어 있는 바와 같은 SE-HPLC 에 의한 아세테이트 함량의 측정을 기준으로 하여 잔여 아세테이트 완충용액의 기여를 배제시킴으로써 데이타를 조정하였다. 상기한 바와 같이 완충능을 측정하였다. 데이타의 두 세트에 관하여 동일한 분석을 수행하였다. 도 8 에 나타내 결과는 Ab-hOPGL 제제의 완충능에 관한 잔여 아세테이트의 효과를 나타낸 것이다. 이러한 결과로 분석한 자가-완충성 Ab-hOPGL 제형의 완충능에서 잔여 아세테이트의 완충능은 부수적인 요인이라는 것을 명백히 알 수 있다.


  실시예 9 : 자가- 완충성 및 통상적인 완충 제형의 pH Ab - hOPGL 안정성
 상기 실시예에 기재되어 있는 바와 같이 Ab-hOPGL 의 자가-완충성 제형을 제조하였다. 또한, 제형이 통상적인 완충제, 및 아세테이트 또는 글루타메이트를 포함하도록 제조하였다. 모든 제형은 60 mg/ml 의 Ab-hOPGL 을 포함하고 있다. 제형에서의 pH 및 Ab-hOPGL 의 안정성을 4 ℃ 에서 6 개월 동안 저장하면서 모니터링하였다. 저장하는 시간 동안 제형 내에서 단량체 Ab-hOPGL 을 측정함으로써 안정성을 모니터링하였다. 상기한 바와 같이 SE-HPLC 를 사용하여 측정하였다. 3 개의 모든 제형에 대한 결과를 도 9 에 나타내었다. 패널 A 는 3 개의 제형에서의 Ab-hOPGL 의 안정성을 나타낸 것이다. 자가-완충성 제형에서의 안정성은 통상적인 완충 제형에서의 안정성만큼 우수하다. 패널 B 는 3 개의 제형에서의 pH 안정성을 나타낸 것이다. 또한 자가-완충성 제형에서의 pH 안정성도 통상적인 완충 제형에서의 pH 안정성만큼 우수하다.

  실시예 10 : pH 5.0 내지 4.0 범위에서 Ab - hB7RP1 의 적정 및 완충능
 상기 실시예에 기재되어 있는 바와 같이, Ab-hB7RP1 의 자가-완충성 제형을 1, 10, 30 및 60 mg/ml 의 농도로 제조하였다. 상기한 바와 같이 HCl 을 사용하여 적정시켰다. 또한 예를 들어, 실시예 3 에 기재되어 있는 바와 같이 SE-HPLC 에 의한 아세테이트 함량 측정을 기준으로 하여 잔여 아세테이트 완충용액의 기여를 배제시킴으로써 데이타를 조정하였다. 도 10 의 패널 A 는 적정 결과를 나타낸 것이다. 도 10 의 패널 B 는 잔여 아세테이트 완충용액의 기여를 제하기 전 및 후에 Ab-hB7RP1 제형의 농도에 대한 완충능의 의존도를 나타낸 것이다. 이러한 결과는 이러한 pH 범위에서 Ab-hB7RP1 의 자가-완충능을 명백히 나타낸다. 40 mg/ml 에서, 10 mM 의 아세트산 나트륨 완충용액과 같은 pH 범위에서의 완충능을 제공한다. 60 mg/ml 에서, 대략적으로 15 mM 의 아세트산 나트륨 완충용액과 같은 pH 범위에서의 완충능을 제공한다.

  실시예 11 : pH 5.0 내지 6.0 범위에서 Ab - hB7RP1 에 대한 적정 및 완충능
 상기 실시예에서 Ab-hOPGL 에 대하여 기재한 바와 같이, Ab-hB7RP1 의 자가-완충성 제형을 1, 10, 30 및 60 mg/ml 의 농도에서 제조하였다. 상기한 바와 같이 NaOH 를 사용하여 적정시켰다. 또한, 실시예 3 에 기재되어 있는 바와 같이 SE-HPLC 에 의한 아세테이트 함량의 측정으로 기준으로 하여 잔여 아세테이트 완충용액의 기여를 배제시킴으로써 데이타를 조정하였다. 도 11 의 패널 A 는 적정 결과를 나타낸 것이다. 도 11 의 패널 B 는 잔여 아세테이트 완충용액의 기여를 제하기 전 및 후에 Ab-hB7RP1 제형의 농도에 대한 완충능의 의존도를 나타낸 것이다. 이러한 결과는 이러한 pH 범위에서 Ab-hB7RP1 의 자가-완충능을 명백히 나타낸다. 60 mg/ml 에서, 대략적으로 10 mM 의 아세트산 나트륨 완충용액과 같은 pH 범위에서의 완충능을 제공한다.

  실시예 12 : 4 ℃ 및 29 ℃ 에서 자가- 완충성 제형 및 통상적인 완충 제형에서의 Ab - hB7RP1 안정성
 상기 실시예에 기재되어 있는 바와 같이 Ab-hB7RP1 을 제조하고 상기한 바와 같이 자가-완충성 제형 및 통상적인 완충제, 및 아세테이트 또는 글루타메이트를 사용하는 제형으로 제형화하였다. 모든 제형은 60 ml 의 Ab-hB7RP1 을 포함하고 있다. 용액 내에서의 용액의 pH 및 Ab-hB7RP1 의 안정성을 4 ℃ 또는 29 ℃ 에서 26 주 동안 저장하면서 모니터링하였다. 저장 기간 동안 제형 내에서의 단량체 Ab-hB7RP1 를 측정함으로써 안정성을 모니터링하였다. 상기한 바와 같이 SE-HPLC 를 사용하여 측정하였다. 결과를 도 12 에 나타내었다. 패널 A 는 4 ℃ 에서 저장하는 동안의 결과를 나타낸 것이다. 패널 B 는 29 ℃ 에서 저장하는 동안의 결과를 나타낸 것이다. Ab-hB7RP1 는 적어도 통상적인 완충 제형에서와 같이 4 ℃ 에서 저장한 자가-완충성 제형에서 안정하다. 29 ℃ 에서, 자가-완충성 제형은 적어도 통상적인 완충 제형만큼 안정하며, 10 내지 마지막 시간 점까지 점차 안정해진다.
  실시예 13 : 4 ℃ 및 29 ℃ 에서 자가- 완충성 Ab - hB7RP1 의 pH 안정성
 상기 실시예에 기재되어 있는 바와 같이 60 mg/ml 에서의 자가-완충성 Ab-hB7RP1 을 제조하였다. 본원에 기재한 바와 같이 동일한 온도에서 시간 동안 pH 를 모니터링하였다. 결과를 도 13 에 나타내었다.

  실시예 14 : pH 4.0 내지 6.0 범위에서 자가- 완충성 Ab - hCD22 의 pH 안정성
 상기 실시예에서 Ab-hOPGL 및 Ab-hB7RP1 에 대하여 기재한 바와 같이, Ab-hCD22 의 자가-완충성 제형을 제조하고 pH 5.0 내지 4.0 범위 및 pH 5.0 내지 6.0 범위에서 적정하였다. 또한 상기한 바와 같이 적정 데이타로부터 완충능을 계산하였다. 농도의 작용에 따른 완충능은 2 개의 pH 범위에 대하여 도 14 에 나타내었다. 패널 A 는 pH 5.0 내지 6.0 범위에의 Ab-hCD22 제형의 완충능을 나타낸 것이다. 완충능은 농도와 선형으로 의존하며 대략적으로 21 mg/ml 의 Ab-hCD22 제형은 동일한 방법으로 측정하였을 때 pH 5.0 의 10 mM 아세트산 나트륨 완충용액의 완충능과 동일한 완충능을 갖는다. 패널 B 는 pH 5.0 내지 6.0 범위에서 농도의 작용으로서 완충능을 나타낸 것이다. 이러한 pH 범위에서 대락적으로 30 mg/ml 의 Ab-hCD22 제형은 동일한 방법으로 측정했을 때 pH 5.0 의 10 mM 아세트산 나트륨 완충용액의 완충능과 동일한 완충능을 갖는다.

  실시예 15 : pH 5.0 내지 4.0 범위에서 Ab - hIL4R 제형의 적정 및 완충능
 상기 실시예에서 Ab-hOPGL 에 대하여 기재한 바와 같이, Ab-hIL4R 의 자가-완충성 제형을 1, 10, 25 및 90 mg/ml 의 농도로 제조하였다. 상기한 바와 같이 HCl 을 사용하여 적정하였다. 도 15 의 패널 A 는 적정 결과를 나타낸 것이다. 도 15 의 패널 B 는 Ab-hIL4R 의 농도에 대한 완충능의 의존성을 나타낸 것이다. 이러한 결과는 상기의 pH 범위에서 Ab-hIL4R 의 자가-완충능을 나타낸다. 대략적으로 75 mg/ml 에서, 동일한 방법으로 측정했을 때 pH 5.0 의 10 mM 아세트산 나트륨과 같은 pH 범위에서 더 우수한 완충능을 제공한다.

  실시예 16 : pH 5.0 내지 6.0 범위에서 Ab - hIL4R 제형의 적정 및 완충능
 상기 실시예에서 Ab-hOPGL 에 대하여 기재한 바와 같이, Ab-hIL4R 의 자가-완충성 제형을 1, 10, 25 및 90 mg/ml 의 농도로 제조하였다. 상기한 바와 같이 NaOH 를 사용하여 적정하였다. 도 16 의 패널 A 는 적정 결과를 나타낸 것이다. 도 16 의 패널 B 는 상기 pH 범위에서의 Ab-hIL4R 농도에 대한 완충능의 의존성을 나타낸 것이다. 이러한 결과는 상기의 pH 범위에서의 Ab-hIL4R 의 자가-완충능을 나타낸다. 대략적으로 90 mg/ml 에서, 동일한 방법으로 측정했을 때 pH 5.0 의 10 mM 아세트산 나트륨과 동일한 pH 범위에서 더 우수한 완충능을 제공한다.

  실시예 17 : 37 ℃ 에서 아세테이트 및 자가- 완충성 Ab - hIL4R 제형의 Ab-hIL4R 및 pH 안정성
 상기한 바와 같이, pH 5.0 및 7.0 mg/ml 에서 Ab-hIL4R 의 자가-완충성 제형 및 아세테이트 완충 제형을 제조하였다. pH 및 Ab-hIL4R 안정성을 37 ℃ 에서 4 주 동안 제형 내에서 모니터링하였다. Ab-hIL4R 안정성은 상기한 바와 같이 SE-HPLC 로 모니터링하였다. 결과를 도 17 에 나타내었다. 패널 A 는 Ab-hIL4R 가 아세트산 나트륨 제형에서와 같이 자가-완충성 제형에서도 적어도 안정하다는 것을 나타낸 것이다. 패널 B 는 자가-완충성 제형의 pH 가 아세트산 나트륨 완충 제형에서와 마찬가지로 안정하다는 것을 나타낸 것이다.