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1. (WO2009146892) VERFAHREN ZUR ERZEUGUNG EINER VARIANTEN-BIBLIOTHEK VON DNA-SEQUENZEN
Aktuellste beim Internationalen Büro vorliegende bibliographische Daten   

TranslationÜbersetzung: Original-->Deutsch
Veröff.-Nr.:    WO/2009/146892    Internationale Anmeldenummer    PCT/EP2009/003945
Veröffentlichungsdatum: 10.12.2009 Internationales Anmeldedatum: 03.06.2009
IPC:
C12N 15/10 (2006.01), C12Q 1/68 (2006.01)
Anmelder: C-LECTA GMBH [DE/DE]; Deutscher Platz 5 04103 Leipzig (DE) (For All Designated States Except US).
GREINER-STÖFFELE, Thomas [DE/DE]; (DE) (For US Only).
FELLER, Claudia [DE/DE]; (DE) (For US Only).
STRUHALLA, Marc [DE/DE]; (DE) (For US Only)
Erfinder: GREINER-STÖFFELE, Thomas; (DE).
FELLER, Claudia; (DE).
STRUHALLA, Marc; (DE)
Vertreter: BÜLLE, Jan; Kutzenberger & Wolff Theodor-Heuss-Ring 23 50668 Köln (DE)
Prioritätsdaten:
08010256.9 05.06.2008 EP
Titel (DE) VERFAHREN ZUR ERZEUGUNG EINER VARIANTEN-BIBLIOTHEK VON DNA-SEQUENZEN
(EN) PROCESS FOR GENERATING A VARIANT LIBRARY OF DNA SEQUENCES
(FR) PROCÉDÉ DE PRODUCTION D'UNE BIBLIOTHÈQUE DE VARIANTS DE SÉQUENCES D'ADN
Zusammenfassung: front page image
(DE)Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Erzeugung einer Varianten-Bibliothek von DNA- Sequenzen ausgehend von mindestens einer DNA-Ausgangssequenz umfassend die folgenden Schritte: a) Auswählen von mindestens zwei Mutationsstellen in der DNA-Ausgangssequenz; b) Unterteilen der DNA-Ausgangssequenz in mindestens zwei Sequenzabschnitte in einer Weise, so dass mindestens zwei dieser Sequenzabschnitte jeweils mindestens eine der Mutationsstellen umfassen; c) Amplifizieren der Sequenzabschnitte durch PCR mit Hilfe von insgesamt wenigstens fünf verschiedenen Oligonukleotiden, wobei (i) sich an jede der Mutationsstellen mindestens eines der Oligonukleotide anlagern kann; (ii) sich an mindestens eine Mutationsstelle wenigstens zwei der Oligonukleotide anlagern können; und (iii) in den durch PCR erhaltenen Amplifikations-Produkten durch die Oligonukleotide an den Mutationsstellen über Mismatch-Positionen Mutationen eingeführt werden, wobei an mindestens einer der Mutationsstellen mindestens zwei Mutationen eingeführt werden; und d) Verknüpfen der Amplifikations-Produkte zu DNA-Sequenzen.
(EN)The invention relates to a process for generating a variant library of DNA sequences starting from at least one DNA starting sequence and comprising the following steps: a) selecting at least two mutation sites in the DNA starting sequence; b) dividing the DNA starting sequence into at least two sequence segments in such a way that at least two of these sequence segments comprise in each case at least one of the mutation sites; c) amplifying the sequence segments by means of PCR with the aid of a total of at least five different oligonucleotides, where (i) at least one of the oligonucleotides can attach to each of the mutation sites; (ii) at least two of the oligonucleotides can attach to at least one mutation site; and (iii) mutations are introduced, via mismatch positions, into the PCR amplificates by the oligonucleotides at the mutation sites where at least two mutations are introduced at at least one of the mutation sites; and d) linking the amplificates to give DNA sequences.
(FR)L'invention porte sur un procédé de production d'une bibliothèque de variants de séquences d'ADN, à partir d'au moins une séquence d'ADN de départ, comprenant les étapes suivantes : a) sélection d'au moins deux sites de mutation de la séquence d'ADN de départ; b) subdivision de la séquence d'ADN de départ en au moins deux segments de séquence, de telle sorte qu'au moins deux de ces segments de séquence comprennent chacun au moins l'un des sites de mutation; c) amplification des segments de séquence par PCR, à l'aide d'un nombre total d'au moins cinq oligonucléotides différents, (i) au moins l'un des oligonucléotides pouvant se fixer sur chacun des sites de mutation; (ii) au moins deux des oligonucléotides pouvant se fixer à au moins un cycle de mutation; et (iii) des mutations étant introduites dans les produits d'amplification obtenus par PCR, par les oligonucléotides sur les sites de mutation sur des positions de mésappariement, au moins deux mutations étant introduites sur au moins l'un des sites de mutation; et d) liaison des produits de l'amplification à des séquences d'ADN.
Designierte Staaten: AE, AG, AL, AM, AO, AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BH, BR, BW, BY, BZ, CA, CH, CL, CN, CO, CR, CU, CZ, DE, DK, DM, DO, DZ, EC, EE, EG, ES, FI, GB, GD, GE, GH, GM, GT, HN, HR, HU, ID, IL, IN, IS, JP, KE, KG, KM, KN, KP, KR, KZ, LA, LC, LK, LR, LS, LT, LU, LY, MA, MD, ME, MG, MK, MN, MW, MX, MY, MZ, NA, NG, NI, NO, NZ, OM, PG, PH, PL, PT, RO, RS, RU, SC, SD, SE, SG, SK, SL, SM, ST, SV, SY, TJ, TM, TN, TR, TT, TZ, UA, UG, US, UZ, VC, VN, ZA, ZM, ZW.
African Regional Intellectual Property Organization (BW, GH, GM, KE, LS, MW, MZ, NA, SD, SL, SZ, TZ, UG, ZM, ZW)
Eurasian Patent Organization (AM, AZ, BY, KG, KZ, MD, RU, TJ, TM)
European Patent Office (AT, BE, BG, CH, CY, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, FR, GB, GR, HR, HU, IE, IS, IT, LT, LU, LV, MC, MK, MT, NL, NO, PL, PT, RO, SE, SI, SK, TR)
African Intellectual Property Organization (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, GQ, GW, ML, MR, NE, SN, TD, TG).
Veröffentlichungssprache: German (DE)
Anmeldesprache: German (DE)