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1. KR1020160108584 - 시료의 다중분석

Note: Text based on automatic Optical Character Recognition processes. Please use the PDF version for legal matters

[ KO ]
청구의 범위
청구항 1
(a) 제1 태그를 포함하며 표적 분자에 대하여 특이적인 친화력을 가지는 압타머 및 시료를 접촉시킴으로써 혼합물을 제조하고, 여기에서 만일 상기 표적 분자가 상기 시료 내에 존재한다면 압타머 친화 복합체가 형성되고;

(b) 제1 포획 성분을 포함하는 제1 고체 지지체에 상기 혼합물을 노출시켜 제1 태그가 제1 고체 지지체의 제1 포획 성분과 결합하도록 하고;

(c) 상기 제1 고체 지지체와 결합되지 않은, 상기 혼합물 내 성분을 제거하고;

(d) 상기 제1 고체 지지체로부터 압타머 친화 복합체 및 비착물화된 압타머를 방출시키고;

(e) 상기 방출된 압타머 친화 복합체의 표적 분자에 제2 태그를 부착하고;

(f) 제2 포획 성분을 포함하는 제2 고체 지지체에 제2 태그가 부착된 압타머 친화 복합체를 노출시켜 제2 태그에 의해 상기 압타머 친화 복합체가 제2 고체 지지체의 제2 포획 성분과 결합하도록 하고;

(g) 제2 고체 지지체와 결합되지 않은 비착물화된 압타머를 압타머 친화 복합체로부터 분리하고; 및

(h) 상기 압타머 친화 복합체의 압타머를 검출함으로써 상기 표적 분자를 검출하는 것;

을 포함하는, 시료에 존재할 수 있는 표적 분자를 검출하기 위한 방법.
청구항 2
제1항에 있어서,

상기 (h) 단계는 압타머를 검출하기 전에 상기 압타머 친화 복합체로부터 압타머를 분리하는 것을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 3
제1항에 있어서,

상기 제1 태그는 제2 태그와 같고, 제2 태그는 (b) 단계 후 및 (f) 단계 전에 표적 분자에 첨가되며, 제2 태그의 첨가 전에 제1 포획 성분을 블록킹(blocking)하는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 4
제1항에 있어서,

상기 제1 태그는 제2 태그와 서로 다르고, 제2 태그는 (f) 단계 전에 표적 분자에 첨가되는 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 5
제1항에 있어서,

(a) 단계 이후와 (d) 단계 전에 동적 유발(kinetic challenge)을 유도하는 것을 더 포함하며, 여기에서 상기 동적 유발은 압타머 친화 복합체를 포함하는 혼합물을 희석하는 것, 압타머 친화 복합체를 포함하는 혼합물에 경쟁자를 첨가하는 것;

그리고 압타머 친화 복합체를 포함하는 혼합물을 희석하고 경쟁자를 첨가하는 것으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 6
제5항에 있어서,

상기 동적 유발은 압타머 친화 복합체를 포함하는 혼합물을 희석하고, 30초, 1분, 2분, 3분, 4분, 5분, 10분, 30분 및 60분보다 길거나 같은 시간으로 이루어지는 군으로부터 선택된 시간 동안 압타머 친화 복합체를 포함하는 혼합물을 배양하는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 7
제5항에 있어서,

상기 동적 유발은 압타머 친화 복합체를 포함하는 혼합물을 희석하고, 비특이적 복합체의 측정 농도에 대한 압타머 친화 복합체의 측정 농도의 비율이 증가되는 시간 동안 압타머 친화 복합체를 포함하는 혼합물을 배양하는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 8
제5항에 있어서,

상기 동적 유발은 압타머 친화 복합체를 포함하는 혼합물에 경쟁자를 첨가하고, ≥ 30초, ≥ 1분, ≥ 2분, ≥ 3분, ≥ 4분, ≥ 5분, ≥ 10분, ≥ 30분 및 ≥ 60분으로 이루어지는 군으로부터 선택된 시간 동안 압타머 친화 복합체를 포함하는 혼합물을 배양하는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 9
제5항에 있어서,

상기 동적 유발은 압타머 친화 복합체를 포함하는 혼합물에 경쟁자를 첨가하고, 비특이적 복합체의 측정 농도에 대한 압타머 친화 복합체의 측정 농도의 비율이 증가되는 시간 동안 압타머 친화 복합체를 포함하는 혼합물을 배양하는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 10
제5항에 있어서,

상기 동적 유발은 압타머 친화 복합체를 포함하는 혼합물을 희석하고, 압타머 친화 복합체를 포함하는 혼합물에 경쟁자를 첨가하고, 30초, 1분, 2분, 3분, 4분, 5분, 10분, 30분 및 60분보다 길거나 같은 시간으로 이루어지는 군으로부터 선택된 시간 동안 압타머 친화 복합체를 포함하는 혼합물을 배양하는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 11
제5항에 있어서,

상기 동적 유발은 압타머 친화 복합체를 포함하는 혼합물을 희석하고, 압타머 친화 복합체를 포함하는 혼합물에 경쟁자를 첨가하고, 비특이적 복합체의 측정 농도에 대한 압타머 친화 복합체의 측정 농도의 비율이 증가되는 시간 동안 압타머 친화 복합체를 포함하는 혼합물을 배양하는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 12
제5항에 있어서,

상기 동적 유발은 경쟁자의 도입을 포함하며, 상기 경쟁자는 올리고뉴클레오티드(oligonucleotide), 헤파린(heparin), 청어 정자 DNA(herring sperm DNA), 연어 정자 DNA(salmon sperm DNA), 덱스트란 설페이트(destran sulfate), 다중 음이온(polyanion), 어베이식 포스포디에스테르 폴리머(abasic phosphodiester polymer), dNTP 및 피로포스페이트(pyrophophate)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 13
제1항에 있어서,

상기 압타머 친화 복합체의 분리 속도는 30분보다 길거나 같은 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 14
제1항에 있어서,

상기 압타머 친화 복합체의 분리 속도는 30분 내지 240분 사이인 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 15
제1항에 있어서,

상기 압타머 친화 복합체의 분리 속도는 ≥ 30분, ≥ 60분, ≥ 90분, ≥ 120분, ≥ 150분, ≥ 180분, ≥ 210분, 및 ≥ 240분으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 16
제1항에 있어서,

상기 압타머는 Q-PCR, MS 및 혼성화로 이루어지는 군으로부터 선택되는 방법을 이용하여 검출되고 정량화되는 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 17
제16항에 있어서,상기 Q-PCR은 TaqMan ? PCR, PCR 공정 동안의 삽입성 형광 염료(intercalating fluorescent dye), 또는 PCR 공정 동안의 분자 비콘(molecular beacon)을 사용하여 수행되는 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 18
제1항에 있어서,

압타머에 검출가능한 부분(detectable moiety)을 더 첨가하는 것을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 19
제18항에 있어서,

상기 검출가능한 부분은 염료(dye), 양자점(quantum dot), 방사능표지(radiolabel), 전기화학적 작용기(electrochemical functional group), 효소(enzyme) 및 효소 기질(enzyme substrate)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 20
제19항에 있어서,

상기 염료는 형광 염료인 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 21
제19항에 있어서,

상기 효소는 알칼리성 포스파타아제(alkaline phosphatase) 또는 양고추냉이 과산화효소(horseradish peroxidase)인 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 22
제1항에 있어서,

상기 압타머는 단일 가닥 핵산 또는 이중 가닥 핵산인 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 23
제1항에 있어서,

상기 압타머는 DNA, RNA 또는 DNA와 RNA 모두를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 24
제1항에 있어서,

상기 압타머는 적어도 하나의 화학적 변형을 추가적으로 포함하며, 여기에서 상기 적어도 하나의 화학적 변형은 리보오스 위치, 데옥시리보오스 위치, 포스페이트 위치 및 염기 위치로부터 독립적으로 선택된 하나 또는 그 이상의 위치에서의 화학적 치환인 것을 특징으로 하며, 여기에서 상기 화학적 변형은 2'-위치의 당 변형(2'-position sugar modification), 2'-플루오로(2'-F), 2'-O-메틸(2'-OMe), 8-위치의 퓨린 변형, 시토신 엑소시클릭 아민(exocyclic amines)에서의 변형, 5-브로모우라실(5-bromouracil)의 치환, 5-브로모데옥시우리딘(5-bromodeoxyuridine)의 치환, 5-브로모데옥시시티딘(5-bromodeoxycytidine)의 치환, 기본골격(backbone) 변형, 메틸화, 3' 캡(3' cap) 및 5' 캡(5' cap)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 25
제1항에 있어서,

상기 표적 분자는 단백질, 펩티드, 탄수화물, 다당류, 당단백질, 호르몬, 수용체, 항원, 항체, 바이러스, 보조인자(cofactors), 약물, 염료, 및 성장 인자로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 26
제1항에 있어서,

상기 표적 분자는 단백질 또는 펩티드인 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 27
제1항에 있어서,

상기 시료는 생물학적 샘플, 환경 샘플, 화학 샘플, 약제학적 샘플, 식품 샘플, 농업 샘플 및 가축 샘플로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 28
제1항에 있어서,

상기 시료는 전혈(whole blood), 백혈구, 말초혈액 단핵세포(peripheral blood mononuclear cells), 혈장, 혈청, 가래(sputum), 입김(breath), 소변, 정액, 침(saliva), 뇌막액(meningeal fluid), 양수(amniotic fluid), 선액(glandular fluid), 림프액(lymph fluid), 유두 흡인물(nipple aspirate), 기관지 흡인물(bronchial aspirate), 활액(synovial fluid), 관절 흡인물(joint aspirate), 세포, 세포 추출물, 대변(stool), 조직 추출물, 조직 생검, 및 뇌척수액으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 29
제1항에 있어서,

상기 시료는 혈장 또는 혈청인 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 30
제1항에 있어서,

상기 제1 태그 및 상기 제2 태그는 각각 폴리뉴클레오티드(polynucleotide), 폴리펩티드(polypeptide), 펩티드 핵산(peptide nucleic acid), 잠금 핵산(locked nucleic acid), 올리고당(oligosaccharide), 과당(polysaccharide), 항체(antibody), 애피바디(affibody), 항체 모조체(antibody mimic), 세포 수용체(cell receptor), 리간드(ligand), 지질(lipid), 비오틴(biotin), 아비딘(avidin), 스트렙아비딘(strepavidin), 엑스트라비딘(Extravidin), 뉴트라비딘(neutravidin), 금속(metal), 및 히스티딘(histidine)으로부터 선택된 적어도 하나의 성분을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 31
제1항에 있어서,

상기 제1 포획 성분 및 제2 포획 성분은 각각 폴리뉴클레오티드(polynucleotide), 폴리펩티드(polypeptide), 펩티드 핵산(peptide nucleic acid), 잠금 핵산(locked nucleic acid), 올리고당(oligosaccharide), 과당(polysaccharide), 항체(antibody), 애피바디(affibody), 항체 모조체(antibody mimic), 세포 수용체(cell receptor), 리간드(ligand), 지질(lipid), 비오틴(biotin), 아비딘(avidin), 스트렙아비딘(strepavidin), 엑스트라비딘(Extravidin), 뉴트라비딘(neutravidin), 금속(metal), 히스티딘(histidine)으로부터 선택된 적어도 하나의 성분을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 32
제1항에 있어서,

상기 제1 태그는 방출가능한 부분을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 33
제1항에 있어서,

상기 제1 고체 지지체 및 제2 고체 지지체는 각각 폴리머 비드(polymer bead), 아가로오스 비드(agarose bead), 폴리스티렌 비드(polystyrene bead), 아크릴아마이드 비드(acrylamide bead), 솔리드 코어 비드(solid core bead), 다공성 비드(porous bead), 상자성 비드(paramagnetic bead), 유리 비드(glass bead), 조절된 공극을 가지는 비드(controlled pore bead), 미량역가 웰(microtitre well), 시클로-올레핀 공중합체 기질(cyclo-olefin copolymer substrate), 막(membrane), 플라스틱 기질(plastic substrate), 나일론(nylon), 랭뮤어-블러짓 필름(Langmuir-Blodgett films), 유리, 게르마늄 기질(germanium substrate), 실리콘 기질(silicon substrate), 실리콘 웨이퍼 칩(silicon wafer chips), 유통 칩(flow through chips) 및 마이크로 비드(microbead), 폴리테트라플로오로에틸렌 기질(polytetrafluoroethylene substrate), 폴리스티렌 기질(polystyrene substrate), 갈륨 비소 기질(galliu m arsenide substrate), 금 기질 및 은 기질로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 34
제1항에 있어서,

상기 압타머를 정량함으로써 상기 표적을 정량하는 것을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 35
제1항에 있어서,

압타머의 검출은 제3 고체 지지체에 압타머를 혼성화시키는 것을 포함하고, 여기에서 상기 제3 고체 지지체는 다수의 위치를 지정할 수 있는 부분(addressable feature)을 포함하며, 상기 부분 중 적어도 하나는 압타머 내에 포함된 서열에 상보적인 지지체 상에 배열된 적어도 하나의 포획 성분을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.