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1. WO2020135352 - METHOD FOR PREPARING PROGESTERONE PARTICULATE, PREPARED PROGESTERONE PARTICULATE AND INJECTION THEREOF

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说明书

发明名称 0001   0002   0003   0004   0005   0006   0007   0008   0009   0010   0011   0012   0013   0014   0015   0016   0017   0018   0019   0020   0021   0022   0023   0024   0025   0026   0027   0028   0029   0030   0031   0032   0033   0034   0035   0036   0037   0038   0039   0040   0041   0042   0043   0044   0045   0046   0047   0048   0049   0050   0051   0052   0053   0054   0055   0056   0057   0058   0059   0060   0061   0062   0063   0064   0065   0066   0067   0068   0069   0070   0071   0072   0073   0074   0075   0076   0077   0078   0079   0080   0081   0082   0083   0084   0085   0086   0087   0088   0089   0090   0091   0092   0093   0094   0095   0096   0097   0098   0099   0100   0101   0102   0103   0104   0105   0106   0107   0108   0109   0110   0111   0112   0113   0114   0115   0116   0117   0118   0119   0120   0121   0122   0123   0124   0125   0126   0127   0128   0129   0130   0131   0132   0133   0134   0135   0136   0137   0138   0139   0140   0141   0142   0143   0144   0145   0146   0147   0148   0149   0150   0151   0152   0153   0154   0155   0156   0157   0158   0159   0160   0161   0162   0163   0164   0165   0166   0167   0168   0169   0170   0171   0172   0173   0174   0175   0176   0177   0178   0179   0180   0181   0182   0183   0184   0185   0186   0187   0188   0189   0190   0191   0192   0193   0194   0195   0196   0197   0198  

权利要求书

1   2   3   4   5   6   7   8   9   10   11   12   13   14   15  

附图

1   2   3   4   5   6   7   8   9   10   11   12   13  

说明书

发明名称 : 制备黄体酮颗粒物的方法、所得黄体酮颗粒物及其注射剂

技术领域

[0001]
本发明涉及制备黄体酮颗粒物,尤其是黄体酮晶体或粉体的方法,以及涉及所得黄体酮晶体或粉体及其注射剂。

背景技术

[0002]
众所周知,对于药物,产品的剂型、物理形态,诸如晶型、粒度、溶解性等对其体内释放、生物利用度等方面具有显著的影响。因此,制备具有优势晶型、优势粒度等的制剂受到越来越多的关注。
[0003]
黄体酮在临床上广泛应用于治疗月经不调、先兆流产等黄体功能不足引起的病症。已知,黄体酮是一种具有多晶型的物质,其中的α晶型和β晶型比较稳定且晶体结构明确(熔点分别约为131℃、123℃),均具有生物活性(R.Woolf et.al Proc.Soc.Exp.Biol.Med.,1948,68(1),79-83;R.Lancaster et.al J.Pharm.Sci.,2007,96(12),3419-3431)。不同晶型结构的黄体酮具有不同的熔点、表观溶解度、光学性质等,因此对所得制剂的体内代谢、生物利用度等造成影响。
[0004]
现有技术中常见的多晶型药物的制备方法包括溶液结晶、熔融法、升华法、粉碎研磨法等常规方法,并且还包括急速冷冻、毛细管生成法、高通量筛选法、超临界流体法、激光诱导等非常规方法。
[0005]
例如,在CN107417756A公布了一种浓缩黄体酮有机溶液制备黄体酮晶型的方法。然而,该文献所公开的方法还需进行研磨等处理才能得到粒径分布符合要求的样品。再者,CN109223722A公开了一种通过冻干黄体酮水包油型乳液制备黄体酮纳米晶注射剂的方法。然而该文献所记载的方法一方面在放大生产冻干时使用的有机溶剂量会随之增加,不适于直接冻干, 另一方面,黄体酮纳米晶的尺寸受乳滴大小限制,可调范围有限。
[0006]
此外,目前最常见的黄体酮制剂为口服制剂和注射剂。口服制剂虽然给药最为方便,患者顺应性好,但其首过效应显著,生物利用度仅为10%左右。因此,从临床应用来看,黄体酮水性长效注射剂开发的重要性越来越显著。黄体酮水性长效注射剂的实现方式主要有包载式(例如聚合物型水性黄体酮注射剂等)和直接式(例如黄体酮混悬型长效注射剂以及粉针剂)。其中包载式涉及到载药量、包封率等方面的问题,不仅制备过程较为复杂,也会增加后期质量标准制定的工作难度。而直接式可以根据临床需要方便地控制黄体酮粒径及浓度,使给药频率最低而治疗效果最佳,最大程度地增强患者的顺应性。
[0007]
因此,开发出一种工艺简单、稳定性好、有缓释作用的黄体酮颗粒物,尤其是晶体或粉体的制备方法具有重要意义。
[0008]
发明内容
[0009]
鉴于现有技术中制备不同黄体酮颗粒物,尤其是晶体或粉体存在的问题,本发明提出了一种稳定性好的黄体酮颗粒物的制备方法,并且本发明所提出的方法操作简单,易于工业化放大生产。
[0010]
为了实现本发明的上述目的,本发明的第一方面提供了一种制备黄体酮颗粒物的方法,其中所述方法包括:
[0011]
步骤1,使黄体酮溶于溶剂中以提供黄体酮溶液;
[0012]
步骤2,将所述黄体酮溶液以预定速度泵入到高速剪切或剧烈搅拌的黄体酮的析出溶剂中以使黄体酮析出;和
[0013]
步骤3,分离析出物并进行干燥以获得所述黄体酮颗粒物;其中,所述黄体酮颗粒物为黄体酮晶体或黄体酮粉体。
[0014]
具体地,一些实施方案中,本发明涉及一种制备黄体酮晶体的方法,其中,所述方法包括:
[0015]
将黄体酮溶于溶剂中以提供黄体酮溶液;
[0016]
将所述黄体酮溶液以预定速度泵入至冷却的高速剪切或剧烈搅拌的析出溶剂中以使黄体酮析出;所述的析出溶剂为水、有机溶剂或水与有机溶剂的混合物;
[0017]
分离所析出的黄体酮并进行冷冻干燥以获得黄体酮晶体。
[0018]
在本发明的一些实施方案中,所述黄体酮溶液的浓度为10mg/mL至500mg/mL;进一步优选为200mg/mL至450mg/mL。
[0019]
在本发明的一些实施方案中,溶解黄体酮所用的溶剂为与水互溶的有机溶剂;优选地,所述溶解黄体酮所用的溶剂为选自甲醇、无水乙醇、异丙醇和丙酮中的一种或它们的混合物,或者上述醇类的水溶液;优选地,所述溶解黄体酮所用的溶剂为甲醇、无水乙醇或95vol%乙醇;更优选地,所述溶解黄体酮所用的溶剂为甲醇或无水乙醇。
[0020]
其中,在本发明中,为获得所需浓度的黄体酮溶液,可以进行适当的加热。
[0021]
在本发明的一些实施方案中,所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇和丙酮中的一种或多种;优选地,所述析出溶剂为水、乙醇或水与乙醇的混合物。在本发明的一些实施方案中,所述析出溶剂为水;另一些实施方案中,所述析出溶剂为乙醇;又一些实施方案中,所述析出溶剂为乙醇和水的混合物,其中,可根据需要调节水和乙醇的体积比为20:1~1:20,例如水和乙醇的体积比包括但不限于4:1、1:1、1:4。
[0022]
在本发明的一些实施方案中,可通过蠕动泵控制黄体酮溶液向析出溶剂的泵入,泵入速度例如为50mL/min至500mL/min,优选100mL/min至400mL/min。
[0023]
在本发明的一些实施方案中,所述剧烈搅拌通常为500rpm至2000rpm,优选700rpm至1000rpm的转速。所述高速剪切可通过转速为3000rpm至 20000rpm的高速搅拌来实现,优选地转速为7000rpm至20000rpm。
[0024]
在本发明的一些实施方案中,所述析出溶剂的温度为-20℃至25℃。更具体地,当以水作为析出溶剂时,其温度为1℃至25℃;当以有机溶剂作为析出溶剂时,析出溶剂的温度为-20℃至0℃;当以水与有机溶剂的混合物作为析出溶剂时,析出溶剂的温度为-10℃至25℃,优选地,析出溶剂的温度为-10℃至0℃。
[0025]
在本发明一些实施方案中,泵入的黄体酮溶液与析出溶剂的体积比为1.5:1~1:10,优选为1:1.5~1:5。其中,可例如通过蠕动泵控制黄体酮溶液向析出溶剂的泵入,泵入速度例如为50mL/min至500mL/min,优选100mL/min至400mL/min。
[0026]
为了分散的需要,所述黄体酮溶液中可进一步包含:基于所述黄体酮溶液的质量,0.5wt%至3wt%,优选1wt%至2wt%的表面活性剂。所述表面活性剂包括但不限于聚山梨酯20(吐温20)、聚山梨酯80(吐温80)、失水山梨醇脂肪酸酯(司盘20、40、60、80)、琥珀酸酯、单硬脂酸甘油酯等。其中,这些表面活性剂可能会包含在黄体酮沉淀物中。通过分离步骤,例如通过洗涤沉淀,可除去沉淀物中的少量的表面活性剂,从而在最终的粉体中可以不含或仅含痕量的表面活性剂。
[0027]
根据本发明的方法,具体地,为得到α晶型的黄体酮,优选乙醇作为析出溶剂;更优选地,可以向析出溶剂中事先加入α型晶种,此时,析出溶剂的种类可以不受限制。为得到β晶型的黄体酮,优选以水作为析出溶剂,甲醇作为溶解黄体酮的有机溶剂;更优选地,类似地,可以事先向析出溶剂中加入β型晶种。
[0028]
本发明的一些实施方案中,可将晶种加入到冷却至特定温度的析出溶剂中,其中晶种可以以粉末或混悬液形式,优选以混悬液形式来加入。在本发明中,作为晶种的原料可通过剪切、超声等途径分散于水中。其中, 为了促进晶种的分散,水中可加入0.1%~2%(w/v)的表面活性剂(例如吐温20等)。其中,加入的晶种的量可为0.1wt%~10wt%(相对于黄体酮),优选为1wt%~5wt%(相对于黄体酮)。
[0029]
在本发明的一些实施方案中,所述分离为过滤,优选抽滤。
[0030]
在本发明的一些实施方案中,所述冷冻干燥包括:将分离得到的沉淀物重新分散于2wt%至4wt%甘露醇水溶液中;然后进行冻干以得到含量≥80wt%的黄体酮晶体,例如80wt%至86wt%。
[0031]
其中,在本发明中,通过调节黄体酮溶液浓度、泵入速度、搅拌/剪切速度、析出溶剂的种类和冷却温度,尤其是调节搅拌/剪切速度,所得黄体酮晶体的粒径在0.3μm至60μm(D[4,3],体积加权平均粒径)范围内,优选粒径范围为10μm至30μm。
[0032]
根据本发明的另一方面,提供了由上述方法得到的黄体酮晶体,所述黄体酮晶体具有0.3μm至60μm,优选10μm至30μm的粒径。
[0033]
根据本发明的又一方面,提供了一种黄体酮注射剂,包括治疗有效量的本发明的黄体酮晶体。
[0034]
本发明的黄体酮注射剂可为粉针剂或混悬剂。
[0035]
根据部分实施方式,所述黄体酮粉针剂进一步包括空间稳定剂、表面活性剂和渗透压调节剂等。
[0036]
根据部分实施方式,所述黄体酮混悬液注射剂还包括注射用水、空间稳定剂、表面活性剂、渗透压调节剂和pH调节剂等。
[0037]
本发明对上述空间稳定剂、表面活性剂、渗透压调节剂和pH调节剂等没有特别限制,可使用现有技术中可药用的适宜的佐剂。例如,空间稳定剂包括但不限于羟丙基甲基纤维素及其盐类、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇类等;表面活性剂包括但不限于聚山梨酯类、失水山梨醇脂肪酸酯(司盘20、40、60、80)、琥珀酸酯、单硬脂酸甘油酯等;渗透压调节剂包括但不 限于糖类(如葡萄糖,果糖等)、多羟糖醇(如甘露醇等)、无机盐类(如氯化钠)等;pH调节剂包括但不限于盐酸、氢氧化钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠等。
[0038]
在本发明的部分实施方案中,提供了制备黄体酮粉体的方法,包括:
[0039]
使黄体酮溶于有机溶剂中以提供黄体酮溶液;
[0040]
将黄体酮溶液以预定流量加入高速剪切的黄体酮析出溶剂中;和
[0041]
分离沉淀物并干燥以获得所述黄体酮粉体。
[0042]
根据本发明的方法,黄体酮的有机溶液以预定流量加入高速剪切的黄体酮析出溶剂中,使黄体酮迅速在析出溶剂中析出沉淀。通过控制单位时间内加入的黄体酮量以及剪切速率最终可以获得所需粒径的黄体酮粉体。例如,通常来说黄体酮溶液的流量越小,析出溶剂的剪切速率越快,则获得的黄体酮粉体的粒径越小。
[0043]
本发明的方法中所述黄体酮溶液的浓度为10~300mg/mL;进一步优选为30~200mg/mL。
[0044]
所述有机溶剂为与水互溶的有机溶剂,所述有机溶剂可选自甲醇、乙醇、丙醇和乙二醇中的一种,或者是这些醇中的两种或更多种的混合溶剂,或者是上述醇的水溶液。优选地,所述醇的水溶液中醇的体积百分比在80vol%以上,更优选在90vol%以上,最优选为95vol%以上。根据较佳的实施方式,所述有机溶剂为甲醇、乙醇、或95vol%乙醇水溶液。
[0045]
为获得所需的黄体酮溶液的浓度,可以进行适当的加热。
[0046]
根据部分实施方式,本发明的方法中,所述高速剪切可通过转速为700~2000rpm的高速搅拌实现。根据部分实施方式,所述高速剪切可通过高速剪切仪来实现,其中剪切头转速可为5000~20000rpm。
[0047]
最终加入的所述黄体酮溶液和析出溶剂的体积比为1:3~1:30,优选为1:10,进一步优选为1:5。
[0048]
根据部分实施方式,所述黄体酮析出溶剂为水。
[0049]
为了分散的需要,所述黄体酮析出溶剂中可进一步包含0.1~2wt%,优选0.3~0.8wt%的表面活性剂。
[0050]
这些表面活性剂可能会包含在黄体酮沉淀物中。通过分离步骤,例如通过洗涤沉淀,可除去沉淀物中的少量的表面活性剂,从而在最终的粉体中可以不含或仅含痕量的表面活性剂。
[0051]
所述表面活性剂选自聚山梨酯20(吐温20)、聚山梨酯80(吐温80)、失水山梨醇脂肪酸酯(如司盘20、40、60、80)、聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯(TPGS)、聚乙二醇15羟硬脂酸酯(如 HS15)、泊洛沙姆、十二烷基硫酸钠(SDS)、单脂肪酸甘油酯、卵磷脂、环糊精、和聚氧乙烯蓖麻油中的一种或多种;优选地,所述表面活性剂选自吐温20、吐温80、失水山梨醇脂肪酸酯(特别是司盘20)、泊洛沙姆中的一种或多种;进一步优选地,所述表面活性剂为吐温20。
[0052]
根据一种实施方式,所述黄体酮析出溶剂可预先冷却至5~10℃。冷却的析出溶剂有助于黄体酮更快速和更大量地析出。
[0053]
本发明的方法中,通过流量的调节,配合其他工艺条件,如溶液浓度、析出溶剂的剪切速率等可以获得不同粒径的黄体酮粉体。通常来说,预定流量可在6~100mL/min范围内调节。
[0054]
当所有黄体酮溶液均加入到析出溶剂后,将沉淀的黄体酮分离,并干燥。
[0055]
在部分实施方式中,所述分离为过滤,优选抽滤。
[0056]
在部分实施方式中,所述干燥的方式为冷冻干燥。
[0057]
在部分实施方式中,所述冷冻干燥的操作步骤为:将分离得到的沉淀物重新分散于2wt%~4wt%甘露醇水溶液中之后通过冻干得到所述黄体酮粉体;
[0058]
其中,所述分散的步骤优选通过搅拌方式分散,所述搅拌的转速优选500~1000rpm。
[0059]
其中,黄体酮的有机溶液以预定流量加入高速剪切的黄体酮析出溶剂中,使黄体酮迅速在析出溶剂中析出沉淀。通过控制单位时间内加入的黄体酮量以及剪切速率最终可以获得所需粒径的黄体酮粉体。例如,通常来说黄体酮溶液的流量越小,析出溶剂的剪切速率越快,则获得的黄体酮粉体的粒径越小。
[0060]
通过本发明的方法可获得微米级的黄体酮颗粒物且稳定性好,同时可以对最终获得的颗粒物的粒径进行可控调节,从而获得粒径在0.3~60μm,优选10~30μm范围内可调的颗粒物。通过进一步的药代动力学实验证实,采用本申请制备的黄体酮注射剂不仅实现至少5天的缓释效果,达到了缓释目标,能够减少给药频率,提高患者顺应性,而且稳定性好。此外,本发明的方法操作简单,成本低,易于工业化放大生产。

附图说明

[0061]
图1为根据本发明的实施例1的样品的XRD图谱;
[0062]
图2为根据本发明的实施例1的样品的DSC图谱;
[0063]
图3为根据本发明的实施例2的样品的XRD图谱;
[0064]
图4为根据本发明的实施例2的样品的DSC图谱;
[0065]
图5为根据本发明的实施例3的样品的XRD图谱;
[0066]
图6为根据本发明的实施例3的样品的DSC图谱;
[0067]
图7为根据本发明的实施例4的样品的XRD图谱;
[0068]
图8为根据本发明的实施例4的样品的DSC图谱;
[0069]
图9为根据本发明的实施例5的样品的XRD图谱;
[0070]
图10为根据本发明的实施例6的样品的XRD图谱;
[0071]
图11为根据本发明的实施例6的样品的DSC图谱;
[0072]
图12为根据本发明的实施例7的样品的XRD图谱;
[0073]
图13为根据本发明的实施例17所得到的血浆中黄体酮浓度随时间的变化曲线。

具体实施方式

[0074]
下面将结合本发明具体实施方式及附图,对本发明实施方式中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施方式仅仅是本发明的一部分实施方式,而不是全部的实施方式。基于本发明中的实施方式,本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施方式,都属于本发明保护的范围。
[0075]
以下通过具体实施例来进一步说明本发明的各方面,本发明的各个优点将通过以下实施例显示出来。
[0076]
其中,在以下实施例中,除非另有说明,否则所有的试剂、仪器等都商购所得。
[0077]
实施例1.黄体酮样品的制备
[0078]
黄体酮溶液配制:称取5g吐温20和90g黄体酮,加入200mL无水乙醇,于60℃下搅拌溶解。
[0079]
析出溶剂配制:量取130mL无水乙醇于带夹套钢杯中,用冷却循环装置冷却至-20℃。
[0080]
样品制备:将剪切头置入析出溶剂中,转速调至7000rpm。将黄体酮溶液以117mL/min的速度泵入析出溶剂中(泵入时间:90s),将得到的混悬液进行抽滤,滤饼用3000mL纯水洗涤。
[0081]
将固体沉淀物转移至甘露醇溶液中(含甘露醇14g,水400mL),500rpm条件下搅拌30min后将得到的混悬液进行冻干(东富龙,LYO-2),冻干条件如下表1。
[0082]
表1.冻干条件
[0083]
[0084]
粒径测试:用马尔文MasterSizer 3000测量粒径(水为测定载体),平均粒径D[4,3]=23.339μm。
[0085]
XRD检测:用粉末衍射仪(X'Pert 3 Powder,Malvern Panalytical)对样品进行XRD测试(Cu,40mA,3.5°~40°),如图1所示,在2θ=12.7101°处出现明显衍射峰,为α晶型。
[0086]
DSC检测:用梅特勒DSC(DSC 500,METTLER TOLEDO)对所得样品进行测试(35℃至160℃,10K/min)。如图2所示,样品在131.20℃出现吸热峰,表明所得晶型为α晶型。
[0087]
实施例2.黄体酮混悬液的制备
[0088]
黄体酮溶液配制:称取5g吐温20和90g黄体酮,加入200mL无水乙醇,于60℃条件搅拌溶解。
[0089]
析出溶剂配制:量取104mL纯水、26mL无水乙醇于带夹套钢杯中,用冷却循环装置冷却至-10℃。
[0090]
样品制备:将剪切头置入析出溶剂中,转速调至7000rpm,将黄体酮溶液以219mL/min的速度泵入析出溶剂中(泵入时间:20s),将得到的混悬液进行抽滤,滤饼用3000mL纯水洗涤。
[0091]
将固体沉淀物转移至甘露醇溶液中(含甘露醇6g,水160mL),500rpm条件下搅拌30min后将得到的混悬液进行冻干,冻干条件如实施例1中所示。
[0092]
XRD检测:用粉末衍射仪(X'Pert 3 Powder,Malvern Panalytical)对样品进行XRD测试(Cu,40mA,3.5°~40°),如图3所示,在2θ=12.7213°(α晶型)和2θ=13.6486°(β晶型)出现衍射峰,为混合晶型。
[0093]
分散剂配制:称量0.75g司盘20、1.9g吐温20、1.25g磷酸二氢钠、2.5g磷酸氢二钠、3.05g氯化钠置于1000mL烧杯中,加入466mL水搅拌至完全溶解得到分散剂。
[0094]
混悬液制备:称量2.94g冻干样品(含黄体酮2.5g)置于150mL烧杯中,加入分散剂47.06g后于4000rpm条件下剪切5min。
[0095]
粒径测试:用马尔文MasterSizer 3000测量粒径(水为测定载体),平均粒径D[4,3]=15.846μm。
[0096]
DSC检测:用梅特勒DSC(DSC 500,METTLER TOLEDO)对所得样品进行测试(35℃至160℃,10K/min)。如图4所示,样品在125.12℃(β晶型)、131.40℃(α晶型)出现吸热峰,表明所得晶型为混合晶型。
[0097]
实施例3.黄体酮样品的制备
[0098]
黄体酮溶液配制:称取5g吐温20和90g黄体酮,加入200mL无水乙醇,于60℃下搅拌溶解。
[0099]
析出溶剂配制:量取26mL纯水、104mL无水乙醇于带夹套钢杯中,用冷却循环装置冷却至-10℃。
[0100]
样品制备:将剪切头置入析出溶剂中,转速调至7000rpm,将黄体酮溶液以219mL/min的速度泵入析出溶剂中(泵入时间:20s),将得到的混悬液进行抽滤,滤饼用3000mL纯水洗涤,将固体沉淀物转移至甘露醇溶液中(含甘露醇6g,水160mL),500rpm条件下搅拌30min后将得到的混悬液进行冻干(冻干条件同实施例1)。
[0101]
粒径测试:用马尔文MasterSizer 3000测量粒径(水为测定载体),平均粒径D[4,3]=29.164μm。
[0102]
XRD检测:用粉末衍射仪(X'Pert 3 Powder,Malvern Panalytical)对样品进行XRD测试(Cu,40mA,3.5°~40°),如图5所示,在2θ=12.7192°(α晶型)和2θ=13.6487°(β晶型)出现衍射峰,为混合晶型。
[0103]
DSC检测:用梅特勒DSC(DSC 500,METTLER TOLEDO)对所得样品进行测试(35℃至160℃,10K/min)。如图6所示,样品在123.93℃(β晶型)及131.60℃(α晶型)表现出吸热峰,表明所得晶型为混合晶型。
[0104]
实施例4.黄体酮混悬液的制备
[0105]
黄体酮溶液配制:称取5g吐温20和90g黄体酮,加入200mL无水乙醇,于60℃下搅拌溶解。
[0106]
析出溶剂配制:量取104mL纯水、26mL无水乙醇于带夹套钢杯中,用冷却循环装置冷却至-10℃。
[0107]
晶种混悬液配制:称量α晶型黄体酮10g于0.2%(w/v)吐温20溶液(90g)中,7000rpm条件下剪切20min后即得(D[4,3]=5.207μm)。
[0108]
样品制备:向析出溶剂中加入晶种混悬液10g,将剪切头置入析出溶剂中,转速调至7000rpm。将黄体酮溶液以219mL/min的速度泵入析出溶剂中(泵入时间:20s),将得到的混悬液进行抽滤,滤饼用3000mL纯水洗涤。
[0109]
将固体沉淀物转移至甘露醇溶液中(含甘露醇6g,水160mL),500rpm条件下搅拌30min后将得到的混悬液进行冻干得到冻干样品,冻干条件如实施例1中所示。
[0110]
XRD检测:用粉末衍射仪(X'Pert 3 Powder,Malvern Panalytical)对样品进行XRD测试(Cu,40mA,3.5°~40°),如图7所示,在2θ=12.7214°处出现明显衍射峰,为α晶型。
[0111]
分散剂配制:同实施例2。
[0112]
混悬液制备:称量2.94g冻干样品(含黄体酮2.5g)置于150mL烧杯中,加入分散剂47.06g后于4000rpm条件下剪切5min。
[0113]
粒径测试:用马尔文MasterSizer 3000测量粒径(水为测定载体),平均粒径D[4,3]=10.509μm。
[0114]
DSC检测:用梅特勒DSC(DSC 500,METTLER TOLEDO)对所得 样品进行测试(35℃至160℃,10K/min)。如图8所示,样品在131.17℃(α晶型)出现吸热峰,表明所得晶型为α晶型。
[0115]
实施例5.黄体酮样品的制备
[0116]
黄体酮溶液配制:称取5g吐温20和90g黄体酮,加入200mL无水乙醇,于60℃下搅拌溶解。
[0117]
析出溶剂配制:量取130mL纯水于带夹套钢杯中,室温自然水冷却循环。
[0118]
晶种混悬液配制:称量另一批β晶型黄体酮10g于0.2%(w/v)吐温20溶液(90g)中,7000rpm条件下剪切20min后即得(D[4,3]=5.682μm)。
[0119]
样品制备:向析出溶剂中加入晶种混悬液10g,将剪切头置入析出溶剂中,转速调至7000rpm。将黄体酮溶液以114mL/min的速度泵入析出溶剂中(泵入时间:38s),将得到的混悬液进行抽滤,滤饼用3000mL纯水洗涤。
[0120]
将固体沉淀物转移至甘露醇溶液中(含甘露醇6g,水160mL),500rpm条件下搅拌30min后将得到的混悬液进行冻干得到冻干样品,冻干条件如实施例1中所示。
[0121]
粒径测试:用马尔文MasterSizer 3000测量粒径(水为测定载体),平均粒径D[4,3]=11.792μm。
[0122]
XRD检测:用粉末衍射仪(X'Pert 3 Powder,Malvern Panalytical)对样品进行XRD测试(Cu,40mA,3.5°~40°),如图9所示,在2θ=13.6175°处出现明显衍射峰,为β晶型。
[0123]
实施例6.黄体酮样品的制备
[0124]
黄体酮溶液配制:称取5g吐温20和90g黄体酮,加入200mL无水乙醇,于60℃下搅拌溶解。
[0125]
析出溶剂配制:量取130mL纯水于带夹套钢杯中,室温自来水冷却循环。
[0126]
晶种混悬液配制:同实施例4。
[0127]
样品制备:向析出溶剂中加入晶种混悬液10g,将剪切头置入析出溶剂中,转速调至7000rpm。将黄体酮溶液以219mL/min的速度泵入析出溶剂中(泵入时间:20s),将得到的混悬液进行抽滤,滤饼用3000mL纯水洗涤。
[0128]
将固体沉淀物转移至甘露醇溶液中(含甘露醇6g,水160mL),500rpm条件下搅拌30min后将得到的混悬液进行冻干,冻干条件如实施例1中所示。
[0129]
粒径测试:用马尔文MasterSizer 3000测量粒径(水为测定载体),平均粒径D[4,3]=12.632μm。
[0130]
XRD检测:用粉末衍射仪(X'Pert 3 Powder,Malvern Panalytical)对样品进行XRD测试(Cu,40mA,3.5°~40°),如图10所示,在2θ=12.7181°出现衍射峰,为α晶型。
[0131]
DSC检测:用梅特勒DSC(DSC 500,METTLER TOLEDO)对所得样品进行测试(35℃至160℃,10K/min)。如图11所示,样品在130.75℃出现吸热峰,表明所得晶型为α晶型。
[0132]
实施例7.黄体酮混悬液的制备
[0133]
黄体酮溶液配制:称取5g吐温20和90g黄体酮,加入200mL甲醇,于60℃下搅拌溶解。
[0134]
析出溶剂配制:量取130mL纯水于带夹套钢杯中,室温自然水冷却循环。
[0135]
样品制备:将剪切头置入析出溶剂中,转速调至7000rpm,将黄体酮溶液以114mL/min的速度泵入析出溶剂中(泵入时间:38s),将得到的混悬液进行抽滤,滤饼用3000mL纯水洗涤。
[0136]
将固体沉淀物转移至甘露醇溶液中(含甘露醇6g,水160mL),500rpm条件下搅拌30min后将得到的混悬液进行冻干,冻干条件如实施例1中所 示。
[0137]
XRD检测:用粉末衍射仪(X'Pert 3 Powder,Malvern Panalytical)对样品进行XRD测试(Cu,40mA,3.5°~40°),如图12所示,在2θ=13.6175°处出现明显衍射峰,为β晶型。
[0138]
分散剂配制:同实施例2。
[0139]
混悬液制备:称量2.96g冻干样品(含黄体酮2.5g)置于150mL烧杯中,加入分散剂47.04g后于4000rpm条件下剪切5min。
[0140]
粒径测试:用马尔文MasterSizer 3000测量所得混悬液粒径(水为测定载体),平均粒径D[4,3]=12.989μm。
[0141]
实施例8.黄体酮晶体转化
[0142]
黄体酮溶液配制:称取90g黄体酮,加入200mL无水乙醇,于60℃下搅拌溶解。
[0143]
析出溶剂配制:称取15g吐温20,用3000mL水多次冲洗至带夹套钢杯中,用冷却循环装置冷却至9℃。
[0144]
样品制备:将剪切头置入析出溶剂中,转速调至7000rpm。将黄体酮溶液以37mL/min的速度泵入析出溶剂中(泵入时间:117s)。将得到的混悬液进行抽滤,滤饼用3000mL纯水洗涤。将固体沉淀物转移至甘露醇溶液中(含甘露醇6g,水160mL),500rpm条件下搅拌30min后将得到的混悬液进行冻干,冻干条件同实施例1。
[0145]
分散剂配制:同实施例2。
[0146]
混悬液制备:称量2.96g冻干样品(含黄体酮2.5g)置于150mL烧杯中,加入分散剂47.04g后于4000rpm条件下剪切5min。
[0147]
粒径测试:用马尔文MasterSizer 3000测量所得混悬液粒径(水为测定载体),平均粒径D[4,3]=16.553μm。
[0148]
样品处理:将制备的混悬液分装于10mL西林瓶中并轧铝盖,置于40℃ 条件下放置2天、5天后取出进行粒径测试及DSC检测,检测结果如表2所示。
[0149]
从检测结果来看,在混悬液状态下,β晶型黄体酮会向α晶型转变,同时伴随粒径增长。
[0150]
表2.粒径检测及DSC检测结果
[0151]
[0152]
实施例9.制备黄体酮粉体
[0153]
黄体酮溶液配制:称取20g黄体酮,加入600mL 95%乙醇,搅拌使之溶解;
[0154]
析出溶剂配制:称取15g吐温20,用3000mL水多次冲洗至带夹套钢杯中,用冷却循环装置冷却至9℃;
[0155]
样品制备:将剪切头置入析出溶剂中,转速调至6000rpm。调节出液口直径为0.51mm,使黄体酮溶液以100mL/min的速度泵入析出溶剂中。当黄体酮溶液全部加入后,抽滤,将得到的滤饼用3000mL的纯水洗涤,将固体沉淀物转移至甘露醇溶液中(含甘露醇3g,水100mL),500rpm条件下搅拌30min后将得到的混悬液进行冻干(冻干条件同实施例1)。
[0156]
粒径测试结果:用马尔文MasterSizer 3000测量粒径(水为测定载体),平均粒径D[4,3]=8.450μm。
[0157]
实施例10.制备黄体酮粉体
[0158]
黄体酮溶液配制:称取20g黄体酮,加入600mL 95%乙醇,搅拌使之溶解;
[0159]
析出溶剂配制:称取15g吐温20,用3000mL水多次冲洗至带夹套钢 杯中,用冷却循环装置冷却至9℃;
[0160]
样品制备:将剪切头置入析出溶剂中,转速调至8000rpm,调节出液口直径为0.51mm,使黄体酮溶液以50mL/min的速度泵入析出溶剂中。当黄体酮溶液全部加入后,抽滤,将得到的滤饼用3000mL的纯水洗涤,将固体沉淀物转移至甘露醇溶液中(含甘露醇4g,水130mL),500rpm条件下搅拌30min后将得到的混悬液进行冻干(冻干条件同实施例1)。
[0161]
粒径测试结果:用马尔文MasterSizer 3000测量粒径(水为测定载体),平均粒径D[4,3]=6.653μm。
[0162]
实施例11.制备黄体酮粉体
[0163]
黄体酮溶液配制:称取20g黄体酮,加入600mL 95%乙醇,搅拌使之溶解;
[0164]
析出溶剂配制:称取15g吐温20,用3000mL水多次冲洗至带夹套钢杯中,用冷却循环装置冷却至9℃;
[0165]
样品制备:将剪切头置入析出溶剂中,转速调至8000rpm,调节出液口直径为0.51mm,使黄体酮溶液以20mL/min的速度泵入析出溶剂中。当黄体酮溶液全部加入后,抽滤,将得到的滤饼用3000mL的纯水洗涤,将固体沉淀物转移至甘露醇溶液中(含甘露醇4g,水130mL),500rpm条件下搅拌30min后将得到的混悬液进行冻干(冻干条件同实施例1)。
[0166]
粒径测试结果:用马尔文MasterSizer 3000测量粒径(水为测定载体),平均粒径D[4,3]=3.386μm。
[0167]
实施例12.制备黄体酮粉体
[0168]
黄体酮溶液配制:称取20g黄体酮,加入600mL 95%乙醇,搅拌使之溶解;
[0169]
析出溶剂配制:称取15g吐温20,用3000mL水多次冲洗至带夹套钢杯中,用冷却循环装置冷却至9℃;
[0170]
样品制备:将剪切头置入析出溶剂中,转速调至15000rpm,调节出液口直径为0.16mm,使黄体酮溶液以20mL/min的速度泵入析出溶剂中。当黄体酮溶液全部加入后,抽滤,将得到的滤饼用3000mL的纯水洗涤,将固体沉淀物转移至甘露醇溶液中(含甘露醇4g,水130mL),500rpm条件下搅拌30min后将得到的混悬液进行冻干(冻干条件同实施例1)。
[0171]
粒径测试结果:用马尔文MasterSizer 3000测量粒径(水为测定载体),平均粒径D[4,3]=0.538μm。
[0172]
实施例13.制备黄体酮粉体
[0173]
黄体酮溶液配制:称取20g黄体酮,加入600mL 95%乙醇,搅拌使之溶解;
[0174]
析出溶剂配制:称取15g吐温20,用3000mL水多次冲洗至带夹套钢杯中,用冷却循环装置冷却至9℃;
[0175]
样品制备:将剪切头置入析出溶剂中,转速调至15000rpm,调节出液口直径为0.16mm,使黄体酮溶液以6mL/min的速度泵入析出溶剂中。当黄体酮溶液全部加入后,抽滤,将得到的滤饼用3000mL的纯水洗涤,将固体沉淀物转移至甘露醇溶液中(含甘露醇4g,水130mL),500rpm条件下搅拌30min后将得到的混悬液进行冻干(冻干条件同实施例1)。
[0176]
粒径测试结果:用马尔文MasterSizer 3000测量粒径(水为测定载体),平均粒径D[4,3]=0.356μm。
[0177]
实施例14.制备黄体酮粉体
[0178]
黄体酮溶液配制:称取20g黄体酮,加入600mL 95%乙醇,搅拌使之溶解;
[0179]
析出溶剂配制:称取15g吐温20,用3000mL水多次冲洗至带夹套钢杯中,用冷却循环装置冷却至9℃;
[0180]
样品制备:将析出溶剂置于磁力搅拌器上,转速调至2000rpm,调节 出液口直径为0.16mm,使黄体酮溶液以6mL/min的速度泵入析出溶剂中。当黄体酮溶液全部加入后,抽滤,将得到的滤饼用3000mL的纯水洗涤,将固体沉淀物转移至甘露醇溶液中(含甘露醇4g,水130mL),500rpm条件下搅拌30min后将得到的混悬液进行冻干(冻干条件同实施例1)。
[0181]
粒径测试结果:用马尔文MasterSizer 3000测量粒径(水为测定载体),平均粒径D[4,3]=15.425μm。
[0182]
实施例15.制备黄体酮粉体
[0183]
黄体酮溶液配制:称取20g黄体酮,加入100mL无水乙醇,搅拌使之溶解;
[0184]
析出溶剂配制:称取15g吐温20,用3000mL水多次冲洗至带夹套钢杯中,用冷却循环装置冷却至9℃;
[0185]
样品制备:将剪切头置入析出溶剂中,转速调至15000rpm,调节出液口直径为0.16mm,使黄体酮溶液以20mL/min的速度泵入析出溶剂中。当黄体酮溶液全部加入后,抽滤,将得到的滤饼用3000mL纯水洗涤,将固体沉淀物转移至甘露醇溶液中(含甘露醇4g,水130mL),500rpm条件下搅拌30min后将得到的混悬液进行冻干(冻干条件同实施例1)。
[0186]
粒径测试结果:用马尔文MasterSizer 3000测量粒径(水为测定载体),平均粒径D[4,3]=1.447μm。
[0187]
实施例16.制备黄体酮粉体
[0188]
黄体酮溶液配制:称取20g黄体酮,加入65mL无水乙醇,于60℃下搅拌使之溶解;
[0189]
析出溶剂配制:称取2.5g吐温20,用1500mL水多次冲洗至带夹套钢杯中,用冷却循环装置冷却至9℃;
[0190]
样品制备:将析出溶剂置于磁力搅拌器上,转速调至2000rpm析出溶剂,调节出液口直径为0.90mm,使黄体酮溶液以100mL/min的速度泵入 析出溶剂中。当黄体酮溶液全部加入后,抽滤,将得到的滤饼用3000mL的纯水洗涤,将固体沉淀物转移至甘露醇溶液中(含甘露醇4g,水130mL),500rpm条件下搅拌30min后将得到的混悬液进行冻干(冻干条件同实施例1)。
[0191]
粒径测试结果:用马尔文MasterSizer 3000测量粒径(水为测定载体),平均粒径D[4,3]=58.162μm。
[0192]
实施例17.黄体酮混悬液的体内代谢
[0193]
实验动物:SD雌性大鼠(切除卵巢)16只(220g~300g),随机分为4组(依次为A、B、C、D组),每组4只。
[0194]
参比制剂为市售黄体酮油性注射液(50mg/mL)。
[0195]
给药方式及剂量:大腿外侧肌肉注射给药;A组:市售黄体酮油性注射液,给药6mg/Kg,连续5天;B组:实施例4的黄体酮混悬液,给药30mg/Kg;C组:实施例2的黄体酮混悬液,给药30mg/Kg;D组:实施例7的黄体酮混悬液,给药30mg/Kg。
[0196]
采样及检测:给药后,B、C、D组分别于给药前(0h)、给药后0.5h、1h、2h、3h、4h、6h、8h和1d(24h)、2d(48h)、3d(72h)、4d(96h)、5d(120h)6天(144h)静脉取血0.3ml于肝素化EP管中;A组于第1天给药前(0h)、给药后(0d)0.5h、1h、2h、3h、4h、6h、8h,第2、3、4天给药前(当天的0h)和给药后3h,第5天给药前(当天0h)和给药当天的0.5h、1h、2h、3h、4h、6h、8h、24h和48h,静脉取血0.3ml于肝素化EP管中。采集的全血4000rpm离心10min以分离血浆,所收集的血浆在冰箱中于-80℃保存待测。
[0197]
检测方法:HPLC-MS/MS法检测大鼠血浆中黄体酮含量以表明SD大鼠肌肉注射黄体酮混悬液后黄体酮血浆浓度变化。
[0198]
图13示出了大鼠血浆中黄体酮浓度随时间的变化曲线,从图中可以看 出实施例2(混合晶型)、实施例4(α晶型)、实施例7(β晶型)制备的样品均可以达到5天缓释效果。

权利要求书

[权利要求 1]
一种制备黄体酮颗粒物的方法,所述方法包括: 步骤1,使黄体酮溶于溶剂中以提供黄体酮溶液; 步骤2,将所述黄体酮溶液以预定速度泵入到高速剪切或剧烈搅拌的黄体酮的析出溶剂中以使黄体酮析出;和 步骤3,分离析出物并进行干燥以获得所述黄体酮颗粒物; 其中,所述黄体酮颗粒物为黄体酮晶体或黄体酮粉体。
[权利要求 2]
根据权利要求1所述的方法,其中,步骤2进一步为:将所述黄体酮溶液以预定速度泵入至冷却的高速剪切或剧烈搅拌的析出溶剂中以使黄体酮析出;所述析出溶剂为水、有机溶剂或水与有机溶剂的混合物; 所述步骤3中的干燥优选为冷冻干燥。
[权利要求 3]
根据权利要求2所述的方法,其中所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇和丙酮中的一种或多种;优选地,所述析出溶剂为水、乙醇或水与乙醇的混合物。
[权利要求 4]
根据权利要求1至3中任一项所述的方法,其中所述析出溶剂的温度为-20℃至25℃;优选地,当以水作为析出溶剂时,温度为1℃至25℃;当以有机溶剂作为析出溶剂时,析出溶剂的温度为-20℃至0℃;当以水与有机溶剂的混合物作为析出溶剂时,析出溶剂的温度为-10℃至25℃。
[权利要求 5]
根据权利要求1至4中任一项所述的方法,其中所述剧烈搅拌的转速为500rpm至2000rpm,优选700rpm至2000rpm,或者优选700rpm至1000rpm;所述高速剪切通过转速为3000rpm至20000rpm,优选5000rpm至20000rmp或者优选7000rpm至20000rpm的剪切仪来实现。
[权利要求 6]
根据权利要求1至5中任一项所述的方法,其中溶解黄体酮所用的溶剂为与水互溶的有机溶剂;优选地,所述步骤1中溶解黄体酮所用的溶 剂为选自甲醇、无水乙醇、乙二醇、异丙醇和丙酮中的一种或它们的混合物,或者上述醇类的水溶液;进一步优选地,所述步骤1中溶解黄体酮所用的溶剂为选自甲醇、无水乙醇、异丙醇和丙酮中的一种或它们的混合物,或者上述醇类的水溶液。
[权利要求 7]
根据权利要求1至6中任一项所述的方法,所述黄体酮溶液的泵入速度为6mL/min至500mL/min。
[权利要求 8]
根据权利要求1至7中任一项所述的方法,其中,所述黄体酮溶液的浓度为10mg/mL至500mg/mL。
[权利要求 9]
根据权利要求2至8中任一项所述的方法,其中所述冷冻干燥包括:将分离析出的黄体酮重新分散于2wt%至4wt%甘露醇水溶液中;然后进行冻干。
[权利要求 10]
根据权利要求1至9中任一项所述的方法,其中向所述黄体酮溶液中加入表面活性剂以使所述黄体酮溶液进一步包含,基于所述黄体酮溶液的质量,0.5wt%至3wt%,优选1wt%至2wt%的表面活性剂;或者向所述黄体酮的析出溶剂中加入表面活性剂使析出溶剂中进一步包含,基于析出溶剂的质量,0.1~2wt%,优选0.3~0.8wt%的表面活性剂。
[权利要求 11]
根据权利要求1至10中任一项所述的方法,优选乙醇作为析出溶剂,得到α晶型的黄体酮; 或者,优选水作为析出溶剂,甲醇作为溶解黄体酮的有机溶剂,得到β晶型的黄体酮。
[权利要求 12]
根据权利要求1至11中任一项所述的方法,其中所述方法进一步包括:在将所述黄体酮溶液加入至所述析出溶剂之前,将预定晶型的晶种加入至析出溶剂中以更稳定地得到对应晶型的黄体酮。
[权利要求 13]
根据权利要求1至12中任一项所述的方法,其中,泵入的黄体酮溶液与析出溶剂的体积比为1.5:1~1:30。
[权利要求 14]
一种黄体酮晶体或粉体,所述黄体酮晶体根据权利要求1至13中任一项所述的方法制备得到,所述黄体酮晶体或粉体具有D[4,3]为0.3μm至60μm的粒径。
[权利要求 15]
一种黄体酮注射剂,其中所述注射剂包括有效量的权利要求14所述的黄体酮晶体或粉体。

附图

[ 图 1]  
[ 图 2]  
[ 图 3]  
[ 图 4]  
[ 图 5]  
[ 图 6]  
[ 图 7]  
[ 图 8]  
[ 图 9]  
[ 图 10]  
[ 图 11]  
[ 图 12]  
[ 图 13]