(DE) Die Erfindung bezieht sich auf die MINFLUX-Nanoskopie. Die Erfindung verbessert die dreidimensionale Lokalisation vereinzelter Fluorophore. Die Ausnutzung der Fluoreszenz-photonen vereinzelter anregbarer Fluorophore (4) für eine dreidimensionale Lokalisation wird dadurch verbessert, dass das Lokalisieren nach dem MINFLUX-Prinzip unter Anwendung eines 3D-Anregungsdonuts (8) aufgeteilt wird in eine Abfolge separater Schritte, wobei in einem Schrittentweder eine axiale Lage oder eine laterale Lage des Fluorophors bestimmt wird. Dabei erhöht die genauere Kenntnis der axialen Lage die Güte einer folgenden lateralen Lokalisation und umgekehrt. Die dreidimensionale Lokalisation wird weiter verbessert durch ein Verfahren zur axialen Lokalisation durch Abtastung eines axialen Abtastbereichs mit einem 3D-Anregungsdonut (8) und einer bevorzugt folgenden Auswertung der gemessenen Intensitäten oder Photonenzahlen durch Bilden einer Vektorsumme.
(EN) The invention relates to MINIFLUX nanoscopy. The invention improves the three-dimensional localisation of isolated fluorophores. The utilisation of the fluorescence photons of isolated excitable fluorophores (4) for three-dimensional localisation is improved in that, in accordance with the MINIFLUX principle, using a 3D excitation doughnut (8) the localisation is divided into a sequence of separate steps, wherein in one step either an axial position or a lateral position of the fluorophore is determined. The precise knowledge regarding axial position increases the quality of a subsequent lateral localisation, and vice versa. The three-dimensional localisation is further improved by a method for axial localisation by scanning an axial scanning region using a 3D excitation doughnut (8) and a preferably subsequent evaluation of the measured intensities or photon numbers by forming a vector sum.
(FR) L'invention concerne la nanoscopie MINIFLUX. L'invention améliore la localisation tridimensionnelle de fluorophores isolés. L'utilisation des photons de fluorescence de fluorophores excitables isolés (4) pour une localisation tridimensionnelle est améliorée en ce que, conformément au principe MINIFLUX, à l'aide d'un anneau d'excitation 3D (8), la localisation est divisée en une séquence d'étapes distinctes, dans une étape, soit une position axiale soit une position latérale du fluorophore est déterminée. La connaissance précise concernant la position axiale augmente la qualité d'une localisation latérale ultérieure, et vice versa. La localisation tridimensionnelle est en outre améliorée par un procédé de localisation axiale par balayage d'une région de balayage axial à l'aide d'un anneau d'excitation 3D (8) et une évaluation de préférence ultérieure des intensités mesurées ou des nombres de photons par formation d'une somme vectorielle.
