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1. CN1225555 - Teat dipping agent

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乳头浸洗剂


技术范围
此发明涉及授乳期动物的乳头浸洗剂,特别是涉及以这一技术领域内的 新成分为基础的乳头浸洗剂。这一新的乳头浸洗剂具有一些优于其它已知乳 头浸洗剂的特点。
发明背景
乳腺炎是一种乳房组织的发炎反应,它是全世界范围内授乳期奶牛中最 常见而又最严重的疾病。这种发炎是授乳期动物组织对侵染性微生物的反 应。许多不同的细菌被鉴定为乳腺炎病原菌。这些病原菌被分为四组:接触 性的、环境性的、机会性的及其它细菌。大部分乳腺炎的侵染是由金色链球 菌引起的。另一个接触性乳腺炎病原菌是无乳链球菌。在环境病原菌中有许 多其它链球菌和大肠杆菌类,如大肠杆菌和肺炎克雷伯氏菌。
为了防止细菌渗入到乳小管(teat canal)以及进一步到泌乳组织,挤奶后 可用许多不同的消毒剂(最常见的如chlorohexidine或碘附)对乳头进行浸洗。 这些消毒剂在它们与细菌的直接接触中可产生致死作用。尽管这些试剂已被 常规使用,但许多细菌仍未受致死反应的影响,例如,已知的试剂效力不强, 这是由于活性成分数量的缺乏和试剂不能与被侵染部位产生有效的接触。另 外这些试剂的效用降低得很迅速,而且处理后又会很快发生重新感染。乳头 上小的伤口和皮肤组织可作为某些细菌的存储器,乳头有被感染伤口的家畜 通常比其它家畜有更高的乳腺炎发生率。此外,碘和chlorohexidin会引起牛 奶味道的改变,而且奶中微量的碘和chlorohexidin会对奶产品加工造成麻 烦。
发明描述
此发明涉及到授乳期动物的一个种的乳头浸洗组合物,这一组合物对本 领域有相当大的贡献,相对于现有的乳头浸洗组合物,它在某些方面具有优 点。
具体而言,我们出人意料地发现本发明的聚氨基葡糖和一类多糖的组合 可作为乳头浸洗组合物中的优良活性成分。我们发现了许多不同的效果和优 点。通常说来,这意味着此组合物比已知的chlorohexidin和碘附型试剂表现 出更高的活性。它的一个作用是新的组合物能在乳小管张开时形成长时间的 屏障并阻止细菌渗入乳小管。此外,这一组合物对细菌具增强的抑制作用, 而它能愈合皮肤伤口,从而加强了保护。这意味着此组合物是一个十足的细 菌屏障或制菌剂,因而可用作乳腺炎预防剂。另外,此组合物还有助于伤口 和皮肤裂缝的愈合。此外,此成分的稠度使它很容易用于乳头,如滴用或喷 洒,同时它可使乳头柔滑。
在现有技术中,(与其)组成相似的组合物本身是已知的,例如 WO96/02260。但是,这种组合物还没有被引用或隐约指出可作为乳头浸洗组 合物,尤其是在现有技术中,还未指出这一点事实,即它比已知的 chlorohexidin和碘附型乳头浸洗剂具有更高的活性。
根据这一技术领域内的术语,有关本发明的乳头浸洗的表达将有更宽泛 的解释。因此,组合物不仅被打算用于乳头浸洗,而且用于其它方面,如喷洒, 但是仍属于已知的乳头浸洗剂或混合物的术语范围。
换句话说,此发明的第一个目标是提供一种乳头浸洗组合物,以利用其 细菌屏障效应或制菌效应。
此发明的另一个目标是提供一种使用时会引起伤口愈合效应的组合 物。
还有一个目标是提供一种使用时能引起乳腺炎预防反应的组合物。
再有一个目标是提供一种组合物,其具如此稠度因而使得它极其适于授 乳期动物乳头的滴用或喷洒,同时它可使乳头柔滑。
此发明的另一个目标是提供一种组合物,它能帮助乳头伤口更快和更好 的愈合。
本发明的其它目标和优点将在下面进行更详细的描述。
本发明的详细描述
更具体地,本发明涉及一种组合物的用途,该组合物由一种聚氨基葡糖 和选自肝素、硫酸乙酰肝素及葡聚糖乙酰肝素的一种多糖组成,它作为一种 在溶剂中的活性成分,用于授乳期动物,特别是奶牛的乳头浸洗溶液的生 产。
本发明的组合物适用于各种授乳期动物,当然首先是奶牛。它进一步表 现为一种在溶剂中的活性成分溶液,所说溶液由于其稠度或粘度,通常可用 于常规方法中。
从以上可以清楚地看到,本发明主要是基于聚氨基葡糖和所说多糖的特 定组合物,而且并不限于任何已知成分间的特定比例。换句话说,各成分间 的比例和其在溶液中的总量在不同的个案中根据所需的效果由专家确定。
但是,本发明主要是关于一个问题,即能引起细菌屏障效应和制菌效应 的溶液中所使用的所说成分的量。
然而还有一个实施方案就是,当聚氨基葡糖和所说多糖以如此量进行组 合,使用时就会产生乳腺炎的预防效应。
尽管本发明并不限于活性成分的任何总浓度,但通常溶液中聚氨基葡糖 和多糖的总浓度在0.2-10%,特别是在0.2-5%之间是最适合的,例如相对于 溶液总重的0.2-3%的重量,而上限通常决定于经济因素。
根据本发明的一个优选实施方案,聚氨基葡糖∶多糖的重量比在100∶1- 10∶1,特别是60∶1-15∶1之间。
聚氨基葡糖的成分是一个由1,4-β连接的D-葡萄糖胺为单位构成的多 糖。所说多糖是线性的,其特性可根据N-乙酰化的程度发生改变。本质上,所 有的胺都是乙酰化的,因而根据特定(inter alia)昆虫和甲壳类动物的壳,多 糖可称作几丁质。聚氨基葡糖是通过几丁质的乙酰化作用生产的。商业上,聚 氨基葡糖是从渔业产品中的废物,即蟹和虾壳中得到的。当用碱,通常是氢 氧化钠,处理几丁质时,就会发生N-脱乙酰化作用,即乙酰胺基转变成胺 基。通过控制碱处理的条件,就会得到不同程度乙酰化的几丁质。
根据本发明的一个优选实施方案,本发明中聚氨基葡糖的乙酰化程度至 多约为90%。特别的,已知的N-乙酰化程度至多约为50%,在有些情况下至 多约为25%。
因此,本发明中的乳头浸洗组合物中使用的多糖选自肝素、硫酸乙酰肝 素及葡聚糖乙酰肝素,它们在市场上可从不同厂家买到。此外,只要基本上 能保持所需活性这些多糖的水解形式也包括在本发明范围内。换句话说,这 些多糖将根据本发明进行更宽泛地解释。但是,特别优选的多糖是葡聚糖硫 酸酯糖,因为它能表现出较好的活性,而且比其它多糖便宜。
作为一个屏障或基质,本发明中的组合物包含一个传统的,通常是一个 液体载体,如纯水。
该溶液被赋予适于使用的稠度或粘度,这可用传统技术完成。作为本发 明组合物的粘度控制成分的实例,可以是半纤维素型的,如阿糖基木聚糖和 葡甘露聚糖;植物胶,如瓜尔豆胶和johannistree胶。纤维素型及其衍生物, 如甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素或羧甲基纤维素;淀粉及淀粉衍 生物,如羟甲基淀粉或交联淀粉;微生物多糖,如黄原胶,curdlan,出芽短梗 孢糖或葡聚糖;以及甘油。但特别优选的粘度控制剂是不同类型的纤维素及 其衍生物,尤其是甲基纤维素和甘油。
由于上述组合物能被用作授乳期动物的没有任何治疗效应的形成屏障 的乳头浸洗剂,本发明的另一方面就涉及到上述组合物的使用,即作为一种 用于授乳期动物,尤其是奶牛的屏障型或制菌的乳头浸洗剂。
此外,根据本发明的另一方面,即已知组合物可用于生产对授乳期动物, 特别是奶牛产生乳腺炎的抑制反应的乳头浸洗组合物,故此组合物可用作乳 腺炎的对抗剂。
本发明的再一个方面是一种对授乳期动物,特别是奶牛乳腺炎的制菌处 理方法,其中根据以上的描述以预防乳腺炎产生的有效量将该组合物用于所 说动物的乳头上。
根据本发明,组合物可按照所需浓度在所选溶剂中通过溶解活性成分及 可选添加剂,如粘度控制剂来制备。本发明组合物的一个优选的方法是将适 量的聚氨基葡糖和多糖分别溶解,例如约用每种溶剂总量的一半。添加剂如 粘度控制剂也因而与多糖一起溶解,但这要在聚氨基葡糖溶液和多糖溶液小 心地混在一个共同的溶液中,如混在混匀器内以形成最终的乳头浸洗剂之前 进行。
实施例
本发明将以下述非限制性的例子进一步进行描述。 实例1 基本程序
在滴入浓缩的细菌溶液之前及之后,将垂直琼脂平板用聚氨基葡糖-葡 聚糖硫酸酯溶液覆盖。作为一种乳头浸洗剂,将聚氨基葡糖-葡聚糖硫酸酯溶 液与用碘溶液进行比较,琼脂平板用完全相同的方法处理。琼脂平板在加热 箱中保温过夜后,统计细菌菌落的数目,记录细菌溶液的cfu/毫升的值。将未 处理的琼脂平板作为对照。
材料和试剂
大肠杆菌,分离自乳腺炎感染(Mastitlaboratoriet,SVA)
金色链球菌,分离自乳腺炎感染(Mastitlaboratoriet,SVA)
无乳链球菌、停乳链球菌和乳房链球菌,分离自乳腺炎感染 (Mastitlaboratoriet,SVA)
大豆汤,胰蛋白酶大豆汤,Difco 0370-01-1
垂直琼脂平板,Uricult Orion UF009
无菌工作台,Kojair,LAF 7022
光度计,Shimadzu UV-1201
振荡培养箱,Orbit Envrion-Shaker,Lab-Line Instruments Inc
加热箱,Memmert
NaCl,Riedel-de Haen 31434
聚氨基葡糖,Seacure 343,Pronova Biopolymer
乙酸,Riedel-de Haen
NaOH
甲基纤维素,Sigma M-0387
甘油,Johnson Matthey Electronics 13797
葡聚糖硫酸酯,Phamacia
碘溶液,Dipal,Alfa Laval 997515-80
程序
大肠杆菌,金色链球菌及三个不同的链球菌(无乳链球菌,停乳链球菌和 乳房链球菌)在无菌工作台上用接种环接种到分离的无菌的trypton大豆汤中, 然后在振荡培养箱内37℃保温过夜。第二天早上,细菌用生理盐水冲洗三 遍。用光度计测量其在650纳米的光密度,然后用标准曲线校准细菌密度。
聚氨基葡糖-葡聚糖硫酸酯溶液
将1克的聚氨基葡糖溶解于50毫升的无菌水中,将pH值调整到5.8,将 0.5克的甘油、0.1克的甲基纤维素和0.02克的葡聚糖硫酸酯溶解于50毫升 的无菌水中。然后将等量的聚氨基葡糖溶液和甘油+甲基纤维素+葡聚糖硫酸 酯溶液在混匀器内混匀。
碘溶液
基本溶液用6倍的水稀释,以供使用。
细菌实验
(ⅰ)细菌在聚氨基葡糖-葡聚糖硫酸酯膜下生长。
每一个细菌类型都按照如下方法分别处理:
三个琼脂平板浸入到细菌溶液中,其中两个分别用以上溶液浸洗三遍。 另一个平板不作处理。
(ⅱ)细菌在聚氨基葡糖-葡聚糖硫酸酯膜上生长。
每一个细菌类型都按照如下方法分别处理:
两个琼脂平板分别用以上溶液浸洗三遍。另一个平板不作处理。然后将 所有三个平板都冷浸到细菌溶液中。
琼脂平板在加热箱内37℃保温过夜。然后检查和记录平板和菌落的数 目。
结果
表1
细菌在聚氨基葡糖-葡聚糖硫酸酯膜下生长
病原体        对照              CFU/毫升       碘
                      聚氨基葡糖-葡聚糖硫酸酯
大肠杆菌    10000000             0              0
金色链球菌  1000000              0              0
链球菌      10000000              0             0
表2
细菌在聚氨基葡糖-葡聚糖硫酸酯膜上生长
病原体         对照            CFU/毫升            碘
                       聚氨基葡糖-葡聚糖硫酸酯
大肠杆菌    10000000              0             10000000
金色链球菌  1000000               0             1000000
链球菌      10000000              0             10000000
结果见图1及图2
实施例2
材料和方法
选6头年龄在3-5岁的奶牛。其中5头是SRB(Svensk Rodbrokig Boskap), 第六个是SRB和SLB(Svensk Laglands Boskap)的杂交种。这些动物均选自 同一个种,且均在实验前12天购买。奶牛被置于畜舍并使其草料的配给与原 来相同。草料的配给包括干草,青贮饲料,高饮用食物和精饲料。奶牛圈在长 形畜舍内,用橡胶垫和切刀削片做床。
五头奶牛处于第一个乳汁分泌期,一头奶牛处于第三个乳汁分泌期。乳 汁分泌的阶段在第二个到第七个乳汁分泌月之间发生变化。实验开始时奶牛 奶的产量在28-48千克ECM之间。乳房的健康程度在实验开始时良好,这是 经过阴性培养测验的,其CMT值是1和2。但是,一头奶牛乳房的一个部分 (左上)发现有溶菌酶阴性葡萄球菌,其细胞含量增大(CMT3),因而在实验中 将这个乳房的部分排除掉。
制备乳头浸洗溶液,该溶液包括(按重量百分比):1%的聚氨基葡糖, 0.02%的葡聚糖硫酸酯,0.1%的甲基纤维素和0.5%的甘油。
挤奶在07:30和15:30进行。挤奶后将奶牛奶样品直接用于细菌生 长和细胞含量分析。
细胞含量用荧光光电法进行测定(Fossomatic 90,A/S N.Foss Elecric Denmark)。细菌学分析是将10ul奶牛奶样品涂抹在加有七叶灵的奶牛血琼脂 平板上,37℃保温两天。在24小时和48小时后分别记录,将任何乳腺炎病原 菌进行分离和鉴定。在细菌生长过程中同时进行常规的CMT分析(California Mastit Test)。
本研究分三轮实验。在第一轮实验中,动物被分组,使三个奶牛与12个 乳房部分在右前和左后成对角线型进行乳头浸洗,三个奶牛在反对角线如左 前和右后进行乳头浸洗。其它11个乳房部分不进行处理,作为对照。
在第二轮实验中使用未在第一个实验中使用的四头奶牛,这四头奶牛具 有10个乳房部分。乳房部分进行随机分配,五个用新的乳头浸洗剂进行处理, 另五个作对照。两个奶牛各有三个乳房部分和两个乳房部分,另两个奶牛各 有两个乳房部分,见表5。
在第三轮实验中,使用四个奶牛的在以前实验中未用过的七个乳房部 分。所有七个乳房部分都用包含碘的商业乳头浸洗剂处理。两个奶牛各有一 个乳房部分,另两个奶牛各有两个和三个乳房部分,见85。
为了使实验中的乳房部分对感染更敏感,将所有乳房部分乳头沟内的角 蛋白去除。这是用一个daming-needle(John James & Sons,Ltd,Studley, Warwickshire,16号)进行的。在每天早上挤奶后将角蛋白从所有乳头沟中去 除。
在第一轮实验中,角蛋白的去除在第八天结束。对于两个在第七天还未 感染的奶牛,则在第七天和第八天的早上及傍晚去除角蛋白。
在第二轮实验中,角蛋白的去除在第六天结束,在这里为了保证奶牛的 感染,未进行两次角蛋白的去除。
在第三轮实验中,角蛋白的去除在第八天结束。角蛋白的去除在第七天 和第八天的早上及傍晚进行。
乳头浸洗处理10分钟后,所有的乳头都用细菌悬浮液浸泡10秒钟,这 个细菌悬浮液包含一个1-7×107CFU/毫升的β-hemolysing无乳链球菌菌株(S- B8)。
乳头部分的感染指标是随后的两份具有细菌生长和增加的细胞容量的 奶牛奶样品。一头具急性乳腺炎症状的奶牛则用抗生素和增加挤奶次数进行 处理。 实验安排
早晨挤奶
1.挤奶后乳头用70%的乙醇清洗。使乙醇蒸发,将每一个乳房部分的奶 牛奶样品放入测试管中。
2.然后将乳头用70%的乙醇仔细清洗。将灭菌的draning针插入乳小管, 旋转后抽回。所有的乳头都用此方法进行处理。
3.将经第二步实验预处理过的乳头用乳头浸洗剂浸洗。对照乳头不处 理。
4.10分钟后,所有的乳头都在细菌悬浮液中浸洗10秒钟,细菌悬浮液 为1-7×107CFU/毫升的β-hemolysing无乳链球菌。
夜间挤奶
1.挤奶后乳头用70%的乙醇清洗。使乙醇蒸发,将每一个乳房部分的奶 牛奶样品放入试管中。
2.将经第一步实验预先处理过的乳头用乳头浸洗剂浸洗。对照乳头不处 理。
3.10分钟后,所有的乳头都在细菌悬浮液中浸洗10秒钟。
统计分析用x2分析进行,公式如下:
95%的置信区间用如下公式计算:
(p 1 -p 2 )±1.96×se(p 1 -p 2 )
公式中se(p 1 -p 2 )用如下公式计算:
se=标准误差
n 1 =未处理乳房部分感染的数目
n 2 =处理乳房部分感染的数目
p 1 =未处理乳房部分的数目/n 1
p 2 =处理乳房部分的数目/n 2
结果
在两轮实验中,33个乳房部分共有14个被感染,其中12个是未经过乳 头浸洗的,2个是经过乳头浸洗的。第三轮实验中两头奶牛被感染。
从实验开始到乳房部分被感染之间的天数在2到9天之间。
表3
对于感染的乳房部分,将用乳头浸洗剂处理过的数目与未经过处理的数 目(对照)进行比较。第一轮和第二轮实验中列在同一个表内。
  处理    对照    总数 感染   2       12      14 未感染 4       5       19 总数   16      17      33
表4
用商用乳头浸洗剂处理过的感染乳房部分的数目。第三轮实验。         处理 感染    2 未感染  5 总数    7
第一轮实验
对照中,7/12的乳房区域被感染,浸洗过乳头的其1/11的乳房区域被 感染。
以无乳链球菌感染五头奶牛的某一乳房区域,所感染的乳房区域作为对 照。
感染一头奶牛(第335号)的三个乳房区域,2个对照乳房区域和1个乳 头浸洗乳房区域。第335号奶牛中强烈感染并在乳汁中表现出最高细胞含量 的是一个对照区域,见表5和6。
第二轮实验
对照中,5/5的乳房区域被感染,浸洗过乳头的其1/5的乳房区域被感 染,见表7。
感染第334号奶牛的用于实验的全部三个乳房区域,2个乳房区域为对 照,1个乳房区域为处理。处理的乳房区域感染最强烈并表现出最肿胀、溃 疡和细胞含量增加的强烈发炎反应。
实验中的其它三头奶牛分别感染其一个对照乳房区域,见表7。
第三轮实验
以商用碘乳头浸洗剂处理的7个乳房区域中感染了2个乳房区域,见表 8。
从第一轮和第二轮的结合实验结果中得到的x2分析结果是x2值为 11.39,它对应于一个自由度下<0.1%的可能值。即当h 0 (零假设)假设处理 组和无处理组无差别时,要得到这样一个11.39的偏差值,其可能性<0.1%。 当计算对应于两个实验组之间的差异(p 1 -p 2 )的95%的置信度区间时,其结果 是0.581±1.96,即在0.311和0.851之间。
只有7个乳房区域是部分的第三轮实验。它们由抗感染时间最长因而也 是选择结果的乳房区域组成。基于此原因在本轮实验中未进行数据评估。
不同轮次实验中的感染指数归纳如图3。
讨论
所有的奶牛均来自于同一头牲畜因而具有相同的免疫背景。其优点在于 人们可预期在对新环境包括新的饲料配给量的维持的重新适应期,这些奶牛 能够以基本上相同的方式进行反应。结合相似于奶牛所习惯的饲料配给量的 维持,它们一起可缩短(大约10天)从购奶牛到开始实验的时间。
选择无乳链球菌是由于以前动物极可能并未感染过该细菌,其常见于培 养中(β-溶血素(β-hemolysing)),其严格的乳房特异性及据记载它对青霉 素敏感。
第一轮和第二轮实验中感染了无处理乳房区域的1个乳房区域,而乳头 浸洗乳房区域接受感染的奶牛同时也感染其无处理乳房区域。
为了提高第一轮实验中直到第七天还未感染的两头奶牛的感染风险,将 角蛋白的清除延长到每天两次。乳小管角蛋白的产生率高(12-36小时) 而且可能个体间有差异,这由此范围内它们对相同危机的不同敏感性中可看 出。同样,对角蛋白量、优势角蛋白及其组成,个体间也有差异。
可以理解,在第一轮实验中感染滞后的动物在第二轮实验中感染也滞 后。
表5.第一轮实验后,第306号、331号、333号奶牛的细胞含量、CMT和细菌生 长分析结果。第306号和331号奶牛分别浸洗其右后和左前乳头,第333号奶牛分别浸 洗其右前和左后乳头。
天数       23       24         25         26
实验时间 am pm am pm am pm am pm
奶牛编号
306 细胞含量 Hf         ·Hb           Vb         ·Vf       97      158      207     1099      304      331      216     2133      173      208      158      764      193      221      220     2996        107        237        125       2008        135        303       1659       2679         65        128      28872       1052        150        179      20590       2812
CMT       Hf         ·Hb           Vb         ·Vf        2        2        1        3        3        2        2        3        2        2        1        3        2        2        2        4          2          1          2          4          2          2          4          4          1          1          5          3          1          1          5          5
细菌生长  Hf         ·Hb           Vb         ·Vf S S Sr S Sr Sr Sr Sr Sr E  Sr Sr
331 细胞含量  Hf         ·Hb           Vb         ·Vf       72       41       30       46      126       60       42       57       53       49       26       42      101       68       45       74         60         46         45         48         93         66         56         67         62         54         66         44        128         82        114        126
CMT       Hf         ·Hb           Vb         ·Vf        1        1        1        1        2        1        1        2        1        1        1        2        2        2        1        3          1          1          1          2          2          1          2          2          1          1          1          1          1          1          1          1
细菌生长  Hf         ·Hb           Vb         ·Vf
333 细胞含量         ·Hf           Hb         ·Vb           Vf       92       95      169      113      387      386      654      739      173      194      204      255      198      181      251      267        120        155        195        156        131        175        283        252        131        110        120        138        169        158        179        297
CMT     ·Hf           Hb         ·Vb           Vf        2        1        2        1        3        3        3        3        3        3        3        3        3        3        3        3          2          3          3          2          2          2          2          2          1          1          1          1          1          1          1
细菌生长·Hf           Hb         ·Vb           Vf
am=上午  Hf=右前乳头  Vb=左后乳头
pm=下午  Hb=右后乳头  Vf=左前乳头
细胞含量=以1000计数; CMT=加州乳腺炎实验
细胞生长,Sr=无乳链球菌,S=葡萄球菌;E=Ethacilin;
·=乳头浸泡;N=青霉素G
表5续.
天数       27       28       29       30
实验时间 am pm am pm am pm am pm
奶牛编号
306 细胞含量         Hf       ·Hb         Vb       ·Vf      107      193    16023    19707      138      245    14595    14980      80      124     9944    13471      172      143    10211    13422      102      108     3527     3839      261      220     7958     6175      119      149     2625     2724      205      217     4080     2793
CMT     Hf       ·Hb         Vb       ·Vf        2        2        5        5        2        2        5        5        2        2        5        5        2        2        5        5        1        2        4        4        3        3        5        4        2        2        3        3        2        2        4        4
细菌生长Hf       ·Hb         Vb       ·Vf     E Sr Sr E
33H 细胞含量Hf       ·Hb         Vb       ·Vf       84       57      194       47      111       70      159       82       63       66      126       50       99       89      194       91       31       34    12599       38      102      108    22497       84      102      136    23828       96      118      246    32556      167
CMT     Hf       ·Hb         Vb       ·Vf        2        1        2        1        1        1        2        1        1        1        1        1        2        1        2        1        1        1        5        1        2        2        5        3        1        2        5        2        1        1        5        2
细菌生长Hf       ·Hb         Vb       ·Vf Sr Sr  E Sr  N Sr  N Sr
333 细胞含量       ·Hf         Hb       ·Vb         Vf       81       53      129       80      108      104      149      142       86       54       80       85      152      105      143      131       45       48       79       59       96      114      130       92       78      112      255      128       96      133      160      115
CMT   ·Hf         Hb       ·Vb         Vf        1        1        2        2        2        2        2        2        1        1        1        1        2        2        2        1        1        1        2        1        1        1        3        1        1        1        2        2        1        1        2        1
细菌  ·Hf 生长    Hb       ·Vb         Vf
am=上午  Hf=右前乳头  Vb =左后乳头
pm=下午  Hb=右后乳头  Vf=左前乳头
细胞含量=以1000计数; CMT=加州乳腺炎实验;
细胞生长,Sr=无乳链球菌,S=葡萄球菌;E=Ethacilin;
·=乳头浸泡;N=青霉素G
表5续
天数          1          2
实验时间 am pm am pm
奶牛编号
306 细胞含量         Hf       ·Hb         Vb       ·Vf         88        116       1379       1402        192        173       2941       1957         36        153       1608        935        100        214       1692       1410
CMT     Hf       ·Hb         Vb       ·Vf          1          2          3          3          2          1          2          1          1          1          2          1          1          1          2          2
细菌生长Hf       ·Hb         Vb       ·Vf Sr
331 细胞含量Hf       ·Hb         Vb       ·Vf         85        139      41565        138        118        166      25450        187         50         58      21898         67         77         64      13532         62
CMT     Hf       ·Hb         Vb       ·Vf          1          1          5          1          1          1          5          1          1          1          5          1          1          1          5          1
细菌生长Hf       ·Hb         Vb       ·Vf N   Sr N   Sr     Sr     E
333 细胞含量       ·Hf         Hb       ·Vb         Vf        48        132        122         58         78       5099        242        114         69      39878        165        127        125      30290        305        175
CMT     Hf         Hb       ·Vb         Vf          1          1          2          1          1          5          2          1          1          5          1          1          1          5          1          1
细菌  ·Hf 生长    Hb       ·Vb         Vf Sr   N Sr   N Sr   N Sr
am=上午  Hf=右前乳头  Vb=左后乳头
pm=下午  Hb=右后乳头  Vf=左前乳头
细胞含量=以1000计数; CMT=加州乳腺炎实验;
细胞生长,Sr=无乳链球菌,S=葡萄球菌;E=Ethacilin;
·=乳头浸泡;N=青霉素G
表6.在第一轮实验中,第334、335和338号奶牛的细胞含量、CMT和细胞生长 分析结果。第306和335号奶牛分别浸泡其右前和左后乳头,第338号奶牛分别浸泡其 右后和左前乳头。
天数       23       24       25       26
实验时间 am pm am pm am pm am pm
奶牛编号
334 细胞含量·Hf           Hb         ·Vb           Vf      191       83      108      117      144       87      114      164      156       97      109      130      187       98      107      143      126       63      111    16959       72       65       84    43705       80       56       65    44471        106         78         78      40411
CMT     ·Hf           Hb         ·Vb           Vf        1        1        1        1        2        3        3        2        2        2        2        1        2        2        2        1        1        1        1        5        1        1        1        5        1        1        1        5          1          1          1          5
细菌生长·Hf           Hb         ·Vb           Vf E Sr Sr Sr   E Sr
335 细胞含量·Hf           Hb         ·Vb           Vf       87      100       68       80       86      101       94       75       64       58       42       38       83       96       51       67      318    14956       60      688     1029    35956      159     1037     4187    45703       76     2204       4733      37195        111       2314
CMT     ·Hf           Hb         ·Vb           Vf        1        1        1        1        2        1        1        1        1        1        1        1        1        1        1        1        3        5        1        3        4        5        1        4        5        5        1        4          5          5          1          4
细菌生长·Hf           Hb         ·Vb           Vf Sr Sr   E Sr Sr Sr Sr Sr   E Sr
338 细胞含量           Hf         ·Hb           Vb         ·Vf       33      193      146       53       83      130       90       87       82       77       69       66       74      118      146       82       33       49      112      424       58       65      150     1685       26       21       62     2935         69         74        130       2005
CMT       Hf         ·Hb           Vb         ·Vf        1        1        1        1        1        1        1        1        1        1        1        1        1        1        1        1        1        1        2        3        1        1        1        4        1        1        1        4          1          1          1          4
细菌生长           Hf         ·Hb           Vb         ·Vf S S S
am=上午  Hf=右前乳头  Vb=左后乳头
pm=下午  Hb=右后乳头  Vf=左前乳头
细胞含量=以1000计数; CMT=加州乳腺炎实验;
细胞生长,Sr=无乳链球菌,S=葡萄球菌;E=Ethacilin;
·=乳头浸泡;N=青霉素G
表6续.
天数     27     28     29     30
实验时间 am pm am pm am pm am pm
奶牛编号
334 细胞含量·Hf           Hb         ·Vb           Vf         66         80         91      35281         47         73         79      22651        105         67        134      23493        105        106         74      18960        103         81         83      16792         60        108        126      17835        106         85        106       8841        110         97         73      13602
CMT     ·Hf           Hb         ·Vb           Vf          1          1          2          5          1          1          1          5          2          1          1          5          2          1          1          5          2          1          1          5          1          1          1          5          1          1          1          5          1          1          1          5
细菌生长·Hf           Hb         ·Vb           Vf Sr   E Sr S
335 细胞含量·Hf           Hb           Vb         ·Vf       3369      32044         97       2061       2980      17631         99       2321       2289       9923         56       1353       2139      10081         80       2123       1032       6821         50        804       1398       7330         68        962        749       4418         60        530       1325       6865         77        921
CMT     ·Hf           Hb         ·Vb           Vf          4          5          2          3          5          5          2          5          4          5          1          3          3          5          1          3          3          5          1          3          3          4          2          3          3          4          1          3          3          4          1          3
细菌生长·Hf           Hb         ·Vb           Vf Sr E
338 细胞 含量      Hf         ·Hb           Vb         ·Vf         31         97         49       1445         40         73        105       1348         29         43         44        650         48         80         98        994         64         68        133        395        132         99        121        392         38        128         94        257         75        153        136        501
CMT     ·Hf           Hb         ·Vb           Vf          1          1          1          3          1          1          1          2          1          1          1          3          1          1          2          2          3          3          1          2          1          1          2          3          1          1          2          2
细菌      Hf 生长    ·Hb           Vb         ·Vf S S
am=上午   Hf=右前乳头    Vb=左后乳头
pm=下午   Hb=右后乳头    Vf=左前乳头
细胞含量=以1000计数;    CMT=加州乳腺炎实验;
细胞生长,Sr=无乳链球菌,S=葡萄球菌;E=Ethacilin;
·=乳头浸泡;N=青霉素G
表6续
天数          1          2
实验时间 am pm am pm
奶牛编号
334 细胞含量         ·Hf           Hb         ·Vb           Vf        124         78         81       4894         71         49        105       6013         82         63         65       1821        151         88         75       6099
CMT     ·Hf           Hb         ·Vb           Vf          1          1          1          4          1          1          1          3          1          1          1          3          1          1          1          3
细菌生长·Hf           Hb         ·Vb           Vf
335 细胞含量·Hf           Hb         ·Vb           Vf        675       3245         73        869        964       6150         82      22227        483       2186         66      19869      10731       2855         70      16789
CMT     ·Hf           Hb         ·Vb           Vf          3          4          1          3          3          4          2          5          3          3          1          5          5          3          1          5
细菌生长·Hf           Hb         ·Vb           Vf Sr Sr Sr Sr Sr(2)          E Sr
338 细胞含量           Hf         ·Hb           Vb         ·Vf         88        198         91        387       8862        204        138        692      30894        136        352        566      17377        209        299        621
CMT       Hf         ·Hb           Vb         ·Vf          1          1          1          3          5          1          1          2          5          1          1          2          5          1          1          3
细菌      Hf 生长    ·Hb         ·Vb           Vf Sr S Sr Sr   E Sr
am=上午   Hf=右前乳头    Vb=左后乳头
pm=下午   Hb=右后乳头    Vf=左前乳头
细胞含量=以1000计数;    CMT=加州乳腺炎实验;
细胞生长,Sr=无乳链球菌,S=葡萄球菌;E=Ethacilin;
·=乳头浸泡;N=青霉素G
表7.第二轮实验后第306、331、334和338号奶牛的细胞含量、CMT和细菌生 长的分析结果。第306号奶牛浸洗其右前乳头,第331号奶牛分别浸洗其右前和右后乳 头,浸洗第334和338号奶牛的右后乳头。
天数       13       14       15       16
实验时间 am pm am pm am pm am pm
奶牛编号
306 细胞  ·Hf 含量    Hb       89       78      160      131      141      127      235      123       91    31822        131      38666      129    39981        143      16350
CMT   ·Hf         Hb        2        2        3        3        2        1        3        2        2        3          2          5        2        5          5
细菌  ·Hf 生长    Hb E Sr Sr   E Sr
331 细胞  ·Hf 含量  ·Hb         Vf       58       75       50      112      109       67       76       92       65       72       74       55       69       73       51         97         75         39       46       69       33         88       1011         48
CMT   ·Hf       ·Hb         Vf        1        2        1        3        2        1        1        1        1        1        1        2        2        3        1          2          2          1        1        1        1          1          1          1
细菌  ·Hf 生长  ·Hb         Vf
334 细胞含量         Hf       ·Hb         Vb      116       47       47      149       62       62      113       56       86      159       71      333      108     6870     2686        143      26446       2550      144    43123     1459        174      36795       1561
CMT     Hf       ·Hb         Vb        1        1        1        1        1        1        1        1        1        2        1        3        2        4        3          3          5          3        1        5        3          1          5          3
细胞    Hf 生长  ·Hb         Vb        E S Sr Sr Sr Sr Sr   E Sr Sr
338 细胞  ·Hb 含量    Vb       50       32      135       88       29       26       64       35       44       26         56         57       28       18         34         43
CMT   ·Hb         Vb        1        1        1        1        1        1        1        1        1        1          1          1        1        1          1          1
细菌  ·Hb 生长    Vb
am=上午   Hf=右前乳头    Vb=左后乳头
pm=下午   Hb=右后乳头    Vf=左前乳头
细胞含量=以1000计数;    CMT=加州乳腺炎实验;
细胞生长,Sr=无乳链球菌,S=葡萄球菌;E=Ethacilin;
·=乳头浸泡;N=青霉素G
表7续
天数         17       18       19
实验时间 am pm am pm am pm
奶牛编号
306 细胞    Hf 含量  ·Hb        108      19969         95      12399
CMT     Hf       ·Hb          2          5          2          5
细菌    Hf 生长  ·Hb E E E
331 细胞  ·Hf 生长  ·Hb         Vf         56         68         41         95        133         50       62      133      375         96        130      26511      148      211    44130          6        174      35022
CMT   ·Hf       ·Hb         Vf          2          2          1          2          2          1        2        1        4          1          2          5        2        2        5          1          3          5
细菌  ·Hf 生长  ·Hb         Vf Sr   E Sr Sr   E Sr
334 细胞含量         Hf       ·Hb         Vb        112      27753       1816
CMT     Hf       ·Hb         Vb          1          5          3
细胞    Hf 生长  ·Hb         Vb E E E
338 细胞  ·Hb 含量    Vb         33         21         47         47       39       35         56       9548      110    29784        145      25099
CMT   ·Hb         Vb          1          1          1          1        1        1          1          5        3        5          3          5
细菌  ·Hb 生长    Vb Sr   E Sr Sr   E Sr
am=上午   Hf=右前乳头    Vb=左后乳头
pm=下午   Hb=右后乳头    Vf=左前乳头
细胞含量=以1000计数;    CMT=加州乳腺炎实验;
细胞生长,Sr=无乳链球菌,S=葡萄球菌;E=Ethacilin;
·=乳头浸泡;N=青霉素G
表8.用商用乳头浸洗组合物进行第三轮实验后,第306、331、333和335号奶 牛细胞含量、CMT和细菌生长的分析结果。第306号奶牛分别从其右前和右后乳头,第 333号奶牛分别浸洗其右前、左后和左前乳头,第335号奶牛浸洗其左后乳头。
天数       28       29       30       31
实验时间 am pm am pm am pm am pm
奶牛编号
306 细胞含量         Hf       96      144      107      155       57        132      114      114
CMT     Hf        1        1        1        1        1          1        1        1
细菌生长         Hf
331 细胞    Hf 含量    Hb       42       51       64       67       82       86      153      109       59       86        125        113       58       74       86       91
CMT     Hf         Hb        2        2        1        1        1        1        1        1        1        1          1          2        1        1        2        2
细菌    Hf 生长    Hb
333 细胞含量         Hf         Vb         Vf       49       73       81       95      150      133       34       85       82      104      131      195       44       73       68        139        115        195      103       91      119      159      114      156
CMT     Hf         Vb         Vf        1        2        3        2        2        2        1        3        1        1        1        1        1        3        3          3          2          3        2        1        2        3        3        3
细胞    Hf 生长    Vb         Vf
335 细胞    Vb 含量      115      133      118      144      106        144      225      333
CMT     Vb        3        2        3        1        3          3        2        3
细菌    Vb 生长
am=上午    Hf=右前乳头   Vb=左后乳头
pm=下午    Hb=右后乳头   Vf=左前乳头
细胞含量=以1000计数;    CMT=加州乳腺炎实验;
细胞生长,Sr=无乳链球菌,S=葡萄球菌;E=Ethacilin;
·=乳头浸泡;N=青霉素G
表8续.
天数        1        2        3        4
实验时间 am pm pm am pm am pm am
奶牛编号
306 细胞含量       ·Hf      125      152       62       66      129       8899      115      104
CMT     Hf        1        1        1        1        2          1        2        2
细菌生长       ·Hf Sr
331 细胞  ·Hf 含量    Hb       53       66      158      107       72      100       88       61      248      114        129        101      224      143      121      107
CMT     Hf         Hb        1        1        1        1        1        1        2        2        2        2          2          2        2        3        2        2
细菌  ·Hf 生长    Hb
333 细胞含量       ·Hf         Vb         Vf      107       44      106      199       83      184      250       83      167       93       72      146      217      135      263        134        141        172      207      208      278      192      164      198
CMT     Hf         Vb         Vf        1        1        2        2        2        3        2        2        2        2        2        2        2        2        3          3          3          3        3        3        1        2        2        2
细胞    Hf 生长    Vb         Vf
335 细胞    Vb 含量      265      456      316      434      605        251      280      240
CMT     Vb        2        3        2        2        3          3        1        2
细菌    Vb 生长 S
am=上午   Hf=右前乳头    Vb =左后乳头
pm=下午   Hb=右后乳头    Vf=左前乳头
细胞含量=以1000计数;    CMT=加州乳腺炎实验;
细胞生长,Sr=无乳链球菌,S=葡萄球菌;E=Ethacilin;
·=乳头浸泡;N=青霉素G
表8续
   天数          5        6
实验时间 pm am pm
奶牛编号
306 细胞含量        ·Hf      12055      38455
CMT      Hf          5          5
细菌生长        ·Hf         Sr         Sr
331 细胞   ·Hf 含量     Hb        208        187        148        114      271      136      143      118
CMT      Hf          Hb          1          2          2          2        3        2
细菌     Hf 生长     Hb
333 细胞含量        ·Hf          Vb          Vf        258        288        278        179        118        137      326      147      237      195       81       94
CMT      Hf          Vb          Vf          3          2          2          2          2          2        3        2        2
细胞     Hf 生长     Vb          Vf
335 细胞   ·Vb 含量       7997      23298
CMT      Vb          5          5
细菌     Vb 生长 Sr Sr
am=上午   Hf=右前乳头    Vb=左后乳头
pm=下午   Hb=右后乳头    Vf=左前乳头
细胞含量=以1000计数;    CMT=加州乳腺炎实验;
细胞生长,Sr=无乳链球菌,S=葡萄球菌;E=Ethacilin;
·=乳头浸泡;N=青霉素G