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1. WO1994010297 - VERFAHREN ZUR HERSTELLUNG HOCHREINER HUMANER GAD-1- UND GAD-2-PROTEINE

Veröffentlichungsnummer WO/1994/010297
Veröffentlichungsdatum 11.05.1994
Internationales Aktenzeichen PCT/EP1993/003080
Internationales Anmeldedatum 03.11.1993
Antrag nach Kapitel 2 eingegangen 05.05.1994
IPC
A61K 38/00 2006.01
ATäglicher Lebensbedarf
61Medizin oder Tiermedizin; Hygiene
KZubereitungen für medizinische, zahnärztliche oder kosmetische Zwecke
38Medizinische Zubereitungen, die Peptide enthalten
C12N 9/88 2006.01
CChemie; Hüttenwesen
12Biochemie; Bier; Spirituosen; Wein; Essig; Mikrobiologie; Enzymologie; Mutation oder genetische Techniken
NMikroorganismen oder Enzyme; Zusammensetzungen aus Mikroorganismen oder Enzymen; Züchten, Konservieren oder Lebensfähigerhalten von Mikroorganismen; Mutation oder genetische Verfahrenstechnik; Kulturmedien
9Enzyme, z.B. Ligasen (6.); Proenzyme; Zusammensetzungen hieraus; Verfahren zur Herstellung, Aktivierung, Inhibierung, Trennung oder Reinigung von Enzymen
88Lyasen (4.)
C12N 15/866 2006.01
CChemie; Hüttenwesen
12Biochemie; Bier; Spirituosen; Wein; Essig; Mikrobiologie; Enzymologie; Mutation oder genetische Techniken
NMikroorganismen oder Enzyme; Zusammensetzungen aus Mikroorganismen oder Enzymen; Züchten, Konservieren oder Lebensfähigerhalten von Mikroorganismen; Mutation oder genetische Verfahrenstechnik; Kulturmedien
15Mutation oder genetische Verfahrenstechnik; DNA oder RNA, die genetische Verfahrenstechnik betreffend, Vektoren, z.B. Plasmide, oder ihre Isolierung, Herstellung oder Reinigung; Gebrauch von Wirten hierfür
09Rekombinante DNA-Technologie
63Einschleusen von fremdem genetischem Material unter Verwendung von Vektoren; Vektoren; Verwendung von Wirten dafür; Regulation der Expression
79Vektoren oder Expressionssysteme, die besonders für eukaryontische Wirte ausgebildet sind
85für Tierzellen
86Virale Vektoren
866Baculovirale Vektoren
G01N 33/573 2006.01
GPhysik
01Messen; Prüfen
NUntersuchen oder Analysieren von Stoffen durch Bestimmen ihrer chemischen oder physikalischen Eigenschaften
33Untersuchen oder Analysieren von Stoffen durch spezifische Methoden, soweit sie nicht von den Gruppen G01N1/-G01N31/153
48Biologische Stoffe, z.B. Blut, Urin; Hämocytometer
50Chemische Analyse von biologischen Stoffen, z.B. Blut, Urin; Untersuchung unter Anwendung biospezifischer Ligandenbindungsverfahren; Immunologische Untersuchungsverfahren
53Immunoassay; biospezifische Bindungsverfahren; Stoffe hierfür
573zum Nachweis von Enzymen und Isoenzymen
CPC
A61K 38/00
AHUMAN NECESSITIES
61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL, OR TOILET PURPOSES
38Medicinal preparations containing peptides
C07K 2319/00
CCHEMISTRY; METALLURGY
07ORGANIC CHEMISTRY
KPEPTIDES
2319Fusion polypeptide
C12N 15/86
CCHEMISTRY; METALLURGY
12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
15Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
09Recombinant DNA-technology
63Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
79Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
85for animal cells
86Viral vectors
C12N 2710/14143
CCHEMISTRY; METALLURGY
12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
2710dsDNA Viruses
00011dsDNA Viruses
14011Baculoviridae
14111Nucleopolyhedrovirus, e.g. autographa californica nucleopolyhedrovirus
14141Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
14143viral genome or elements thereof as genetic vector
C12N 9/88
CCHEMISTRY; METALLURGY
12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
9Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof
88Lyases (4.)
G01N 2333/988
GPHYSICS
01MEASURING; TESTING
NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
2333Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
90Enzymes; Proenzymes
988Lyases (4.), e.g. aldolases, heparinase, enolases, fumarase
Anmelder
  • ELIAS ENTWICKLUNGSLABOR FÜR IMMUNOASSAYS GMBH & CO. KG [DE/DE]; Obere Hardtstraße 18 D-79114 Freiburg, DE (AllExceptUS)
  • NORTHEMANN, Wolfgang [DE/DE]; DE (UsOnly)
  • MAUCH, Ludwig [DE/DE]; DE (UsOnly)
  • HAUBRUCK, Heinz [DE/DE]; DE (UsOnly)
  • COOK, Neil, J. [DE/DE]; DE (UsOnly)
Erfinder
  • NORTHEMANN, Wolfgang; DE
  • MAUCH, Ludwig; DE
  • HAUBRUCK, Heinz; DE
  • COOK, Neil, J.; DE
Vertreter
  • ZANKER, Hans; c/o elias Entwicklungslabor für Immunoassays GmbH & Co. KG Obere Hardtstrasse 18 79114 Freiburg, DE
Prioritätsdaten
P 42 37 244.504.11.1992DE
Veröffentlichungssprache Deutsch (DE)
Anmeldesprache Deutsch (DE)
Designierte Staaten
Titel
(DE) VERFAHREN ZUR HERSTELLUNG HOCHREINER HUMANER GAD-1- UND GAD-2-PROTEINE
(EN) PROCESS FOR PRODUCING HIGH-PURITY HUMAN GAD-1 AND GAD-2 PROTEINS
(FR) PROCEDE DE PREPARATION DE PROTEINES GAD-1 ET GAD-2 HUMAINES DE GRANDE PURETE
Zusammenfassung
(DE)
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung hochreiner humaner GAD-1- und GAD-2-Proteine unter Verwendung des Baculovirus/Sf9-Expressionssystems, wobei das Verfahren die folgenden Schritte umfaßt: a) Herstellung von cDNA-Sequenzen aus humanen cDNA-Bibliotheken, die jeweils GAD-1- und GAD-2-Proteine in voller Länge bzw. Abwandlungen davon codieren; b) Insertion der GAD-1- oder GAD-2-cDNA-Sequenz in einen Baculovirus-Transfervektor; c) Co-Transfektion von Sf9-Zellen mit GAD-1- oder GAD-2- cDNA enthaltenden Baculovirus-Transfervektoren und Baculovirus-DNA zur Erzeugung rekombinanter Baculoviren; d) Identifizierung, Selektion und Anreicherung von rekombinanten Baculoviren; e) Gewinnung des GAD-1- oder GAD-2-Proteins nach Infektion von Sf9-Zellen mit rekombinanten Baculoviren; und f) Reinigung des rekombinanten GAD-1- oder GAD-2-Proteins. Das erfindungsgemäße Verfahren stellt hochreine, fast homogene GAD-1- bzw. GAD-2-Proteine mit einer hohen Expressionsrate und einem hohen Reinigungsgrad zur Verfügung. Die isolierten GAD-Proteine werden in Immunassays zur Früherkennung von Diabetes mellitus Typ I (IDDM) eingesetzt.
(EN)
The invention pertains to a process for producing high-purity human GAD-1 and GAD-2 proteins using the baculovirus/Sf9 expression system; the process comprises the following steps: a) preparation of cDNA sequences from human cDNA libraries which code GAD-1 and GAD-2 proteins at full length or in modifications thereof; b) insertion of the GAD-1 or GAD-2 cDNA sequence into a baculovirus transfer vector; c) co-transfection of Sf9 cells with baculovirus transfer vectors containing GAD-1 or GAD-2 cDNA and with baculovirus DNA to produce recombinant baculoviruses; d) identification, selection and enrichment of recombinant baculoviruses; e) extraction of GAD-1 or GAD-2 protein after infection of Sf9 cells with recombinant baculoviruses, and f) purification of the recombinant GAD-1 or GAD-2 protein. The process as per the invention provides high-purity, nearly homogeneous GAD-1 or GAD-2 proteins with a high rate of expression and a high degree of purity. The isolated GAD proteins are used in immunoassays for early detection of type I diabetes mellitus (IDDM).
(FR)
L'invention concerne un procédé de préparation de protéines GAD-1 et GAD-2 humaines de grande pureté, à l'aide du système d'expression du baculovirus/Sf9. Le procédé comprend les étapes suivantes: a) préparation de séquences d'ADNc à partir de banques d'ADNc humaine, qui codent chacune des protéines GAD-1 et GAD-2 sur toute la longueur ou dans leurs modifications; b) insertion de la séquence d'ADNcGAD-1 ou GAD-2 dans un vecteur de transfert à baculovirus; c) co-transfection de cellules SF9 avec des vecteurs de transfert à baculovirus contenant de l'ADNc GAD-1 ou GAD-2 et avec de l'ADN à baculovirus pour générer des baculovirus recombinés; d) identification, sélection et enrichissement de baculovirus recombinés; e) extraction de la protéine GAD-1 ou GAD-2 après infection de cellules Sf9 avec des baculovirus recombinés; et f) purification de la protéine GAD-1 ou GAD-2 recombinée. Le procédé mis au point selon l'invention permet d'obtenir des protéines GAD-1 ou GAD-2 pratiquement homogènes de haute pureté, ayant un taux d'expression élevé et un degré de purification élevé. Les protéines GAD isolées sont utilisées dans des immuno-essais pour le dépistage précoce du diabète sucré de type I (IDDM).
Aktuellste beim Internationalen Büro vorliegende bibliographische Daten