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1. MXMX/a/2008/009401 - METHOD FOR PRODUCING METHIONINE FROM HOMOSERINE

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[ ES ]

METODO PARA PRODUCIR METIONINA A PARTIR DE HOMOSERINA
DESCRIPCION DE LA INVENCION
La presente invención se refiere a la producción -de metionina mediante la combinación de etapas biotecnológicas y químicas .
La presente invención se refiere en particular a la producción por fermentación de L-homoserina y la subsiguiente transformación química a L-metionina en una o varias etapas.
El aminoácido metionina se produce actualmente a nivel mundial industrialmente en grandes cantidades, y es de considerable importancia comercial.
La metionina se usa en muchos campos como, por ejemplo, para productos farmacéuticos, de sanidad y de buena salud. Sin embargo, la metionina se usa en particular como aditivo de forrajes en muchos forrajes para diversos animales útiles, siendo que es posible usar tanto la forma racémica como también la enantiomérica pura de la metionina.
A nivel industrial la metionina se produce químicamente mediante la reacción Bucherer-Bergs , que constituye una variante de la síntesis de Strecker. Se hace reaccionar las sustancias iniciales metilmercaptopropionaldehido (producido a partir de acroleina y metilmerca tano) , ácido cianhídrico, amoniaco y dióxido de carbono para obtener 5- {2-metil-mercaptoetil) -hidantoina (metioninhidantoina) , esta a continuación se hidroliza
Ref.: 193845 alcalina para obtener metioninato de álcali y luego se libera la metionina mediante neutralización con ácido, por ejemplo, ácido sulfúrico o ácido carbónico. También es posible usar diversos otros métodos para la producción de metionina, como, por ejemplo, la reacción de amidocarbonilación, la hidrólisis de proteínas o la fermentación.
Desde que la metionina se produce industrialmente en gran cantidad es deseable disponer de un proceso económico pero también ecológico.
Tanto la síntesis de Strecker como también la reacción de Bucherer-Bergs adolecen de la desventaja de que se usan las etapas previas venenosas ácido cianhídrico y acroleína como componente Ci y C3. El ácido cianhídrico se produce a partir de metano y amoniaco a temperaturas elevadas . La acroleína se produce mediante la oxidación parcial de propeno, el cual a su vez se obtiene -del petróleo. El proceso de metionina se -describe con más detalle, por ejemplo, en el documento EP 1256571. El proceso para la producción de acroleína se describe con más detalle, por ejemplo, en el documento EP 417723. Ambos procesos suponen gran complejidad técnica y elevado gasto de energía.
Debido al gran aumento del precio del petróleo en los últimos años también la acroleína es cada vez más cara y con ello también se ha vuelto cada vez menos atractiva económicamente como componente . Además , en virtud de su toxicidad y sus propiedades físicas, en la manipulación de cantidades grandes tanto el ácido cianhídrico como también la acroleína provocan un gasto correspondiente con relación a la seguridad y la ecología.
La metionina se obtiene en la síntesis química como una mezcla racémica de enantiómeros D y L. Este racemato se puede usar directamente como aditivo de forraje, ya que en condiciones in vivo existe un mecanismo de transformación que transforma al enantiómero D antinatural en el enantiómero L natural. Sin embargo, esta transformación lleva aunada una périda de metionina, y por consiguiente también una pérdida de bioeficiencia en comparación con la misma cantidad de enantiómero L puro. O sea que para obtener el mismo efecto se requiere más metionina racémica D, L en comparación con metionina L.
Por lo tanto era deseable proporcionar un proceso económicamente más interesante y más ecológico y seguro para la producción de metionina. En particular era deseable proporcionar un proceso para la producción de metionina L enantioméricamente enriquecida, de manera particularmente preferida de metionina L lo más enantioméricamente pura posible que se deberá poder llevar a cabo a escala industrial .
Los procesos de hasta ahora que se fundan en la producción de L-metionina con el auxilio de microorganismos, como se describen, por ejemplo, en el documento WO04/024933 adolecen de la desventaja de que se obtienen rendimientos comparablemente pequeños. Esto se debe en particular a los problemas con la red regulatoria estrictamente organizada de la biosíntesis microbiana de L-metionina, con la segregación de metionina de la célula al caldo de fermentación así como también con la etapa de octavo de electrones intensivo en energía en la reducción de sulfato a sulfuro de hidrógeno. Por otra parte la limitada solubilidad de la metionina en agua o respectivamente en caldos de fermentación acuosos tiene por efecto que la metionina se precipita en la fermentación con elevado rendimiento de biosíntesis y, por consiguiente, se dificulta la purificación. La purificación costosa provoca en consecuencia la producción de considerables flujos de deshecho, cuya eliminación supone gastos elevados.
Es cierto que en el documento WO 05/059155 se describe un método para el aislamiento mejorado de L-metionina a partir de caldos de fermentación. Sin embargo la mejora se paga caro debido a una secuencia de pasos comparativamente complicada que comprende calentar y disolver la L-metionina en el caldo de fermentación, separar por filtración la biomasa a temperatura definida y el tratamiento posterior de la biomasa filtrada que contiene metionina, concentrar la lejía madre, enfriar, cristalizar, filtrar, lavar y secar la L-metionina de la lejía madre y retroalimentar las lejías madre, y por el hecho de que se obtienen dos flujos de producto diferentes, específicamente un producto de L-metionina de baja y uno de alta concentración. Sin embargo, la obtención inevitable de dos diferentes calidades de metionina significa nuevamente un mayor gasto y además es indeseable desde los puntos de vista de la mercadotecnia.
Los problemas mencionados conducen en última instancia a un menor rendimiento total de L-metionina en el caso de un proceso meramente fermentativo en comparación con los procesos de producción fermentativa de, por ejemplo, L-lisina, los cuales se usan en la técnica ya desde hace muchos años, y/o a un gasto correspondientemente mayor en la producción fermentativa de L-metionina.
Ante el trasfondo de las desventajas del estado de la técnica fue el objeto, en particular, proporcionar un proceso para metionina que supera las desventajas indicadas con mayor detalle en lo precedente de los métodos del estado de la técnica. Este método debería conducir a L-, D- ó respectivamente D, L-metionina, pero preferiblemente a L-metionina, de ser posible a partir de otra etapa previa disponible y capaz de ser producida por la vía fermentativa, de una manera lo más sencilla posible, y sin el uso de los productos químicos peligrosos precedentemente mencionados, y superar en particular las desventajas de los procesos químicos convencionales así como de los procesos de producción directos biotecnológicos para metionina.
Otro objeto era proporcionar un método de producción que se puede llevar a cabo partiendo al menos parcialmente de materias primas naturales o renovables.
Un tercer objeto fue proporcionar un método que se puede llevar a cabo técnicamente sin problema que permite acceder a L-metionina en cantidades y purezas adecuadas .
Estos problemas así como otros no mencionados explícitamente, los cuales sin embargo se desprenden o infieren sin mayor problema del contexto discutido en este documento, se resuelven por el hecho de que se parte de otro aminoácido disponible y que se puede producir mejor por la vía fermentativa, el cual luego se transforma mediante una reacción química adecuada a L-, D- o respectivamente D,L-metionina, pero en particular a L-metionina sin el uso de los productos químicos peligrosos precedentemente mencionados. Con ello se superan tanto las desventajas de los procesos de producción químicos para metionina convencionales como también los procesos -de producción fermentativos directos convencionales para L-metionina. Resultó ser adecuado de conformidad con la invención el aminoácido homoserina, que al contrario de la metionina es altamente soluble en agua y que también es accesible mediante métodos fermentativos.

La ruta descrita por Livak, Britton, VanderWeele y Murray ("síntesis of dl-methionine" , Journal of the American Chemical Society, (1945), 67, 2218-20), en la cual aparece D, L-homoserina como producto intermedio de la síntesis parte primero de D, L-2-amino-4-butirolactona, que, pasando por D,L-homoserina, N-carbamoilhomocerina, 4- (2-bromómetil) -hidantoina y 4- (2-metiltioetil) -hidantoina conduce por último a la D, L-metionina :


De acuerdo con Son y Woodard ( "Stereochmical mechanism of iodocetic acid mediated decomposition of L-methionine to L-homoserine lactone", Journal of the American Chemical Society (1989), 111(4) , 1363-7) los derivados de homoserina deuterizados HO-CHD-CH2-CH (HNCOOtBu) COOtBu y H3CC6H4 SO2O-CHD-CH2-CH (HNCOOtBu) COOtBu (tBu = ter-butilo) se usaron como etapas previas para la L-homoserina deute izada correspondientemente en la posición 4. Los compuestos no deuterizados correspondientes HO-CH2-CH2-CH (HNCOOtBu)COOtBu y H3CC6H4S020-CH2-CH2-CH'(HNCOOtBu)OOOtBu no se describieron en la ruta hacia la homoserina.
Los compuestos 3 , 6-di (2-hidroxietil ) -2 , 5-diceto- piperacina, 3 , 6-di (2-cloroetil) -2 , 5-dicetopiperacina y 3,6- di (2-metiltioetil) -2 , 5-dicetopiperacina descritos a continuación constituyen etapas intermedias químicas que de acuerdo al documento US2,397,628 se recorrieron en la ruta hacia la D, L-metionina, pero sin embargo no a partir de homoserina, sino que a partir de 2-acetil-4-butirolactona :



Adicionalmente existen otros procesos de producción para D, L-metionina, los cuales igualmente no parten de homoserina sino que parten, por ejemplo, de 2-acetil-4- butirolactona por la 2-amino-4-butirolactona y la 2-amino-4- butirolactona correspondientemente protegida, de acuerdo con Snyder, Andreen, John, Cannon y Peters ("Convenient synthesis of dl-methionine" , Journal of the American Chemical Society (1942) , 64, 2082-4) .
La síntesis de acuerdo con Plieninger parte de 2- amino-4-butirolactona ("Die Aufspaltung des γ-Butyrolactons und a-Amino-y-butyrolactons mit Natriummethylmercaptid bzw. - selenid. Eine Synthese des Methionins", Chemische Berichte (1950) , 83, 265-8) .
Los compuestos 3 , 6-di (2-vinil) -2 , 5-dicetopiperacina y 3 , 6-di (2-bromoetil) -2 , 5-dicetopiperacina descritos a continuación constituyen igualmente etapas previas químicas


que de acuerdo con Snyder y Chiddix ( "Non-Markovnikov addition in reactions of 3 , 6-divinyl-2 , 5-diketopiperazine" , Journal of the American Chemical Society (1944) , 66 1002-4) son recorridas en la ruta hacia la D, L-metionina . Pero tampoco aquí se usa homoserina.
En particular, los problemas precedentemente mencionados se solucionan mediante un método de conformidad con la reivindicación 1. Los perfeccionamientos y variaciones convenientes de método de conformidad con la invención se protegen en las reivindicaciones subordinadas referidas a la reivindicación 1.
Por el hecho de que para la producción de L-metionina, D-metionina o cualquier mezcla a discreción de L-y D-metionina se usa un método que parte de la homoserina, y en el cual la L-homoserina, la D-homoserina o las mezclas correspondientes de L- y D-homoserina de la siguiente fórmula


se transforman en metionina mediante reacción química sin recorrer las etapas intermedias de N-carbamoilhomoserina, 4-(2-bromoetil ) -hidantoina y 4- ( 2-metiltioetil ) -hidantoina (fórmulas A - C)


se logra superar las desventajas de los métodos meramente químicos o biotecnológicos directos mencionados.
Estas desventajas se superan en particular si la L-homoserina utilizada se produjo mediante fermentación. Ya se sabe que la L-homoserina se puede producir mediante fermentación de micro-organismos, en particular bacterias de la familia de enterobacteriaceas o corinobacteriaceas , siendo que se usan fuentes de carbono como, por ejemplo, sacarosa, glucosa, fructosa y glicerina o mezclas de estos y fuentes de nitrógeno convencionales como, por ejemplo, amoniaco.
Los ejemplos para la producción microbiana de L-homoserina en los que se usan enterobacteriaceas, en particular Escherichia coli se pueden encontrar en los documentos US 6,303,348 US 6,887,691 ó US 6,960,455 ó EP 1217076 Al.
Los ejemplos para la producción microbiana de L-homoserina en los que se usan corinobacteriaceas, en particular Corynebacterium glutamicum se pueden encontrar en los documentos US 3 , 189 , 526 ó US 3 , 598 , 701 .
Mediante el uso de la L-homoserina que se obtiene por la vía fermentativa se logra circumvenir las materias primas acroleina y ácido cianhídrico mencionadas, relativamente peligrosas.
Pero también puede ser favorable mezclar la L-homoserina obtenida por la vía fermentativa con D,L-homoserina racémica producida por la vía química clásica y utilizar una correspondiente mezcla de D- y L-homoserina que se obtiene para la transformación química, de la cual al final entonces resultan las correspondientes mezclas de D- y L-metionina. Esto puede ser conveniente ante todo si se debe utilizar D-/L-homoserina como sustancia residual de procesos de producción química de la producción de D-/L-homoserina . También es posible usar D-homoserina pura. Esto puede ser favorable en particular si se debe utilizar D-homoserina como sustancia residual de la escisión del racemato de D-/L-homoserina. Pero por lo general el uso de D-homoserina pura solamente es favorable si el objetivo es producir D-metionina.
En cambio, mediante el uso de L-homoserina obtenida por la vía fermentativa se logra llegar directamente a la L-metionina, y esto con el uso de conformidad con la invención de las etapas de proceso químico que no menoscaban la configuración L. Con el uso exclusivo -de L-homoserina se produce finalmente una L-metionina pura que se puede usar directamente para usos farmacéuticos y alimenticios y que también en la alimentación de animales se caracteriza por una bioeficiencia superior en comparación a la D, L-metionina convencional. Este aspecto del método de conformidad con la invención es por lo general de la mayor utilidad.
En un método preferido se usa un producto sólido que contiene L-homoserina que se produjo mediante la extracción del agua de un caldo de fermentación que contiene L-homoserina . Esto tiene la ventaja de que es posible separar los productos secundarios de la fermentación hasta el último paso de purificación en la etapa de la L-metionina, y que por consiguiente es posible ahorrar en gasto de purificación. Opcionalmente también es posible que permanezcan en el producto final los productos secundarios y/o sustancias acompañantes de la fermentación si no perjudican la reacción subsiguiente o incluso son deseados en el producto final . Esto es el caso, en particular, si tienen ellos mismos propiedades nutritivas y la L-metionina se usa para la producción de forraje. En el caso de este tipo de compuestos con actividad nutritiva se puede tratar, por ejemplo, de otros aminoácidos o albúminas .
Por consiguiente también es objeto de la invención un producto mixto de L-metionina y productos secundarios y/o sustancias acompañantes de la producción fermentativa de L- homoserina .
El caldo de fermentación que contiene L-homoserina se produce convenientemente mediante el cultivo de un microorganismo que segrega L-homoserina en un medio de cultivo adecuado.
Como microorganismo se usan preferiblemente bacterias, en particular bacterias de la especie Corynebacterium ó Escherichia.
Además se comprobó que es favorable que la concentración de la L-homoserina en el caldo de fermentación sea de 1 g/1 como mínimo.
Se comprobó inesperadamente que la transformación química de la L- y/o D-homoserina se puede llevar a cabo directamente con metilmercaptano (MeSH) , opcionalmente en presencia de un catalizador ácido. Esto representa la gran ventaja de que una sola etapa química lleva directamente al producto final L-metionina. El metilmercaptano se puede usar en grandes excesos, y el metilmercaptano no consumido se puede a continuación separar y reciclar con facilidad, ya que contrariamente al aminoácido se trata de un compuesto gaseoso a la temperatura ambiente.
En este aspecto resultó ser favorable utilizar 1 a 100, preferiblemente 1 a 50 equivalentes molares de MeSH.
Para acelerar la reacción y aumentar el rendimi-ento se comprobó que es favorable si se usa un catalizador ácido que se selecciona del grupo de los ácidos de Brónstedt con un pka de < 3.
Este tipo de ácidos son por ejemplo HCl, HBr, HI, H2S04, AlkaliHS04, H3P04/ AlkaliH2P04, siendo que álcali representa litio, sodio, potasio, rubidio o cesio, ácido polifosfórico, ácido alquil-Ci-Ci2-sulfónioo, ácido aril-C6-Cio-sulfónico, ácido triflúormetansulfonico, ácido triflúoracetico, o un copolimero de tetrafluoretileno y ácido perfluor-3 , 6-dioxo-4-metil-7-octen-sulfónico (Nafion). El Nafion como catalizador sólido tiene en particular la ventaja de que después de la reacción es fácil de separar de la mezcla reactiva y de reciclar.
Igualmente favorable puede ser utilizar un catalizador de ácido Lewis. En este aspecto se mencionan en particular catalizadores de ácido Lewis con al menos un ácido Lewis de bajo peso molecular que se seleccionan del grupo AICI3, ZnCl2, BF3*OEt2, SnCl2, FeCl3.
También han resultado ser favorables en este aspecto las resinas intercambiadoras de iones intensamente ácidas que igualmente se pueden recuperar muy -bien, en particular una resina de ácido poliestireno sulfórico sustituido, por ejemplo reticulado con divinilbenceno .
Pero también los catalizadores ácidos heterogéneos del grupo de zeolita, montmorillonita y óxido de aluminio que contiene (W03 y CS20) , y se pueden usar de conformidad con la invención. En el caso de los óxidos de aluminio mencionados se prefieren aquellos con contenido de 5-15% de W03 y 5-15% de CS20.
Convenientemente la reacción se lleva a cabo en solución y/o en suspensión, en presencia de agua y/o de un disolvente orgánico. Si la reacción se lleva a cabo en presencia de agua puede ser conveniente partir directamente de una solución de fermentación acuosa que contiene L-homoserina opcionalmente liberada de las fracciones sólidas, ya que de esta manera es posible favorablemente ahorrarse etapas de acondicionamiento adicionales . Pero también se puede usar de manera correspondientemente favorable una L-homoserina cruda que contiene agua.
Así, de conformidad con la invención es posible usar agua y/o al menos un disolvente orgánico de bajo peso molecular que se selecciona del grupo que consta de cetonas de C3 a C6, preferiblemente metilisobutilcetona (MIBK) o acetona, alcoholes de Ci a C4, ésteres de ácido carboxilico C4 a Cío, preferiblemente etiléster o butiléster del ácido acético, amidas de ácido carboxilico C3 a C6, preferiblemente DMF o dimetilacetamida, aromáticos de C6 a Cío, preferiblemente tolueno y carbonatos cíclicos de C3 a C , preferiblemente etilencarbonato, propilencarbonato, butilencarbonato . Pero también el mercaptano utilizado en los excesos correspondientes puede fungir como disolvente o al menos como codisolvente .
De conformidad con otra modalidad preferida de la invención también es posible llevar a cabo un proceso para la transformación química de la L- y/o D-homoserina a metionina de manera que en una primera etapa, mediante la introducción de un grupo perdido Y en el átomo C de la homoserina se produce un compuesto de la fórmula II


en donde Y representa halógeno (= cloro, bromo o yodo) , sulfoniloxi (= p-toluensulfoniloxi) [pTsO] , C6H5S03, H3CSO3, H5C2SO3 ó CF3SO2), sulfato (OSO3H) ó fosfato (OP03H) , y luego el compuesto II se transforma en una segunda -etapa con MeSH para obtener L-metionina, D-metionina o una mezcla correspondiente de L- y D-metionina.
La introducción del grupo perdido Y, si Y = halógeno, favorablemente tiene lugar en la primera etapa mediante la reacción pertinente de la homoserina con PCI5, PCI3, BBr3 , PJ3, POCI3, SOCl2 ó SOBr2.
Si Y es = sulfoniloxi, entonces la introducción del grupo perdido Y tiene lugar de manera pertinente en la primera etapa, y de manera favorable mediante la reacción con cloruro del ácido p-toluensulfónico (p-TsCl) , C6HsS02Cl, H3CSO2CI, H5C2S02C1 ó CF3SO2CI.

Si en cambio Y significa = sulfato, para la introducción del grupo perdido Y se emplean en la primera etapa típicamente de manera pertinente SO3, H2SO4 u óleo, y si el significado de Y es = fosfato preferiblemente se usa el ácido polifosfórico para introducir Y.
Después de la activación de la homoserina mediante la introducción del correspondiente grupo perdido Y en la posición 4 resulta posible, en una etapa siguiente, introducir el grupo Me-S particularmente bien mediante la sustitución de Y.
Esta sustitución convenientemente se lleva a cabo mediante la reacción del compuesto de la fórmula II con MeSH en la presencia de un catalizador básico o ácido.
Como catalizadores básicos son particularmente adecuados NaOH, KOH, piridina, trimetilamina, trietilamina o un acetato, carbonato o hidrocarfoonato de los metales alcalinos o alcalinotérreos , siendo que álcali constituye litio, sodio, potasio, rubidio o cesio y alcalinoterreo constituye magnesio, calcio o bario.
Como catalizadores ácidos son particularmente adecuados HCl, HBr, HI, H2S04, AlkaliHS04, H3P04, AlkaliH2P04, siendo que álcali r-epresenta litio, sodio, potasio, rubidio o cesio, ácido polifosfóri-co, ácido alquil-Ci-Ci2-sulfónico, ácido aril-C6-Cio-sulfónico, ácido triflúormetansulfónico, ácido triflúoracetico, o se usa un copolímero de tetrafluoretileno y ácido perfluor-3 , 6-dioxo-4-metil-7-octen-sulfónico (Nafion) .
La reacción se lleva a cabo preferiblemente en presencia de un disolvente orgánico y/o agua.
Como disolvente orgánico se selecciona preferiblemente un disolvente orgánico de bajo peso molecular que se selecciona del grupo que consiste de cetonas de C3 a e, preferiblemente metilisobutilcetona (MIBK) o acetona, alcoholes de Ci a C4 de cadena recta o ramificados, ésteres de ácido carboxílico C4 a Ci0, preferiblemente etiléster o butiléster del ácido acético, amidas de ácido carboxílico C3 a C6, preferiblemente DMF o dimetilacetamida, aromáticos de C6 a Cío, preferiblemente tolueno y carbonatos cíclicos de C3 a C7( preferiblemente etilencarbonato, propilencarbonato o butilencarbonato .
De conformidad con otra modalidad preferida de la invención, un método para la transformación química de la L-y/o D-homoserina a metionina también se puede llevar a cabo de manera que en una primera etapa, mediante ciclización catalizada con ácido se produce la correspondiente 2-amino-4-butirolactona de la fórmula III ó su sal (fórmula IV)



si-endo que X representa Cl, Br, J, HS04, (S04)i 2, H2PO4, (HP04)i/2, (P04)i/3 ó R ' -S03 (con R ' = metilo, etilo, fenilo, tosilo) , que luego en una segunda etapa se hace reaccionar con MeSH para obtener L-metionina, D-metionina o una mezcla correspondiente de L- y D-metionina. En particular la sal constituye una etapa intermedia estable que se puede almacenar de manera provisional o también transportar, lo cual constituye una ventaja nada despreciable.
Como catalizador ácido son adecuados los ácidos que se seleccionan del grupo que consta de ácidos de Brónstedt con un pka de < 3.
Como catalizador ácido se usan preferiblemente HCl, HBr, Hl, H2S0 , AlkaliHS0 , H3P0 , AlkaliH2P0 , siendo que álcali representa litio, sodio, potasio, rubidio o cesio, ácido polifosfórico, ácido alquil-Ci-Ci2-sulfónico, ácido aril-C6-Cio-sulfónico, ácido triflúormetansulfónico, ácido triflúoracetico, o un copol mero de tetrafluoretileno y ácido perfluor-3 , 6-dioxo-4-metil-7-octen-sulfónico (Nafion) .
Igualmente son adecuadas como catalizador ácido las resinas intercambiadoras de iones intensamente ácidas, y en este aspecto en particular las resinas de ácido poliestirensulfónico opcionalmente sustituidas, preferiblemente reticuladas con divinilbenceno .
De conformidad con la invención también es -posible usar catalizadores ácidos heterogéneos del grupo de óxido de aluminio que contiene (W03 y CS20) , zeolita y montmorillonita .

En el caso de los óxidos de aluminio mencionados se prefieren aquellos con contenido de 5-15% de W03 y 5-15% de CS20.
Igualmente es posible usar catalizadores de ácido Lewis, y en particular ácidos de Lewis de bajo peso molecular seleccionados del grupo AlCl3, ZnCl2, BF3*OEt2, SnCl2, FeCl3, los cuales están disponibles y son económicos.
De conformidad con otra forma preferida de realización de la invención también es posible configurar un método para la transformación química de la homoseguina a metionina de manera que se llevan a cabo las etapas siguientes :
a) N-acilación de la L- y/o D-homoserina con auxilio de un agente de acilación a la N-acil-L- y/o D-homoserina de la fórmula V


en donde el significado de R es = hidrógeno, metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, n-butilo, sec. -butilo, ter. -butilo, fenilo, mono-, di- ó trihaloalquilo, -con halógeno = F ó Cl, preferiblemente CF3 ó CC13, bensiloxi.carbonilo o al-quil-Ci a Ca-oxicarbonilo, preferiblemente ter . -butiloxicarbonilo o metiloxicarbonilo, b) Reacción de la N-acil-homoserina V obtenida en la etapa a) con MeSH en presencia de un catalizador básico o ácido a la N-acil-metionina de la fórmula VI



c) Hidrólisis de la N-acil-L- y/o D-metionina obtenida en la etapa b) a la metionina correspondiente.
En función de la elección precisa de las condiciones de reacción, en la etapa a) o bien se forma primero la correspondiente O-acil-homoserina que a continuación se transpone a N-acil-homoserina V, o V se forma directamente en una etapa.
Para la acilación en la etapa a) se usa preferiblemente un agente de acilación de la fórmula general R-CO-X1, siendo que X1 puede ser = R1COO, OR2 (R2 = metilo o etilo), Cl, Br, y R y R1 pueden ser iguales o diferentes y significar hidrógeno, metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, n-butilo, sec. -butilo, ter. -butilo, fenilo, mono-, di- ó trihaloalquilo, con halógeno = F ó Cl, preferiblemente CF3 ó CC13, bensiloxicarbonilo o alquil-Ci a C4-oxicarbonilo, preferiblemente ter . -butiloxicarbonilo o metiloxicarbonilo .
Como catalizador básico en la etapa b) es posible usar NaOH, KOH, piridina, trimetilamina, trietilamina o un acetato, carbonato o hidrocarbonato de los metales alcalinos o alcalinotérreos , siendo que álcali constituye litio, sodio, potasio, rubidio o cesio y alcalinotérreo constituye magnesio, calcio o bario.
Como catalizador ácido para la etapa b) son adecuados, en particular HC1, HBr, HI, H2SO4, AlkaliHSC>4, H3PO4, AlkaliH2P04, siendo que álcali representa litio, sodio, potasio, rubidio o cesio, ácido polifosfórico, ácido alquil-Ci-Ci2-sulfónico, ácido aril-C6-Cio-sulfónico, ácido triflúormetansulfonico, ácido triflúoracetico, o un copolimero de tetrafluoretileno y ácido perfluor-3 , 6-dioxo-4-metil-7-octen-sulfónico (Nafion) .
De conformidad con otra modalidad preferida de la invención también es posible configurar un método para la transformación química de la homoserina a metionina de manera que se llevan a cabo las etapas siguientes:
a) N-acilación de la L- y/o D-homoserina con auxilio de un agente de acilación a la N-acil-L- y/o D-homoserina de la fórmula V



•en donde R significa hidrógeno, metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, n-butilo, sec. -butilo, ter. -butilo, fenilo, mono-, di- ó trihaloalquilo, con halógeno = F ó Cl, preferiblemente CF3 ó CCI3, bensiloxicarbonilo o alquil-Ci a C4-oxicarbonilo, preferiblemente ter . -butiloxicarbonilo o metiloxicarbonilo,
b) Transformación del compuesto V obtenido en la etapa a) mediante la introducción de un grupo perdido Y en el átomo C4 a un compuesto de la fórmula VI



siendo que Y representa halógeno (= cloro, bromo o yodo) , sulfoniloxi ((= pTsO, C6H5S03, H3CSO3 ó H5C2S03) , sulfato (OS03H) ó fosfato (OPO3H) ,
c) Reacción del compuesto VI obtenido en la -etapa b) con MeSH en presencia de un catalizador básico o ácido a la N-acil-L-metionina, N-acil-D-metionina o una mezcla correspondiente de N-acil-L- y/o D-metionina de la fórmula


d) Hidrólisis de la N-acil-L- y/o D-metionina VII obtenida en la etapa c) a L- y/o D-metionina.
La formación del compuesto V ocurre -en función de la elección precisa de las condiciones de reacción, o bien mediante la transposición de la O-acil-homoserina que se forma primero a la N-acil-homoserina, o mediante una combinación de la lactonización y acilación in situ con subsiguiente abertura del anillo.
Para la acilación en la etapa a) se usa preferiblemente un agente de acilación de la fórmula general R-CO-X1, siendo que X1 es = RxCOO, OR2 (R2 = metilo o etilo), Cl ó Br, y R y R1 pueden ser iguales o diferentes y significar hidrógeno, metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, n-butilo, sec. -butilo, ter. -butilo, fenilo, mono-, di- ó trihaloalquilo, con halógeno = F ó Cl, preferiblemente CF3 ó CC13, bensiloxicarbonilo o alquil-Ci a C4-oxicarbonilo, preferiblemente ter . -butiloxicarbonilo o metiloxicarbonilo .
La introducción del grupo perdido Y, si Y = halógeno, favorablemente tiene lugar de manera pertinente en la primera etapa mediante la reacción de la homoserina con PC13, PC13, BBr3, PJ3, SOCI2 ó SOBr2.
Si Y es = sulfoniloxi, entonces la introducción del grupo perdido Y tiene lugar pertinentemente «n la primera etapa, y de manera favorable mediante la reacción con cloruro del ácido p-toluensul fónico (p-TsCl) , C6H5S02C1, H3CS02C1, H5C2SO2CI ó CF3S02C1. Si en cambio Y significa = sulfato, para la introducción del grupo perdido Y se emplean en la primera etapa típicamente de manera pertinente S03, H2S0 u óleo. Si el significado de Y es = fosfato (OP03H) , en la primera etapa se usa típicamente el ácido polifosfórico para introducir el grupo perdido Y.
Después de la activación de la N-acil-homoserina mediante la introducción del correspondiente grupo perdido Y en la posición 4 resulta posible, en una etapa siguiente, introducir el grupo Me-S de manera particularmente perfecta mediante la sustitución de Y.
Como catalizadores básicos en la etapa c) -es posible usar NaOH, ROH, piridina, trimetilamina, trietilamina o un acetato, carbonato o hidrocarbonato de los metales alcalinos o alcalinotérreos , siendo que álcali constituye litio, sodio, potasio, rubidio o cesio y alcalinotérreo constituye magnesio, calcio o bario.
Como catalizadores ácidos en la etapa c) son adecuados, en particular, HCl, HBr, Hl, H2S04, AlkaliHS04,

H3P04, AlkaliH2P04, siendo que álcali representa litio, sodio, potasio, rubidio o cesio, ácido polifosfórico, ácido alquil- Ci-Ci2-sulfónico, ácido aril-C6-Ci0-sulfónico, ácido triflúormetansulfónico, ácido triflúoracetico, o un copolímero de tetrafluoretileno y ácido perfluor-3 , 6-dioxo-4-metil-7-octen-sulfónico (Nafion) .
De conformidad con otra modalidad preferida de la invención también es posible configurar un método para la transformación química -de la L- y/o D-homoserina a metionina de manera que ss llevan a cabo las etapas siguientes: a) N-acilación y ciclización de la L- y/o D-homoserina con auxilio de un agente de acilacion a la N-acil- L- y/o D-homoserina de la fórmula VIII


en donde R significa hidrógeno, metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, n-butilo, sec. -butilo, ter. -butilo, fenilo, mono-, di- ó trihaloalquilo, con halógeno = F ó Cl, preferiblemente

CF3 ó CCI3, bensiloxicarbonilo o alquil-Ci a C4-oxicarbonilo, preferiblemente ter . -butiloxicarbonilo o metiloxicarbonilo,
b) Reacción de la N-acil-homoserinlactona obtenida en la etapa a) con MeSH en presencia de un catalizador básico o ácido a la N-acil-metionina de la fórmula VII



c) Hidrólisis de la N-acil-L- y/o D-metionina obtenida en la etapa b) a la metionina correspondiente a temperaturas > 95eC.
Para la acilacion en la etapa a) se usa preferiblemente un agente de acilacion de la fórmula general R-CO-X1, siendo que X1 es = R^-COO, OR2 (R2 = metilo o etilo), Cl ó Br, y R y R1 pueden ser iguales o diferentes y significar hidrógeno, metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, n-butilo, sec. -butilo, ter. -butilo, fenilo, mono-, di- ó trihaloalquilo, con halógeno = F ó Cl, preferiblemente CF3 ó CC13, bensiloxicarbonilo o alquil-Ci a C4-oxicarbonilo, preferiblemente ter . -butiloxicarbonilo o metiloxicarbonilo . La N-acetilación en la etapa a) tiene lugar o bien mediante transposición de la O-acil-homoserina que se formó primero a la N-acil-homoserina con subsiguiente cierre de anillo o mediante una combinación de la lactonización que tiene lugar in situ y la N-acilación directa.
Además, en la acilación de la etapa a) se usa preferiblemente como disolvente un ácido carboxílico RCOOH ó R1COOH, siendo que R y R1 tienen el significado indicado en lo precedente, opcionalmente en la presencia de un codisolvente adicional del grupo que consta de cetonas de C3 a C6, preferiblemente MIBK o acetona, ésteres de ácido carboxílico C4 a Cío, preferiblemente etiléster o butiléster del ácido acético, amidas de ácido carboxílico C3 a C6, preferiblemente DMF o dimetilacetamida, aromáticos de C6 a Cío, de preferencia tolueno y carbonatos cíclicos de C3 a C7, preferiblemente etilencarbonato, propilencarbonato ó butilencarbonato.
Como catalizadores básicos en la etapa a) se usan preferiblemente derivados de piridina, preferiblemente dimetilaminopiridina (DMAP) ó carbonildiimidazol .

La etapa a) preferiblemente se lleva a cabo a temperaturas de 20 a 100 a C , en particular de 50 a 90 a C .
Como catalizador básico en la etapa b) se usa preferiblemente un catalizador que se selecciona del grupo que consiste de hidróxidos de tetraalquilamonio con un máximo de 48 átomos de C , hidróxidos, carbonatos, hidrocarbonatos , acetatos de los metales alcalinos o alcalinotérreos , siendo que álcali constituye litio, sodio, potasio, rubidio o cesio y alcalinotérreo constituye magnesio, calcio o bario, aminas terciarias con un máximo de 36 átomos de C y 1 a 4 átomos de N, tetra (alquil-Ci-C4) -guanidina, aminas bicíclicas, preferiblemente DBU (1, 8-diazobiciclo [5.4.0]undec-7-eno) y TBD (1 , 5 , 7-triazabiciclo [4.4.0] dec-5-eno) , piridina y resinas intercambiadores de iones intensamente alcalinas.
Otros catalizadores básicos que se usan preferiblemente en la etapa b) son trialquilaminas de la fórmula general NR3R4R5, siendo que R3, R4 y R5 pueden ser iguales o diferentes y significan un radical alquilo Ci a C12 lineal o ramificado, preferiblemente metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, n-butilo ó sec. -butilo.
Los catalizadores básicos muy particularmente preferidos son N(metilo)3, (metilo) 2 (etilo) ,

N(metil) (etilo) 2, N(etilo)3, N (n-propilo) 3 , N(etil) (i-propil-o)2 ó N (n-butilo) 3 , pero también diazabiciclooctano ( DABCO ) , DBU , TBD , hexametilentetramina , tetrametiletilendiamina ó tetrametilguanidina .
Igualmente se prefieren particularmente como catalizadores básicos R3R4R5R6N-hidróxido, hidróxido -de Li, Na, K, Rb, Cs, hidróxido de Mg, Ca, Ba, siendo que R3, R4 , R5 y R6 pueden ser iguales o diferentes y significan un radical alquilo-Ci a C12 lineal o ramificado, preferiblemente metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, n-butilo o sec. -butilo.
Como catalizadores básicos particularmente preferidos también se usan resinas de poliestireno reticuladas sustituidas en R7R8NR9, siendo que R7, R8 y R9 pueden ser iguales o diferentes y significan un radical alquilo-Ci a C4 lineal u opcionalmente ramificado, preferiblemente metilo, etilo, n-propilo, n-butilo.
Para obtener un desarrollo rápi-do y lo más completo posible de la reacción en la etapa b) , se usan 1 a 20 equivalentes molares de base, calculada como hidróxido o respectivamente equivalente N, preferiblemente 1 a 10 equivalentes molares de base.
Pero si en la etapa b) se usa un catalizador ácido, entonces es favorable utilizar un catalizador ácido que se selecciona del grupo que consta de ácidos de Brónstedt con un pka de < 3 ó ácidos de Lewis .
Como catalizadores ácidos se usan preferiblemente HC1, HBr, HI, H2S04, AlkaliHS0 , H3PO4, Alkalie2P04 , si-endo que álcali representa litio, sodio, potasio, rubidio o cesio, ácido polifosfórico, ácido alquil-Ci-Ci2-sulfónico, ácido aril-C6-Cio-sulfónico, ácido triflúormetansulfónico, ácido triflúoracetico, o un copolímero de tetrafluoretileno y ácido perfluor-3 , 6-dioxo-4-metil-7-octen-sulfónico (Nafion) .
Pero como catalizadores ácidos también es posible usar resinas intercambiadores de iones intensamente ácidas, las cuales son fáciles de separar después de haber tenido lugar la reacción.
Preferiblemente se usan resinas de ácido poliestirensulfónico preferiblemente reticuladas con divinilbenceno, opcionalmente sustituidas.
También es posible usar catalizadores ácidos heterogéneos del grupo de óxido de aluminio que contiene (W03 y CS20) , zeolita y montmorillonita . En el caso de los óxidos de aluminio mencionados se prefieren aquellos con contenido de 5-15% de W03 y 5-15% de CS20.
Aquí también se usan favorablemente los catalizadores de ácido Lewis.
Como ácido Lewis se prefiere un ácido Lewis de bajo peso molecular que se seleccionan del grupo AlCl3, ZnCl2, BF3*OEt2, SnCl FeCl3.
También es favorable que la reacción en la etapa b) se lleve a cabo en solución y/o en suspensión, en un disolvente orgánico .
Como disolvente es posible usar agua y/o al menos un disolvente orgánico de bajo peso molecular que se selecciona del grupo que consta de cetonas de C3 a C6, preferiblemente MIBK o acetona, alcoholes de Ci a C4 de cadena recta o ramificada, ésteres de ácido carboxílico C4 a Cío, preferiblemente etiléster o butiléster del ácido acético, amidas de ácido carboxíli-co C3 a C6, preferiblemente DMF o dimetilacetamida, aromáticos de C6 a Cío, preferiblemente tolueno y carbonatos cíclicos de C3 a C7, preferiblemente etilencarbonato, propilencarbonato ó butilencarbonato.
La hidrólisis en la etapa c) se puede llevar a cabo en solución y/o suspensión acuosa.
Sin embargo, adicionalmente también . puede ser favorable si se usa adicionalmente al menos un disolvente orgánico de bajo peso molecular que se selecciona del grupo que consta de cetonas de C3 a C6, preferiblemente MIBK o acetona, alcoholes de Ci a C4 de cadena recta o ramificada, ésteres de ácido carboxílico C4 a Cío, preferiblemente etiléster o butiléster del ácido acético, amidas de ácido carboxílico C3 a C6, preferiblemente DMF o dimetilacetamida, aromáticos de C6 a Cío, preferiblemente tolueno y carbonatos cíclicos de C3 a C7, preferiblemente etilencarbonato, propilencarbonato ó butilencarbonato.
La reacción en la etapa c) se lleva a cabo por lo general a una temperatura de 90 a 1-80 SC, preferiblemente de 100 a 1609C, en particular de 120 a 150 SC, de manera muy particularmente preferida de 130 a 140 SC.
Para acelerar la reacción de hidrólisis en la etapa c) se puede trabajar adicionalmente en presencia de un catalizador ácido, básico o de ácido Lewis, o una combinación de catalizador ácido y de ácido Lewis.
Un proceso de metionina que incluye una combinación de etapas biotecnológicas y químicas de conformidad con la invención tiene en total varias ventajas en comparación con un proceso convencional, en particular con relación a la necesidad mencionada de un proceso seguro más económico que además debe proporcionar L-metionina.
Primero, el uso de azúcar en lugar de propeno (ó respectivamente acroleína) permite que la producción de metionina se pueda configurar más económico, por una parte en lo que se refiere a los costos actuales de las materias primas y por otra parte debido a la independencia que se logra de los costos del petróleo que van continuamente -en aumento .
En segundo lugar el azúcar utilizado constituye una materia prima renovable, de manera que aquí se hace una valiosa aportación al cuidado de los recursos. Además, los azúcares son mucho menos peligrosos que los productos intermedios industrial-es acroleína y ácido cianhídrico, de manera que la sustitución de estas materias primas por azúcar como componente reducen notablemente el potencial de riesgo de un proceso de producción y con ello se aumenta la seguridad.
En tercer lugar la combinación de una etapa de fermentación que permite la producción enant iomérica específica de L-homoserina permite la transformación de L-homoserina a L-metionina sin racemación con adecuadas etapas de proceso químicas comparativamente benignas, de -esta manera conduce a una L-metionina enant ioméricamente pura. Como se mencionó, la L-metionina tiene una mayor biodisponibilidad en comparación con la D , L-metionina que actualmente se produce.
En cuarto lugar, la elaboración de L-metionina enant ioméricamente pura con un proceso de producción combinado del tipo precedentemen e descrito permite superar elegantemente los problemas mencionados al principio de los que adolece la producción de L-metionina por la vía meramente biotecnológica .
Los siguientes ejemplos de conformidad con la invención sirven para explicar con más detalle la invención, más de ninguna manera deberán imitar de manera alguna la invención.
Transformación directa de L-homoserina a L-metionina Ej emplo 1
Transformación con un catalizador heterogéneo (7-10% WO3/7-10% de Cs20 sobre vehículo de Αΐ2(¼ - fabricante - Degussa) .


La L-homoserina (de producción biotecnológica) y el catalizador heterogéneo finamente molido se prepararon en el autoclave y como líquido se adicionó MeSH. El autoclave se calentó a continuación a 140 aC durante 2 .5 h. Después de la distensión y la eliminación del MeSH se lavó con una solución acuosa de NaOH al 20% . La filtración y análisis HPLC subsiguiente dio por resultado un rendimiento de 3% de la teoría de L-metionina.
Para comparación : una prueba análoga con vehículo de Al203 puro solo dio por resultado trazas de metionina .
Ej emplo 2
Reacción con i-propiltiol ( iPrSH) y ácido/ácido de Lewis
(no entra dentro de las reivindicaciones )



(1)
El iPrSH ( 20 mi ) se gasearon lentamente con HBr . A continuación se adicionaron L-homoserina ( 10 mmol ) y la mezcla se agitó 10 minutos . Después de esto se adicionaron AlCl3 ( 40 mmol ) y la mezcla de la reacción se agitó 4 h a la temperatura ambiente. La mezcla de la reacción se enfrió bruscamente con H20/HC1 y luego se ajustó básica con NaOH. Después de separar por succión el Al (OH) 3 la solución filtrada se concentró a sequedad y se analizó mediante HPLC. Rendimiento de (1) = 8.2%.
Activación de L-homoserina en el átomo C-4 y transformación a
L-metionina
Ejemplo 3
Activación mediante sulfato con subsiguiente sustitución
nucleófila mediante NaSMe:



(2)
Se mezclaron L-homoserina (19.4 mmol) con H2S0 (10 mi) concentrado bajo enfriamiento. La mezcla de la reacción que se produce se agitó durante 30 minutos hasta que se disolvió la homoserina. A continuación la solución se dejó reposar 3 horas a la temperatura ambi-ente. Después de esto la solución de la reacción se vertió en 800 mi de dietiléter enfriado a -78 SC, se agitó bien y la solución sobrenadante se decantó. El producto sólido se lavó 3 veces con respectivamente 200 mi de dietiléter a -78SC. Después de separar por succión el producto sólido blanco-amarillo, -este se secó durante 2 horas en el vacio de la bomba de aceite. Rendimiento de éster de sulfato (2): 88.0% El éster de sulfato (19 mmol) se disolvió en DMSO (20 mi) y se mezcló con NaSMe (50 mmol) . Esta solución de reacción se agitó a 80eC y después de 90 minutos se analizó mediante HPLC - rendimiento de L-metionina: 19.6%. La repetición de la prueba en N-metilpirrolidona (NMP) como disolvente dio por resultado 33.6% de L-metionina después de 10 minutos. Ciclización de L-homoserina y transformación sucesiva
a L-metionina
Ej emplo 4
Producción de sal de clorhidrato de 2-amino-4- butirolactona
Activación mediante formación de la toma con subsiguiente sustitución nuoleófila mediante eSH


La L-homoserina (0.84 mol) se mezcló con 600 mi de HC1 (6.1 mol) concentrado. La solución se agitó durante aproximadamente 15 minutos hasta que todo se disolvió, y a continuación el agua se eliminó al vacío durante 1.5 horas. El residuo se secó. Rendimiento: 99% de sal del clorhidrato de 2-amino-4-butirolactona .

Ejemplo 5
Transformación de la sal del clorhidrato de 2-amino-4-butirolactona
a L-metionina


La sal de clorhidrato de 2-arnino-4-butirolactona (22 mmol) se preparó en el autoclave en ácido etansulfónico (0.2 mol) saturado de HC1, y a esta mezcla se le adicionó MeSH (0.83 mol) en forma líquida. A continuación el autoclave se cerró y se calentó S horas a 709C. Después de la distinción y el enfriamiento la mezcla de la reacción se analizó mediante HPLC. El rendimiento de L-metionina fue de 21%.
Ejemplo 6
Transformación de la sal de hidrobromuro de 2-amino-4-butirolactona a
L-metionina



En autoclave de alta presión se le adicionó cuidadosamente bromuro de aluminio (75 mmol) a MeSH (50 mi) . A continuación se adicionó la sal de bromuro de la aminolactona <adquirida de la Cía. Aldrich) (25 mmol) . El autoclave se agitó 1 hora a la temperatura ambiente, y tras esto 2 horas a 40SC. El autoclave se enfrió y distendió. Después de retirar el MeSH el residuo se enfrió bruscamente con agua y el valor pH se ajustó básico con NaOH. El sedimento que se produjo se eliminó por filtración. El rendimiento de metionina fue de 33%.
Ejemplo 7
Transformación de la sal de clorhidrato de la 2-amino-4-butirolactona a
ácido 2-amino-4-mitiltiobutírico
- ♦


La sal de cloruro de aminolactona (10 mmol) asi como AlCl3 (30 mmol) se prepararon en un autoclave y se mezclaron y agitaron lentamente con MeSH <30 mi) . A continuación la mezcla se agitó durante 71 horas a la temperatura ambiente. Después de enfriar bruscamente la mezcla de la reacción con agua, se determinó mediante HPLC que el rendimiento de ácido 2-amino-4-metiltiobutírico fue de 27%.
Ejemplo 8
Transformación de la sal de clorhidrato de la 2-amino-4- butirolactona a ácido 2-amino-4-isopropiltiobutírico
(no cae dentro de las reivindicaciones


El i-propiltiol (iPrSH, 2Ό mi) se mezcló y agitó con AICI3 {30 mmol) . A -continuación se adicionó la sal de cloruro de la aminolactona (10 mmol) y la mezcla se agitó 24 horas a la temperatura ambiente. Después de enfriar bruscamente la mezcla de la reacción con agua se determinó mediante HPLC que el rendimiento de ácido 2-amino-4-isopropiltiobut rico fue de 77%.
Ejemplo 9
Transformación de la sal de clorhidrato de la 2-amino-4- butirolactona a L-metionina
- ♦



La sal de clorhidrato de 2-amino-4-butirolactona (70 mmol) y TBD ( 1 , 5 , 7-triazabiciclo [4.4.0] dec-5-eno) (140 mmol) se prepararon en el autoclave y se adicionó MeSH líquido. El autoclave cerrado se calentó durante 2.5 horas a 70eC. A continuación el autoclave se enfrió levemente y se distendió. Se retiró el MeSH y el residuo se analizó mediante HPLC. El rendimiento de L-metionina fue de 21%
Ejemplo 10
Ciclizacion de L-homoserina y N-acilación a N-acil-2-amino-4- butirolactona y transformación sucesiva a N-acil-L-metionina
(etapa previa de L-metionina)



Se suspendió L-homoserina (2 mol) en 900 mi de anhídrido acético y se mezcló con la cantidad de una punta de espátula de dimetilaminopiridina (ΕΜΆΡ) . Se calentó lentamente a 60SC. Después de aproximadamente 1 hora la temperatura aumentó rápidamente a 1009C. A continuación la mezcla de la reacción se agitó 90 minutos a 802C y se concentró a sequedad al vacío. El aceite amarillo obtenido se absorbió en isopropanol (600 mi) y se dejó reposar durante la noche a 0eC. Los cristales que se produjeron se filtraron, se lavaron con isopropanol frío y se secaron al vacío. El rendimiento fue de 60% de N-acetil-2-amino-4-butirolactona aislada, la pureza fue de 99% (conforme a HPLC) .
A continuación la N-acetil-2-aminobutirolactona (1 equivalente) se hizo reaccionar en MeSH con diferentes bases para obtener N-acetilmetionina. Una mezcla de N-acetilaminolactona, base y MeSH (14 equivalentes) se calentó en autoclave cerrado. Después de enfriar, distender y eliminar -el MeSH el aceite remanente se analizó mediante HPLC. Otros detalles así co o el rendimiento de N-acetil-L-metionina obtenido se encuentran listados en la tabla siguiente:


Tetrametilguanidina, ** 1 , 5 , 7-triazabicicloí 4.4.0]dec-5--eno Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.